Sejtfelszíni receptor minták mint lehetséges diagnosztikai eszközök = Cell surface receptor patterns as potential diagnostic tools

Modern biofizikai módszerek kombinált alkalmazásával (FRET, konfokális mikroszkópia, fluoreszcencia korrelációs spektroszkópia, stb.) a T sejtes immunválaszban résztvevő kulcsfontosságú membránfehérjék sejtfelszíni elrendeződését, asszociációs mintázatait, kölcsönhatásait tanulmányoztuk. A kialakuló mintázatok a jelátvitel egyes lépéseinek szervezése révén alapvetően befolyásolják a sejtek fiziológiás működését, másrészről potenciális terápiás célpontok lehetnek. Megalkottuk az IL-2/15R rendszer dinamikus heterotetramer modelljét: a releváns citokin kötődése a receptor alegységek átrendezésével alakítja ki a megfelelő nagy affinitású heterotrimert. Kimutattuk, hogy az IL-2/15R és az MHC molekulák közös szuperklasztereket alkotnak a T sejtek lipid tutajaiban. Jurkat T sejteken és aktivált CTL-eken kimutattuk a Kv1.3 káliumcsatornák és a TCR kolokalizációját. A CTL-target sejt kölcsönhatás során a CTL-ek Kv1.3 csatornái feldúsulnak a két sejt közötti immunológiai szinapszisban, felvetve a TCR és a Kv1.3 kölcsönös szabályozásának lehetőségét. A korábban limfoid és kolorektális karcinóma sejteken feltárt, az MHC I, II és az ICAM-1 részvételével kialakuló asszociációs mintázatok jelenlétét uveális melanóma sejteken is kimutattuk. RNS interferencia felhasználásával igazoltuk, hogy a kolorektális karcinóma sejteken az MHC I és ICAM-1 klasztereit és domén szintű elrendeződését e két fehérje relatív expressziós szintje dinamikus módon szabályozza. | We investigated the cell surface distribution, association motifs and interactions of key membrane proteins involved in T cell mediated immune responses by applying modern biophysical techniques (FRET, confocal microscopy, fluorescence correlation spectroscopy, etc.). The studied protein patterns have a profound influence on the physiological function of the cells via organizing certain signaling steps, and may serve as potential therapeutic targets. We proposed a dynamic heterotetrameric model for the IL-2/15R system: binding of the cytokine rearranges the receptor subunits to form the relevant heterotrimeric high affinity receptor. We demonstrated that IL-2/15 receptors and MHC glycoproteins form superclusters in lipid rafts of T cells. We showed that Kv1.3 K+ channels and TCR are colocalized on Jurkat T cells and CTLs. Kv1.3 channels are enriched in the immune synapse formed between the CTL and the target cell, raising the possibility of reciprocal regulation of TCR and Kv1.3. We identified association patterns of MHC I, II and ICAM-1 on uveal melanoma cells similar to those previously found on lymphoid and colorectal carcinoma cells. By using RNA interference we demonstrated that the clusterization and interaction of MHC I and ICAM-1 are dynamically regulated by the relative expression levels of these proteins

Perrin and Förster unified: dual-laser triple-polarization FRET (3polFRET) for interactions at the Förster-distance and beyond

K

Multiple Binding Sites for Melatonin on Kv1.3

AbstractMelatonin is a small amino acid derivative hormone of the pineal gland. Melatonin quickly and reversibly blocked Kv1.3 channels, the predominant voltage-gated potassium channel in human T-lymphocytes, acting from the extracellular side. The block did not show state or voltage dependence and was associated with an increased inactivation rate of the current. A half-blocking concentration of 1.5mM was obtained from the reduction of the peak current. We explored several models to describe the stoichiometry of melatonin-Kv1.3 interaction considering one or four independent binding sites per channel. The model in which the occupancy of one of four binding sites by melatonin is sufficient to block the channels gives the best fit to the dose-response relationship, although all four binding sites can be occupied by the drug. The dissociation constant for the individual binding sites is 8.11mM. Parallel application of charybdotoxin and melatonin showed that both compounds can simultaneously bind to the channels, thereby localizing the melatonin binding site out of the pore region. However, binding of tetraethylammonium to its receptor decreases the melatonin affinity, and vice versa. Thus, the occupancy of the two separate receptor sites allosterically modulates each other

A transzmembrán jelátvitel integrált szabályozása: Ca2+-, K+-csatornák és interleukin-receptorok közötti interakciók = An integrated regulation of transmembrane signalling: interactions between Ca2+, K+ channels and interleukin receptors

Projektünk célkitűzése a transzmembrán jelátvitelben résztvevő egyes receptorok és ioncsatornák működésének multidiszciplináris megközelítése volt. Kimutattuk a TASK-3 K+-csatorna expresszióját és döntően mitokondriális lokalizációját melanoma malignum, ill. malignus transzformációt nem mutató sejteken egyaránt. Jellemeztük a dendritikus sejtek (DS) érése és ioncsatorna expressziója közötti kapcsolatot. Feltártuk, hogy az elsődleges Ca2+ jelátviteli utat a CRAC csatornák biztosítják, függetlenül a DS-ek differenciáltsági fokától. Tanulmányoztuk az ic. Ca2+ homeosztázis és a purinerg jelátvitel kapcsolatát ingerlékeny és nem-ingerlékeny sejteken és karakterizáltuk a folyamatban szerepet játszó purinoreceptorok típusát. Kimutattuk, hogy az SR-ban kifejeződő Trisk 95 fehérje negatívan szabályozza a RyR funkcióját; így mind a lokális, mind pedig a globális Ca2+-jelek kialakulását gátolja. Rámutattunk, hogy a közös gamma receptorcsaládba tartozó IL-2/15 és -9 receptorok sejtfelszíni szerveződését feltehetően azonos rendező elvek alakítják ki. Tanulmányoztuk a T sejtek membránpotenciálját meghatározó Kv1.3 K+-csatorna immunszinapszis-beli lokalizációjának funkcionális következményeit. Kidolgoztunk egy újfajta FRET mérési módszert, amivel az IL-2 útvonal által aktivált transzkripciós faktorok konformációját határoztuk meg. Eredményeink hozzásegítenek a T-sejtes immunválasz mechanizmusának megértéséhez. | The main aim of our project was to characterize selected receptors and ion channels in transmembrane signaling processes using a multidisciplinary approach. We detected expression and mainly mitochondrial localization of TASK-3 K+-channels both in malignant melanomas and benign melanocytes. We described the relationship between maturation and ion channel expression in dendritic cells (DCs). We showed that the primary Ca2+ signaling pathway is mediated by CRAC channels, independent of the degree of maturation. We studied the connection between Ca2+ homeostasis and purinerg signaling in excitable and non-excitable cells, and characterized the type of purinerg receptors involved in this process. We demonstrated that the Trisk 95 protein expressed in the SR negatively regulates RYR function; thus it inhibits the generation of both local and global Ca2+ signals. We revealed that the cell surface organization of the members of the common gamma chain family, IL-2/15 and 9 receptors, is probably organized by the same general principles. We studied the functional consequences of the localization of Kv1.3 K+ channels in the immune synapse. We elaborated a new FRET method, by which we described the conformation of transcription factors induced by the IL-2 pathway. Our results contribute to understanding the mechanism of T cell mediated immune responses

Identification of Novel Pathogenic Sequence Variants of the Mismatch Repair Genes During Screening for Lynch Syndrome in a Single Centre of Eastern Hungary

kz

Emelkedő anyai életkor részesedése a császármetszés-frekvencia növekedésében

L

Large fetal weight alone in Robson-1 parturients doesn't translate into a risk of Caesarean delivery higher then that of a vaginal birth

L

Szülés módja és neonatális eredmények: terminuson túl szinguláris fejvégű magzattal spontán vajúdó, először szülő nők körében

L