Effect of glucocorticoid receptor modulation in prostate cancer progression

El cáncer de próstata (CaP) es la segunda causa de muerte por cáncer entre los hombres occidentales y una de las estrategias terapéuticas actualmente utilizadas es la ablación de andrógenos. Sin embargo esta terapia resulta ineficaz en los estadios avanzados de los tumores, cuando se vuelven refractarios al tratamiento (cáncer de próstata resistente a la castración o CRPC). Entre las varias opciones terapéuticas para el CRPC, se pueden utilizar los glucocorticoides (GC) porque tienen un efecto inhibitorio parcial sobre la producción de andrógenos por la glándula adrenal. Los GC se han usado en el tratamiento del CaP para retardar la progresión de la enfermedad y controlar el dolor y los efectos colaterales de la terapia. Sin embargo, estos compuestos tienen el potencial de estimular el crecimiento del CaP vía el receptor de andrógenos (AR) mutado o el mismo receptor de glucocorticoides (GR). Hemo oxigenasa-1 (HO-1) es la enzima limitante en la degradación del grupo hemo y tanto su expresión como actividad pueden ser inducidas de forma específica por Hemina. En trabajos previos de nuestro laboratorio demostramos que la sobreexpresión de HO-1 en líneas de CaP disminuye su proliferación, invasión y migración in vitro y el crecimiento tumoral y angiogénesis in vivo. Además, reportamos que HO-1 inhibe la actividad transcripcional del receptor de andrógenos en el CaP interfiriendo con la vía de STAT3. En este trabajo de tesis nos propusimos evaluar la vía de GR y su modulación por HO-1, e identificar los procesos celulares alterados que median la progresión del CaP. Para ello realizamos los siguientes tratamientos: Hemina (80 μM, 24 h), Dexametasona (1x10-8 M, 6 h), la combinación de ambas drogas o PBS como control. Observamos que el tratamiento con Dexametasona no modificó la viabilidad de las líneas celulares PC3 (AR-/GR+) y C4-2B (AR+/GR+), mientras que el cultivo en presencia de Hemina disminuyó la viabilidad. En ambas líneas, además de corroborar que Hemina aumentaba la expresión génica (p<0,05) y los niveles proteicos de HO-1, se comprobó que reducía significativamente la expresión de NR3C1 (gen codifica para GR; p<0,01) y afectaba la expresión de distintos genes blanco de GR. El tratamiento con Dexametasona indujo los niveles de GR en ambas líneas celulares. Mediante ensayos con genes reporteros evidenciamos que Dexametasona aumentaba la actividad transcripcional de GR (p<0,01). Sin embargo, en la línea PC3 este efecto fue revertido parcialmente por el pre-tratamiento con Hemina (p=0,02). También, observamos que HO-1 y GR co-inmunoprecipitaban tanto en núcleo como en citoplasma. Por inmunofluorescencia, pudimos ver que la presencia de Dexametasona aumentó la localización nuclear de GR; sin embargo, en el pre-tratamiento con Hemina el receptor quedó parcialmente retenido en el citoplasma (p=1x10-7). Al estudiar laexpresión proteica de las inmunofilinas FKBP51 y FKBP52, se observó un aumento significativo de FKBP51 en las células tratadas con Hemina+Dexametasona, lo que podría explicar la retención parcial en citoplasma de GR en estas condiciones. Por análisis bioinformático no se hallaron elementos de respuesta a GR en el gen HMOX1. Dado el alto índice de metástasis óseas en el CaP, células PC3 pre-tratadas o no con Hemina, se co-cultivaron con la línea MC3T3 (preosteoblastos murinos). Observamos que el co-cultivo aumentó la expresión de NR3C1 tanto en las células tumorales como en las progenitoras óseas. Con el objetivo de analizar el efecto de los tratamientos con Hemina y Dexametasona in vivo, generamos tumores s.c. de células PC3 creciendo como xenotransplantes en ratones nude. Cuando los tumores alcanzaron un volumen aproximado de 150 mm3, los animales se inyectaron i.p. cada 48 h con 6 dosis de los siguientes tratamientos: Hemina (25 mg/kg), Dexametasona (0,2 mg/kg), Hemina+Dexametasona (misma dosis tratamientos individuales) o PBS (control). Los animales fueron sacrificados 24 h luego de la última dosis. Observamos que la administración i.p. de Hemina en ambos tratamientos muestra una tendencia hacia el aumento del crecimiento tumoral, mientras los tumores de ratones tratados con Dexametasona sola crecieron de forma similar a los del grupo control. Sin embargo, las diferencias no resultaron significativas probablemente debido al número limitado de animales incluidos (n=7 por grupo). El estudio de la expresión de HO-1 y GR por inmunohistoquímica reveló la ausencia de marcación para HO-1 en los tumores de todos los grupos y tinción positiva de HO-1 en los macrófagos infiltrantes al tumor. Para GR se observó una fuerte inmunorreactividad nuclear en los tumores de los grupos Hemina y Dexametasona. Al analizar lisados tumorales totales por Western Blot, se comprobó que la administración de Dexametasona sola o conjuntamente con Hemina causó un aumento significativo de HO-1. A nivel génico, se observó una disminución significativa en la expresión de NR3C1 en los tumores tratados con Dexametasona respecto a los controles (p=0,02), sin evidenciarse cambios en los niveles de HMOX1. Con el objetivo de estudiar la expresión de HMOX1 y NR3C1 en tumores humanos, utilizamos datos de RNAseq obtenidos de repositorios públicos. Los análisis revelaron que los pacientes con alta expresión de ambos genes presentan menor sobrevida libre de enfermedad y de recaída que aquellos pacientes que expresan niveles bajos.Prostate cancer (CaP) is the second cause of cancer-related deaths among occidental men and one of the therapeutic strategy currently used is androgen deprivation. However, this therapy is not efficient in advanced tumours, when they become treatment refractory (castration resistant prostate cancer or CRPC). Among the many therapeutic options for CRPC, glucocorticoids (GC) are usually used because of their partial inhibitory effect on adrenal androgen synthesis. GC have been used in CaP to delay its progression and to control therapy-related pain and side effects. Nevertheless, this drugs are able to stimulate CaP growth via mutated androgen receptor (AR) or glucocorticoid receptor (GR). Heme oxygenase-1 (HO-1) is the limiting rate heme degradation enzyme, and its expression and activity can be specifically induced by Hemin. In previous reports from our group we showed that HO-1 overexpression in CaP cell lines can reduce proliferation, invasion and migration in vitro and, tumor growth and angiogenesis in vivo. We also reported that HO-1 inhibits AR transcriptional activity in CaP by interfering in STAT3 signalling. In this thesis, we studied GR signalling pathway and its modulation by HO-1, to identify the altered cellular processes that lead to CaP progression. Therefore, we performed the following treatments: Hemin (80 μM, 24 h), Dexamethasone (1x10-8 M, 6 h), the combination of both drugs or PBS as control. We found that Dexamethasone did not affect the viability of the cell lines PC3 (AR-/GR+) or C4-2B (AR+/GR+), while the presence of Hemin reduced this parameter. In both cell lines we confirmed that Hemin treatment increased HO-1 gene expression (p<0.05) and protein levels. We also demonstrated that Hemin significantly reduced NR3C1 levels (p<0.01; encodes for GR) and affected the expression of different GR downstream targets. In both cell lines Dexamethasone treatment induced GR levels. Using reporter genes assays we showed that Dexamethasone significantly increased GR transcriptional activity (p<0.01). However, this effect was partially reverted by Hemin pre-treatment in PC3 cells (p=0.02). We observed that HO-1 and GR co-immunoprecipitated in the nucleus and in the cytoplasm. We showed that Dexamethasone treatment increased GR nuclear localization using immunofluorescence microscopy; while Hemin pre-treatment partially abolished GR nuclear translocation (p=1x10-7). When immunophilins FKBP51 and FKBP52 were studied, we evidenced a significant increase of FKBP51 protein level in Hemin+Dexamethasone treated cells, and this could possibly account for the partial GR cytoplasmic retention under this experimental condition. No GR response element was found in HMOX1 gene using bioinformatics. Given that CaP usually metastasize to bone, PC3 cells pre-treated or not with Hemin were co-cultured with MC3T3 cells (murine preosteoblastic cell line). We observed that co-culture augmented NR3C1 levels in both tumour and bone progenitor cells. Aiming to study the effect of Hemin and Dexamethasone treatment in vivo, we generated s.c. PC3 tumours growing as xenografts in nude mice. When tumours reached a volume around 150 mm3, the animals were i.p. injected every 48 h with 6 doses of the following treatments: Hemin (25 mg/kg), Dexamethasone (0.2 mg/kg), Hemin+Dexamethasone (same doses that individual treatments) or PBS (control). The animals were sacrificed 24 h after the last dose. We observed that i.p. Hemin administration seemed to increase the tumour growth, while those treated with Dexamethasone alone grew similarly to controls. However, there were no significant differences probably due to the limited number of animals included (n=7 per group). By immunohistochemistry analysis, we demonstrated no positive staining for HO-1 in tumours, but high HO-1 reactivity was detected in macrophages infiltrating the tumours. High nuclear immunoreactivity for GR was observed in Hemin and Dexamethasone treated tumours. The analysis of total tumour lysates by Western Blot, revealed HO-1 levels significantly increased in animals treated with Dexamethasone. Further at the transcription level, we observed reduced expression of NR3C1 in those tumours treated with Dexamethasone (p=0.02), with no changes in HMOX1 levels. To study NR3C1 and HMOX1 expression in human tumours, we used RNAseq data from public repositories. The analyses showed that patients expressing high levels of both genes have lower disease-free survival and lower relapse-free survival than those patients that express low levels. In summary, our in vitro and in vivo results suggest an association and a possible modulation between HO-1 and GR pathways.Fil: Leonardi, Daiana Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Heme Oxygenase 1 Impairs Glucocorticoid Receptor Activity in Prostate Cancer

Glucocorticoids are used during prostate cancer (PCa) treatment. However, they may also have the potential to drive castration resistant prostate cancer (CRPC) growth via the glucocorticoid receptor (GR). Given the association between inflammation and PCa, and the anti-inflammatory role of heme oxygenase 1 (HO-1), we aimed at identifying the molecular processes governed by the interaction between HO-1 and GR. PCa-derived cell lines were treated with Hemin, Dexamethasone (Dex), or both. We studied GR gene expression by RTqPCR, protein expression by Western Blot, transcriptional activity using reporter assays, and nuclear translocation by confocal microscopy. We also evaluated the expression of HO-1, FKBP51, and FKBP52 by Western Blot. Hemin pre-treatment reduced Dex-induced GR activity in PC3 cells. Protein levels of FKBP51, a cytoplasmic GR-binding immunophilin, were significantly increased in Hemin+Dex treated cells, possibly accounting for lower GR activity. We also evaluated these treatments in vivo using PC3 tumors growing as xenografts. We found non-significant differences in tumor growth among treatments. Immunohistochemistry analyses revealed strong nuclear GR staining in almost all groups. We did not observe HO-1 staining in tumor cells, but high HO-1 reactivity was detected in tumor infiltrating macrophages. Our results suggest an association and crossed modulation between HO-1 and GR pathways.Fil: Leonardi, Daiana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Anselmino, Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Brandani, Javier Nahuel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Jaworski, Felipe Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Paez, Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Mazaira, Gisela Ileana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Meiss, Roberto P.. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Nuñez, Myriam. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Físico Matemática; ArgentinaFil: Nemirovsky, Sergio Ivan. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Giudice, Jimena. McAllister Heart Institute; Estados Unidos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. University of North Carolina; Estados UnidosFil: Galigniana, Mario Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; ArgentinaFil: Pecci, Adali. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Gueron, Geraldine. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Vazquez, Elba Susana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Cotignola, Javier Hernan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentin

Effect of glucocorticoid receptor modulation in prostate cancer progression

El cáncer de próstata (CaP) es la segunda causa de muerte por cáncer entre los hombres occidentales y una de las estrategias terapéuticas actualmente utilizadas es la ablación de andrógenos. Sin embargo esta terapia resulta ineficaz en los estadios avanzados de los tumores, cuando se vuelven refractarios al tratamiento (cáncer de próstata resistente a la castración o CRPC). Entre las varias opciones terapéuticas para el CRPC, se pueden utilizar los glucocorticoides (GC) porque tienen un efecto inhibitorio parcial sobre la producción de andrógenos por la glándula adrenal. Los GC se han usado en el tratamiento del CaP para retardar la progresión de la enfermedad y controlar el dolor y los efectos colaterales de la terapia. Sin embargo, estos compuestos tienen el potencial de estimular el crecimiento del CaP vía el receptor de andrógenos (AR) mutado o el mismo receptor de glucocorticoides (GR). Hemo oxigenasa-1 (HO-1) es la enzima limitante en la degradación del grupo hemo y tanto su expresión como actividad pueden ser inducidas de forma específica por Hemina. En trabajos previos de nuestro laboratorio demostramos que la sobreexpresión de HO-1 en líneas de CaP disminuye su proliferación, invasión y migración in vitro y el crecimiento tumoral y angiogénesis in vivo. Además, reportamos que HO-1 inhibe la actividad transcripcional del receptor de andrógenos en el CaP interfiriendo con la vía de STAT3. En este trabajo de tesis nos propusimos evaluar la vía de GR y su modulación por HO-1, e identificar los procesos celulares alterados que median la progresión del CaP. Para ello realizamos los siguientes tratamientos: Hemina (80 μM, 24 h), Dexametasona (1x10-8 M, 6 h), la combinación de ambas drogas o PBS como control. Observamos que el tratamiento con Dexametasona no modificó la viabilidad de las líneas celulares PC3 (AR-/GR+) y C4-2B (AR+/GR+), mientras que el cultivo en presencia de Hemina disminuyó la viabilidad. En ambas líneas, además de corroborar que Hemina aumentaba la expresión génica (p<0,05) y los niveles proteicos de HO-1, se comprobó que reducía significativamente la expresión de NR3C1 (gen codifica para GR; p<0,01) y afectaba la expresión de distintos genes blanco de GR. El tratamiento con Dexametasona indujo los niveles de GR en ambas líneas celulares. Mediante ensayos con genes reporteros evidenciamos que Dexametasona aumentaba la actividad transcripcional de GR (p<0,01). Sin embargo, en la línea PC3 este efecto fue revertido parcialmente por el pre-tratamiento con Hemina (p=0,02). También, observamos que HO-1 y GR co-inmunoprecipitaban tanto en núcleo como en citoplasma. Por inmunofluorescencia, pudimos ver que la presencia de Dexametasona aumentó la localización nuclear de GR; sin embargo, en el pre-tratamiento con Hemina el receptor quedó parcialmente retenido en el citoplasma (p=1x10-7). Al estudiar laexpresión proteica de las inmunofilinas FKBP51 y FKBP52, se observó un aumento significativo de FKBP51 en las células tratadas con Hemina+Dexametasona, lo que podría explicar la retención parcial en citoplasma de GR en estas condiciones. Por análisis bioinformático no se hallaron elementos de respuesta a GR en el gen HMOX1. Dado el alto índice de metástasis óseas en el CaP, células PC3 pre-tratadas o no con Hemina, se co-cultivaron con la línea MC3T3 (preosteoblastos murinos). Observamos que el co-cultivo aumentó la expresión de NR3C1 tanto en las células tumorales como en las progenitoras óseas. Con el objetivo de analizar el efecto de los tratamientos con Hemina y Dexametasona in vivo, generamos tumores s.c. de células PC3 creciendo como xenotransplantes en ratones nude. Cuando los tumores alcanzaron un volumen aproximado de 150 mm3, los animales se inyectaron i.p. cada 48 h con 6 dosis de los siguientes tratamientos: Hemina (25 mg/kg), Dexametasona (0,2 mg/kg), Hemina+Dexametasona (misma dosis tratamientos individuales) o PBS (control). Los animales fueron sacrificados 24 h luego de la última dosis. Observamos que la administración i.p. de Hemina en ambos tratamientos muestra una tendencia hacia el aumento del crecimiento tumoral, mientras los tumores de ratones tratados con Dexametasona sola crecieron de forma similar a los del grupo control. Sin embargo, las diferencias no resultaron significativas probablemente debido al número limitado de animales incluidos (n=7 por grupo). El estudio de la expresión de HO-1 y GR por inmunohistoquímica reveló la ausencia de marcación para HO-1 en los tumores de todos los grupos y tinción positiva de HO-1 en los macrófagos infiltrantes al tumor. Para GR se observó una fuerte inmunorreactividad nuclear en los tumores de los grupos Hemina y Dexametasona. Al analizar lisados tumorales totales por Western Blot, se comprobó que la administración de Dexametasona sola o conjuntamente con Hemina causó un aumento significativo de HO-1. A nivel génico, se observó una disminución significativa en la expresión de NR3C1 en los tumores tratados con Dexametasona respecto a los controles (p=0,02), sin evidenciarse cambios en los niveles de HMOX1. Con el objetivo de estudiar la expresión de HMOX1 y NR3C1 en tumores humanos, utilizamos datos de RNAseq obtenidos de repositorios públicos. Los análisis revelaron que los pacientes con alta expresión de ambos genes presentan menor sobrevida libre de enfermedad y de recaída que aquellos pacientes que expresan niveles bajos.Prostate cancer (CaP) is the second cause of cancer-related deaths among occidental men and one of the therapeutic strategy currently used is androgen deprivation. However, this therapy is not efficient in advanced tumours, when they become treatment refractory (castration resistant prostate cancer or CRPC). Among the many therapeutic options for CRPC, glucocorticoids (GC) are usually used because of their partial inhibitory effect on adrenal androgen synthesis. GC have been used in CaP to delay its progression and to control therapy-related pain and side effects. Nevertheless, this drugs are able to stimulate CaP growth via mutated androgen receptor (AR) or glucocorticoid receptor (GR). Heme oxygenase-1 (HO-1) is the limiting rate heme degradation enzyme, and its expression and activity can be specifically induced by Hemin. In previous reports from our group we showed that HO-1 overexpression in CaP cell lines can reduce proliferation, invasion and migration in vitro and, tumor growth and angiogenesis in vivo. We also reported that HO-1 inhibits AR transcriptional activity in CaP by interfering in STAT3 signalling. In this thesis, we studied GR signalling pathway and its modulation by HO-1, to identify the altered cellular processes that lead to CaP progression. Therefore, we performed the following treatments: Hemin (80 μM, 24 h), Dexamethasone (1x10-8 M, 6 h), the combination of both drugs or PBS as control. We found that Dexamethasone did not affect the viability of the cell lines PC3 (AR-/GR+) or C4-2B (AR+/GR+), while the presence of Hemin reduced this parameter. In both cell lines we confirmed that Hemin treatment increased HO-1 gene expression (p<0.05) and protein levels. We also demonstrated that Hemin significantly reduced NR3C1 levels (p<0.01; encodes for GR) and affected the expression of different GR downstream targets. In both cell lines Dexamethasone treatment induced GR levels. Using reporter genes assays we showed that Dexamethasone significantly increased GR transcriptional activity (p<0.01). However, this effect was partially reverted by Hemin pre-treatment in PC3 cells (p=0.02). We observed that HO-1 and GR co-immunoprecipitated in the nucleus and in the cytoplasm. We showed that Dexamethasone treatment increased GR nuclear localization using immunofluorescence microscopy; while Hemin pre-treatment partially abolished GR nuclear translocation (p=1x10-7). When immunophilins FKBP51 and FKBP52 were studied, we evidenced a significant increase of FKBP51 protein level in Hemin+Dexamethasone treated cells, and this could possibly account for the partial GR cytoplasmic retention under this experimental condition. No GR response element was found in HMOX1 gene using bioinformatics. Given that CaP usually metastasize to bone, PC3 cells pre-treated or not with Hemin were co-cultured with MC3T3 cells (murine preosteoblastic cell line). We observed that co-culture augmented NR3C1 levels in both tumour and bone progenitor cells. Aiming to study the effect of Hemin and Dexamethasone treatment in vivo, we generated s.c. PC3 tumours growing as xenografts in nude mice. When tumours reached a volume around 150 mm3, the animals were i.p. injected every 48 h with 6 doses of the following treatments: Hemin (25 mg/kg), Dexamethasone (0.2 mg/kg), Hemin+Dexamethasone (same doses that individual treatments) or PBS (control). The animals were sacrificed 24 h after the last dose. We observed that i.p. Hemin administration seemed to increase the tumour growth, while those treated with Dexamethasone alone grew similarly to controls. However, there were no significant differences probably due to the limited number of animals included (n=7 per group). By immunohistochemistry analysis, we demonstrated no positive staining for HO-1 in tumours, but high HO-1 reactivity was detected in macrophages infiltrating the tumours. High nuclear immunoreactivity for GR was observed in Hemin and Dexamethasone treated tumours. The analysis of total tumour lysates by Western Blot, revealed HO-1 levels significantly increased in animals treated with Dexamethasone. Further at the transcription level, we observed reduced expression of NR3C1 in those tumours treated with Dexamethasone (p=0.02), with no changes in HMOX1 levels. To study NR3C1 and HMOX1 expression in human tumours, we used RNAseq data from public repositories. The analyses showed that patients expressing high levels of both genes have lower disease-free survival and lower relapse-free survival than those patients that express low levels. In summary, our in vitro and in vivo results suggest an association and a possible modulation between HO-1 and GR pathways.Fil: Leonardi, Daiana Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Identidad y práctica docente

El presente trabajo aborda diversas reflexiones a partir de la experiencia en las prácticas docentes entendidas como un doble proceso de aprendizaje y enseñanza en una Escuela Secundaria pública de la ciudad de La Plata. En el transcurso de nuestras prácticas docentes, junto a los estudiantes de sexto año, evidenciamos distintas problemáticas emergentes. Nos planteamos las siguientes inquietudes ¿cómo se construye la identidad de los jóvenes en la actualidad?, ¿quiénes son los sujetos y/o entes de poder que influyen en la conformación de la identidad? y, por último cómo podemos fomentar desde nuestra propia práctica posibles respuestas a dichas preguntas, promoviendo así un continuo proceso de formación docente.Este documento fue elaborado a modo de proyecto final para la graduación del profesorado en la orientación en Artes Visuales y Diseño.Facultad de Bellas Arte

Orange tourism in the southwest of Buenos Aires (Argentina): projects "Pehuen có cuna de megaterios" and "Isla invisible"

La dimensión turística del patrimonio territorial ha contribuido al impulso del turismo naranja que fomenta el desarrollo cultural, económico y social popular con sostenibilidad. En la provincia de Buenos Aires (Argentina) los bienes patrimoniales son diversos y han dado lugar a proyectos innovadores y creativos. Los ejemplos abordados en esta investigación se localizan en Pehuen Có y en el estuario de Bahía Blanca. El objetivo consiste en analizar si las propuestas mencionadas pueden ser consideradas bajo el concepto de turismo naranja. Metodológicamente, se parte de una indagación bibliográfica sobre patrimonio territorial, turismo naranja y procesos de activación turística y patrimonialización de los recursos. Luego se caracterizan los territorios estudiados y se analizan ambos proyectos considerando el cumplimiento de tres criterios propuestos, determinándose que, en las iniciativas impulsadas, se cumplen mayoritariamente los mismos.The tourism dimension of the territorial heritage has contributed to the promotion of orange tourism that promotes cultural, economic and social development with the preservation of heritage components. In the province of Buenos Aires (Argentina) heritage assets are diverse and have given rise to innovative and creative projects. The examples addressed in this research are located in Pehuen Có and in the estuary of Bahía Blanca. The aim is to analyse whether the above proposals can be considered under the concept of orange tourism. Methodologically, it is based on a bibliographic investigation on territorial heritage, orange tourism and processes of tourist activation and patrimonialization of resources. Then the territories studied are characterized and both projects are analyzed considering the fulfillment of three proposed criteria, determining that, in the initiatives promoted, the majority of them are met.Fil: Gambarota, Daniela Melisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Económicas y Sociales del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Economía. Instituto de Investigaciones Económicas y Sociales del Sur; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Geografía y Turismo; ArgentinaFil: Matamala, Romina Daiana. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Geografía y Turismo; ArgentinaFil: Leonardi, Viviana Silvia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Económicas y Sociales del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Economía. Instituto de Investigaciones Económicas y Sociales del Sur; Argentin

Classification of bifid mandibular canals using cone beam computed tomography

The objective of this study was to classify the morphology of bifid mandibular canals and to evaluate their relationship with the roots of third molars, using cone beam computed tomography (CBCT) scans. The CBCT scans of 75 patients were analyzed and the bifurcations were classified according to Langlais et al. (1985). The relationship of bifurcation and third molars was established according to the following classification: class A - uninvolved, class B - close relationship, class C - intimate relationship and class D - absence of third molars. Data were submitted to descriptive statistics, and the results indicated that the patients' mean age was 48.2 (&#177; 13.2) years. Unilateral bifurcation (Type 1) was the most frequent type (72.6%), followed by unilateral Type 2 (19.3%). Class D was the most frequent (57.33%), followed by class C (21.33%), class B (13.33%) and class A (8%). It could be concluded that most cases presented unilateral bifid mandibular canals extending to the third molar or adjacent regions, and when present, the roots seemed to be a continuation of the bifid mandibular cana

Polymorphisms in GSTP1, GSTM1 and GSTT1 genes are associated with the risk of relapse in patients with childhood Acute Lymphobastic Leukemia

Uno de los desafíos más importantes en oncología es poder predecir la progresión de la enfermedad. El objetivo del trabajo fue identificar polimorfismos que permitan distinguir pacientes con Leucemia Aguda (LA) con alto riesgo de presentar una recaída. Se reclutaron 194 pacientes con LA del Hospital Posadas. El protocolo fue aprobado por el Comité de Ética y todos los pacientes, o tutores legales, firmaron un consentimiento informado. Se extrajo ADN de linfocitos de sangre periférica y se genotipificaron 5 polimorfismos: Glutatión-S-Transferasas (GSTP1 c.313A>G (p.Ile105Val); GSTM1 nulo; GSTT1 nulo), Gen de Resistencia a Múltiples Drogas 1 (ABCB1/ MDR1 c.3435T>C), y Metilentetrahidro Folato Reductasa (MTHFR c.665C>T). Dos de los polimorfismos (GSTM1 y GSTT1) se estudiaron por PCR multiplex, y los otros tres por PCR-RFLP. Encontramos que el genotipo combinado de las tres GSTs está significativamente asociado con las recaídas (p=0,003). Cuando analizamos solo a los pacientes pediátricos (n=158) utilizando un modelo multivariado, comprobamos que el genotipo GSTP1 c.313GG aumenta el riesgo de recaídas (HR=5,4; 95%IC=1,7-17,2; p=0,005). Al estudiar solo a pacientes pediátricos con Leucemia Linfoblástica Aguda que tuvieron remisión completa (n=136), encontramos un resultado similar (HR=5,6; 95%IC=1,8-17,9; p=0,004). Estos hallazgos indican que el genotipo de las GSTs estaría afectando la evolución de los pacientes con LA. La confirmación de estos resultados ayudará a elegir el mejor esquema de tratamiento y seguimiento para cada paciente diagnosticado con LA según su genotipo.The prediction of disease progression is one of the biggest challenges in oncology. The aim of this study was to find polymorphisms that help to identify patients diagnosed with Acute Leukemia (AL) who are at high risk of relapse. We recruited 194 patients with AL from Hospital Posadas. The protocol was approved by the Ethic Committee and all patients, or guardians, signed an informed consent. Germline DNA was isolated from peripheral blood lymphocytes and 5 polymorphisms were genotyped: Glutathion-S-Transferases (GSTP1 c.313A>G (p.Ile105Val); GSTM1 null; GSTT1 null), Multiple Drug Resistance gene 1 (ABCB1/MDR1 c.3435T>C), and Methylenetetrahydrofolate Reductase (MTHFR c.665C>T). Two polymorphisms (GSTM1 y GSTT1) were analyzed by multiplex PCR and the other three by PCR-RFLP. We found that the GSTs combined genotype is significantly associated with relapse (p=0.003). When we analyzed only the pediatric patients (n=158) using a multivariate model, we found that the GSTP1 c.313GG genotype increases the risk of relapse (HR=5.4; 95%CI=1.7-17.2; p=0.005). We further restricted the analysis to pediatric patients with Acute Lymphoblastic Leukemia with complete remission (n=136) and found a similar result (HR=5.6; 95%CI=1.8-17.9; p=0.004). These results show that the genotype of the GSTs might modify the AL progression. The validation of these findings will help to choose a better treatment and follow-up schema for each patient diagnosed with AL according to their genotype.Fil: Cotignola, Javier Hernan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Leonardi, Daiana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Nuñez, Myriam Carmen. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: de Siervi, Adriana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Alfonso, Graciela. Hospital Nacional "A. Posadas"; ArgentinaFil: Riccheri, Cecilia. Hospital Nacional "A. Posadas"; ArgentinaFil: Vazquez, Elba Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Improving risk stratification of patients with childhood acute lymphoblastic leukemia: Glutathione-S-Transferases polymorphisms are associated with increased risk of relapse

The inclusion of genotype at Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) diagnosis as a genetic predictor of disease outcome is under constant study. However, results are inconclusive and seem to be population specific. We analyzed the predictive value of germline polymorphisms for childhood ALL relapse and survival. We retrospectively recruited 140 Argentine patients with de novo ALL. Genotypes were analyzed using PCRRFLP (GSTP1 c.313A > G, MDR1 c.3435T > C, and MTHFR c.665C > T) and multiplex PCR (GSTT1 null, GSTM1 null). Patients with the GSTP1 c.313GG genotype had an increased risk for relapse in univariate (OR = 2.65, 95% CI = 1.03-6.82, p = 0.04) and multivariate (OR = 3.22, 95% CI = 1.17-8.83, p = 0.02) models. The combined genotype slightly increased risk for relapse in the univariate (OR = 2.82, 95% CI = 1.09-7.32, p = 0.03) and multivariate (OR = 2.98, 95% CI = 1.14-7.79, p = 0.03) models for patients with 2/3-risk-genotypes (GSTT1 null, GSTM1 null, GSTP1 c.313GG). The Recurrence-Free Survival (RFS) was shorter for GSTP1 c.313GG (p = 0.025) and 2/3-risk-genotypes (p = 0.021). GST polymorphisms increased the risk of relapse and RFS of patients with childhood ALL. The inclusion of these genetic markers in ALL treatment protocols might improve risk stratification and reduce the number of relapses and deaths.Fil: Leonardi, Daiana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Abbate, María Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Riccheri, Maria C.. Ministerio de Salud de la Nación. Hospital Nacional Profesor Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Nuñez, Myriam Carmen. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Fisico Matemática. Cátedra de Matemáticas; ArgentinaFil: Alfonso, Graciela. Ministerio de Salud de la Nación. Hospital Nacional Profesor Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Gueron, Geraldine. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: de Siervi, Adriana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Vazquez, Elba Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Cotignola, Javier Hernan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Glutathione-S-transferase (GST) polymorphisms are associated with relapse after radical prostatectomy

BACKGROUND: Organ confined prostate cancer (PCa) can be cured by radical retropubic prostatectomy (RRP); however, some tumors will still recur. Current tools fail to identify patients at risk of recurrence. Glutathione-S-transferases (GSTs) are involved in the metabolism of carcinogens, hormones and drugs. Thus, genetic polymorphisms that modify the GST activities may modify the risk of PCa recurrence. METHODS: We retrospectively recruited Argentine PCa patients treated with RRP to study the association between GST polymorphisms and PCa biochemical relapse after RRP. We genotyped germline DNA in 105 patients for: GSTP1 c.313A4G (p.105 Ile4Val, rs1695) by PCR-RFLP; and GSTT1 null and GSTM1 null polymorphisms by multiplex PCR. Kaplan–Meier curves and Cox proportional hazard models were used to evaluate these associations. RESULTS: Patients with GSTP1 c.313GG genotype showed shorter biochemical relapse-free survival (BRFS) (P ¼ 0.003) and higher risk for recurrence in unadjusted (Hazard ratio (HR) ¼ 3.16, 95% confidence interval (95% CI) ¼ 1.41–7.06, P ¼ 0.005) and multivariate models (HR ¼ 3.01, 95% CI ¼ 1.13–8.02, P ¼ 0.028). We did not find significant associations for GSTT1 and GSTM1 genotypes. In addition, we found shorter BRFS (P ¼ 0.010) and increased risk for recurrence for patients having two or more risk alleles when we combined the genotypes of the three GSTs in multivariate models (HR ¼ 3.06, 95% CI ¼ 1.20–7.80, P ¼ 0.019). CONCLUSIONS: Our results give support to the implementation of GSTs genotyping for personalized therapies as a novel alternative for PCa management for patients who undergo RRP. To the best of our knowledge, this is the first study that examined GST polymorphisms in PCa progression in Argentine men. Replication of our findings in larger cohort is warranted.Fil: Cotignola, Javier Hernan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Leonardi, Daiana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Shahabi, A.. University Of Southern California; Estados UnidosFil: Acuña, Alejandro Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Stern, M. C.. University Of Southern California; Estados UnidosFil: Navone, N.. University of Texas; Estados UnidosFil: Scorticati, C.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: de Siervi, Adriana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Mazza, O.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Vazquez, Elba Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin