Anti-human Interleukin(IL)-4 Clone 8D4-8 Cross-Reacts With Myosin-9 Associated With Apoptotic Cells and Should Not Be Used for Flow Cytometry Applications Querying IL-4 Expression

Interleukin(IL)-4 is produced by T cells and other leukocytes and is a critical mediator of monocyte and B cell responses. During routine flow cytometry panel validation for the investigation of intracellular cytokines, we observed unique IL-4 expression patterns associated with the widely available monoclonal antibody 8D4-8. Namely, IL-4 (8D4-8) expression was observed in the absence of cellular activation and enhanced following staurosporine exposure. Mass spectrometry analysis of immunoprecipitates from peripheral blood lymphocytes (PBL) revealed that 8D4-8 cross-reacts with the ubiquitous cytoskeletal protein myosin-9. We confirmed these results by western blotting immunoprecipitates, using immunofluorescence among staurosporine-treated Caco-2 cells, and by surface-labeling PBL for 8D4-8 and myosin-9 and analyzing by flow cytometry. Although previously reported from several independent groups, we found no evidence to support the hypothesis that IL-4 is produced by apoptotic cells. Rather, this appears to have been myosin-9. Our data indicate clone 8D4-8 should not be used in the flow cytometric study of IL-4. Furthermore, our work calls for a reevaluation of previous flow cytometric studies that have used this clone for IL-4 analysis and highlights the importance of validation in antibody-based assays

ENSAIO METODOLÓGICO SOBRE A UTILIZAÇÃO DE TRANSECTOS MÓVEIS NO PERÍODO DIURNO EM PRESIDENTE PRUDENTE-SP

Este trabalho tem o propósito de realizar um ensaio metodológico para a análise das diferenças térmicas intra-urbanas na cidade de Presidente Prudente/SP, através de uma avaliação da ilha de calor diurna, em um dia representativo da primavera. Para isso, foram coletados dados de temperatura obtidos por meio de dois transectos que seguiram os principais eixos de circulação da cidade. Os resultados das análises e os registros mostraram a complexidade de fatores que contribuem na formação da ilha de calor, tais como, a densidade de construções, o relevo e a presença de vegetação, sobretudo pelas características do sistema atmosférico atuante. Com a espacialização das temperaturas demonstrou-se a intensidade e magnitude térmica da ilha de calor no episódio estudado