Caracterización molecular de bacterias endofíticas de Elodea potamogeton (“llachu”) del Lago Titicaca

El objetivo fue aislar y caracterizar molecularmente bacterias endofíticas del “llachu”, planta acuática del Lago Titicaca que sobrevive en ambientes hipereutrofizados. Para el aislamiento, las muestras fueron desinfectadas en alcohol 70%, hipoclorito de sodio 0,5% y Tween 80%; luego, se homogenizaron y una alícuota sembrada en medio Luria-Bertani (LB). Se eligieron tres cepas para su resembrado en agar LB sólido. De las cepas puras, se extrajo DNA con la mezcla fenol-cloroformo-alcohol isoamílico. Se amplificó el gen 16S rDNA por PCR; los amplicones se remitieron para su secuenciamiento. Las secuencias se editaron con BioEdit 7.0.0 y se eligieron secuencias similares con BLASTn del GenBank, se hizo el alineamiento múltiple de secuencias con Clustal W. Para las relaciones evolutivas se utilizó el MEGA7 construyéndose árboles filogenéticos por el método de Neighbor-Joining. El análisis molecular demuestra que la cepa Sample10ped corresponde a Pantoea sp. con una identidad superior al 76%; la cepa Sample11pe a Pseudomonas sp. con un 100% de identidad; y, a la cepa Sample12ped a Raoultella terrigena sp. o Klebsiella sp. con una identidad de 99%. Las secuencias de las dos últimas, fueron registradas en el GenBank

Variaciones en el metabolismo energético de la alpaca (Vicugna pacos). Una evaluación por efecto del ayuno prolongado

The study aimed to evaluate the effect of a prolonged fast (5 days) on some blood biochemical componentsinvolved in energy metabolism. Twenty male alpacas of two-year-old were used in two treatments (experimentaland control). Blood samples were taken in the morning for five days to quantify serum glucose, protein and urealevels by spectrophotometry and ketone bodies using semiquantitative test strips. The results show that theaverage of glucose, protein and urea of the alpacas subjected to fasting are different from the control group(P≤0.05). Glucose levels decrease while protein and urea levels increase over time. The presence of acetoacetatewas not detected during the five days of fasting. It is concluded that prolonged fasting in alpacas alters the animal'smetabolic process, both quantitatively and qualitatively, modifying the substrates and products involved inenergy production.El estudio tuvo como objetivo de evaluar el efecto de un ayuno prolongado (5 días) sobre algunos componentesbioquímicos sanguíneos involucrados en el metabolismo energético. Se utilizaron 20 alpacas macho de dos añosde edad en dos tratamientos (experimental y control). Se tomaron muestras de sangre en horas de la mañana porcinco días para cuantificar los niveles séricos de glucosa, proteínas y urea por espectrofotometría y cuerposcetónicos mediante tiras reactivas en forma semicuantitativa. Los resultados muestran que el promedio de glucosa,proteínas y urea de las alpacas sometidas a ayuno son diferentes al grupo control (P≤0.05). Los niveles deglucosa disminuyen mientras que los niveles de proteínas y urea aumentan con el paso del tiempo. La presenciade acetoacetato no fue detectada durante los cinco días de ayuno. Se concluye que el ayuno prolongado enalpacas altera el proceso metabólico del animal, tanto cuantitativa como cualitativamente, modificándose lossustratos y productos implicados en la producción de energía

Aislamiento y caracterización convencional de bacterias anaerobias del compartimento 1 de la alpaca (Vicugna pacos)

The alpaca (Vicugna pacos) is a domestic mammal that inhabits the high Andean areas, where the quality of pastures is of poor quality, it is the microorganisms that it houses in its digestive tract, which make it possible to use these pastures in products of high biological value such as meat, and fiber. The objective of the study was to isolate and characterize anaerobic bacteria from the compartment 1 of the alpaca digestive tract through conventional tests. The study was carried out in the Microbiology Laboratory of the La Raya Experimental Center of the National University of Altiplano Puno, for which 34 samples of the liquor and wall of compartment C1 were used, from four male alpacas, Huacaya breed destined for slaughter. The isolation and purification of the anaerobic strains were carried out by cultures in anaerobic jars. The characterization and identification of the isolated anaerobic strains were carried out using conventional aerotolerance, phenotypic (morphological) and biochemical tests (catalase, oxidase, Kliger test, Simmons citrate test and SIM medium test). As a result of the study, it was possible to isolate and identify five anaerobic strains: two strains to Ruminococcus sp., two strains to Fibrobacter sp. and a strain to Butyrivibrio sp. The three strains play a fundamental role in the degradation of complex carbohydrates such as cellulose and other difficult-to-digest fibrous polysaccharides.La alpaca (Vicugna pacos) es un mamífero doméstico que habita las zonas altoandinas, en donde la calidad de pastos es de pobre calidad, son los microorganismos que aloja en su tracto digestivo, quienes hacen posible la utilización de estos pastos en productos de alto valor biológico como la carne y fibra. El objetivo del estudio fue aislar y caracterizar las bacterias anaerobias del compartimento C1 del tracto digestivo de la alpaca a través de pruebas convencionales. El estudio se realizó en el Laboratorio de Microbiología del Centro Experimental La Raya de la Universidad Nacional de Altiplano Puno, para lo cual se utilizaron 34 muestras     del licor y pared del compartimento C1, procedente de cuatro alpacas machos, raza Huacaya destinadas a camal. El aislamiento y purificación de las cepas anaeróbicas se realizaron mediante cultivos en jarras de anaerobiosis. La caracterización e identificación de las cepas anaeróbicas aisladas se realizaron mediante pruebas convencionales de aerotolerancia, fenotípicas (morfológicas) y bioquímicas (catalasa, oxidasa, prueba Kliger, prueba citrato de Simmons y prueba de medio SIM). Como resultado del estudio, se lograron aislar e identificar cinco cepas anaeróbicas: dos cepas a Ruminococcus sp., dos cepas a Fibrobacter sp. y una cepa a Butyrivibrio sp.  Las tres cepas, cumplen un rol fundamental en la degradación de carbohidratos complejos como la celulosa y otros polisacáridos fibrosos de difícil digestión

Bacterias endofíticas aisladas de Elodea potamogeton (“llachu”) de aguas contaminadas de la bahia interior del Lago Titicaca

Con la finalidad de aislar y caracterizar molecularmente bacterias endofíticas de la planta acuática Elodea potamogeton (llachu) que crece en aguas eutrofizadas de la Bahía Interior del Lago Titicaca mediante el análisis del gen 16S rDNA, se tomaron muestras de la planta y del agua circundante para un análisis químico (pH, fosfatos, nitritos y nitratos). La desinfección de la planta se realizó primero por lavados con agua y luego sometidos a la acción del alcohol 70% e hipoclorito de sodio 0,5%. Luego se procedió a aislar y obtener cultivos puros de las bacterias endofíticas mediante trituración, centrifugación y cultivo en medio Luria-Bertani (LB). Se eligieron tres cepas para su resembrado por tres veces en agar realizándose un análisis morfológico de las colonias a simple vista. Posteriormente, se extrajo DNA mediante la mezcla fenol-cloroformo-alcohol isoamílico (25;24:1) de cada una de las colonias, se purificó y se cuantificó por espectrofotometría ultravioleta. La calidad del DNA se evaluó por electroforesis en agarosa 1%. Luego, se amplificó el fragmento 16S rDNA mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) utilizando primers universales. Los productos amplificados fueron purificados y luego analizados su calidad por electroforesis en agarosa 1%, remitiéndose los amplicones a Estados Unidos para su secuenciamiento por el método de Sanger. Para el establecimiento de las relaciones evolutivas se utilizaron softwares bioinformáticos. Primero, se editaron las secuencias con BioEdit versión 7.0.0 ©, luego se buscaron secuencias similares en el GenBank con el BLASTn y con ellos se hizo el alineamiento múltiple de secuencias Clustal W, la matriz de distancias genéticas y la construcción de árboles filogenéticos utilizando MEGA7©. Los resultados indican que según el análisis químico del agua analizada, corresponden a aguas eutrofizadas con pH alcalino (9,42), alta concentración de fosfatos totales (1,05 mg/dL), nitratos (0,14 mg/dL) y nitritos (0,08 mg/dL). Se lograron aislar fragmentos de 1057, 1112 y 1115 nucleótidos que corresponden a las cepas 10, 11 y 12, respectivamente. Según el análisis morfológico y molecular se ha permitido caracterizar a la cepa 10 como Pantoea sp. con una identidad superior al 76%, a la cepa 11 como Pseudomonas sp. con un 100% de identidad y a la cepa12 como Raoultella terrígena sp. o Klebsiella sp. con una identidad de 99%. Por el alto porcentaje de identidad que mostraron las cepas 11 y 12, sus secuencias han sido registradas en el GenBank cuyas accesiones son: SUB4288247 y SUB4252655, respectivamente.Tesi

“Efecto del alcoholismo crónico sobre la función hepática en altura”

TesisCon el objeto de evaluar el efecto de la hipoxia crónica de las grandes altitudes sobre la función y daño hepático en alcohólicos crónicos y sanos se requirió la colaboración voluntaria de 100 personas de sexo masculino, mayores de 18 años con residencia permanente en gran altitud (Puno,3825 msnm) y a nivel del mar (Camaná, 25 msnm). El diseño estadístico fue conducido en un Factorial 2 x 2, nivel altitudinal (bajo y alto) y estado clínico del paciente (alcohólido y no alcohólico) y conformado por 25 personas cada uno. Se tomaron muestras de sangre con finalidad de determinar la actividad sérica mediante kits comerciales (Wiener Lab.) de las siguientes enzimas: alanina aminotransferasa (ALT), aspartato aminotransferasa (AST), γ-glutamil transpeptidasa (GGT), fosfatasa alcalina (ALP) y colinesterasa (CHE). Para la confirmación del diagnóstico de alcoholismo crónico, además del estado evidente, se utilizó el test de CAGE. Los resultados fueron: La ALT es mayor alcohólicos (69,59 U/L) que en no alcohólicos (10,75 U/L) (P≤0,01) y es similar entre baja (38,76 U/L) y alta altitud (41,58 U/L) (P>0,05). La AST también fue superior en alcohólicos (149,46 U/L) que en sanos (14,59 U/L) (P≤0,01) y similar entre sujetos del nivel del mar (79,34 U/L) con los de los gran altitud (84,71 U/L) (P>0,05). La GGT es mayor en alcohólicos (121,01 U/L) que en no alcohólicos (15,95 U/L) (P≤0,01) y también mayores en habitantes de grandes alturas (70,58 U/L) que en los del nivel del mar (66,39 U/L) (P≤0,05). De igual modo, la ALP es superior en alcohólicos (356,46 U/L) que en los no alcohólicos (121,50 U/L) (P≤0,01) pero similares entre individuos de alta (238,98 U/L) y baja altitud (239,08) (P>0,05). Y para CHE la actividad fue mayor en sanos (6645,59 U/L) que en alcohólicos (4008,32 U/L) (P≤0,01) y similar entre nativos de niveles altos (5311,87 U/L) y bajos (5341.39) (P>0,05). Con respecto al cociente AST/ALT, éste es similar entre personas del nivel del mar (1,76) y residentes en la altura (1,80) (P>0,05) , pero es más alto en alcohólicos (2,18) que en no alcohólicos (1,39) (P≤0,01). Finalmente se determinó que existe una correlación alta y positiva entre las enzimas analizadas (P≤0,01) con excepción de la CHE que muestra un comportamiento inverso. Concluyéndose que, utilizando los marcadores enzimáticos analizados en el presente estudio, no se encontró efecto de la hipoxia ambiental sobre el daño y función hepática tanto en individuos alcohólicos como en no alcohólicos, lo que significa que el daño hepático provocado por el alcohol y/o sus metabolitos es similar tanto en las altas como en las bajas altitudes probablemente como resultado de la aclimatización a la altura