Central and systemic IL-1 exacerbates neurodegeneration and motor symptoms in a model of Parkinson‘s disease

Parkinson's disease is a neurodegenerative disorder with uncertain aetiology and ill-defined pathophysiology. Activated microglial cells in the substantia nigra (SN) are found in all animal models of Parkinson's disease and patients with the illness. Microglia may, however, have detrimental and protective functions in this disease. In this study, we tested the hypothesis that a sub-toxic dose of an inflammogen (lipopolysaccharide) can shift microglia to a pro-inflammatory state and exacerbate disease progression in an animal model of Parkinson's disease. Central lipopolysaccharide injection in a degenerating SN exacerbated neurodegeneration, accelerated and increased motor signs and shifted microglial activation towards a pro-inflammatory phenotype with increased interleukin-1β (IL-1β) secretion. Glucocorticoid treatment and specific IL-1 inhibition reversed these effects. Importantly, chronic systemic expression of IL-1 also exacerbated neurodegeneration and microglial activation in the SN. In vitro, IL-1 directly exacerbated 6-OHDA-triggered dopaminergic toxicity. In vivo, we found that nitric oxide was a downstream molecule of IL-1 action and partially responsible for the exacerbation of neurodegeneration observed. Thus, IL-1 exerts its exacerbating effect on degenerating dopaminergic neurons by direct and indirect mechanisms. This work demonstrates an unequivocal association between IL-1 overproduction and increased disease progression, pointing to inflammation as a risk factor for Parkinson's disease and suggesting that inflammation should be efficiently handled in patients to slow disease progression.Fil: Pott Godoy, María Clara. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Físico Matemática. Cátedra de Matemáticas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Tarelli, Rodolfo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Físico Matemática. Cátedra de Matemáticas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular; ArgentinaFil: Ferrari, Carina Cintia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Físico Matemática. Cátedra de Matemáticas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular; ArgentinaFil: Sarchi, María Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Físico Matemática. Cátedra de Matemáticas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular; ArgentinaFil: Pitossi, Fernando Juan. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Físico Matemática. Cátedra de Matemáticas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular; Argentin

Aplicación de biología molecular en veterinaria: PCR como método de diagnóstico para investigar presencia de Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC) en ovinos de la zona Trintica

La Escherichia coli es un microorganismo normalmente presente en el tubo digestivo del hombre y los animales sanos. Se elimina por materia fecal y puede contaminar el medio ambiente. Las E. coli patógenas pueden causar infecciones con variadas manifestaciones clínicas (diarreas, colitis hemorrágicas y síndrome urémico hemolítico) y son un patógeno oportunista frecuentemente asociado a infecciones urinaria y septicemia. Los rumiantes en general son portadores asintomáticos y han sido señalados como los principales reservorios de la E. coli productora de toxina Shiga (STEC). Determinar la presencia del factor de virulencia STX 1 y STX 2 de E. coli en ovinos de la zona de Trintrica, San Rafael, Mendoza

Diagnóstico molecular de Escherichia coli productor de toxina shiga en mascotas de niños con síndrome urémico hemolítico

Los estudios sobre la aplicación de Biología Molecular para realizar diagnósticos en animales comienzan en 2010. El equipo se planteó dos objetivos: uno, desarrollar y poner a punto la Técnica Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), ya que es una herramienta biotecnológica útil para el diagnóstico de bacterias o virus de difícil cultivo; y otro, determinar si los caninos pueden ser reservorios de Escherichia coli O157:H7 productor de toxinas shiga Stx1 y Stx2 (STEC) y así constituir un riesgo para niños y adultos que conviven con ellos. STEC es la cepa que se asocia con mayor frecuencia a síndrome urémico hemolítico (SUH), enfermedad endémica, primera causa pediátrica de insuficiencia renal aguda y segunda de insuficiencia renal crónica. El SUH es responsable del 20% al 30% de los trasplantes renales en niños y adolescentes. En el año 2014 se notificaron 25 casos de SUH en la provincia de Mendoza. Entre diciembre de 2014 y enero de 2015, se registraron 16 pacientes, con una muerte, en el hospital pediátrico “Dr. Humberto Notti”; estos datos fueron brindados por profesionales del servicio de nefrología del hospital. El objetivo es determinar la presencia o ausencia de STEC en mascotas de niños con SUH. Se trabajó con distintas poblaciones: En 2010, se tomaron 100 muestras de perros sanos menores de 2 años, ya que en este período presentan hábitos irregulares de higiene y alimentación, de zonas rurales, periurbanas y basurales del Gran Mendoza que estuvieran alimentándose o en contacto con materiales provenientes de la faena de rumiantes. Luego se propuso determinar la presencia de E coli O157:H7 en mascotas (perros y gatos) que conviven con niños con SUH en la provincia de Mendoz

Aplicación de biología molecular en veterinaria: PCR como método diagnóstico de brucelosis canina. Implicancia en salud pública y en reproducción con fines comerciales

La brucelosis canina, producida por Brucella canis, es una enfermedad ampliamente distribuida a nivel mundial. Esta enfermedad se reconoce como una entidad que produce importantes pérdidas económicas en los criaderos, como consecuencia de las alteraciones reproductivas. Tiene carácter zoonótico. Se han descrito alteraciones genitales asociadas a la infección por B. canis, destacando la infertilidad en los machos, como una entidad progresiva e irreversible. En las hembras, el signo más común es el aborto súbito al día 45-55 de gestación que ocurre en un elevado porcentaje (sobre 75%). Esta bacteria se transmite entre los caninos por contacto de las mucosas con material infectado (flujo vaginal, semen, otros fluidos y tejidos asociados con abortos), que contienen gran concentración de bacterias. Otros materiales que contienen estos microorganismos son orina, sangre, leche, saliva y heces. Además, B. canis se puede propagar por fómites. Brucella canis se considera una causa poco frecuente de la brucelosis humana; hay que considerar que la importancia clínica de esta infección puede haber sido subestimada. En el diagnóstico de rutina se usa la prueba serológica de aglutinación rápida en placa 2ß-mercaptoetanol, que detecta anticuerpos específicos, con el problema de que hay una proporción significativa de resultados falsos negativos. El objetivo es utilizar reacción en cadena de la polimerasa PCR como método de diagnóstico de brucelosis canina a partir de distintas muestras como sangre, orina y saliva en perros que asisten a la UPV; incorporar normas de Bioseguridad a protocolos de trabajo en la Unidad de Prácticas Veterinarias (UPV) de la Universidad Juan Agustín Maza para reducir el riesgo biológico al que están expuestos alumnos y docentes. Realizar análisis de riesgo frente a casos positivos a brucelosis en la Unidad de Práctica Veterinaria. Desarrollar recursos humanos para mejorar habilidades técnicas e interpersonales para el pensamiento creativo y el liderazgo, estimulando el desarrollo del pensamiento científico, trabajo en grupo, responsabilidad y capacitación en los becarios y el resto del equipo. La metodología es extracción de ADN de las muestras de sangre, leche, orina o saliva y detección de brucelosis canina por la técnica de PCR. En la segunda etapa se realizará la toma de muestras y detección de brucelosis canina por PCR

A PCR-mutagenesis strategy for rapid detection of mutations in codon 634 of the ret proto-oncogene related to MEN 2A.

BACKGROUND: Multiple endocrine neoplasias type 2A (MEN 2A) is a dominantly inherited cancer syndrome. Missence mutations in the codon encoding cysteine 634 of the ret proto-oncogene have been found in 85% of the MEN 2A families. The main tumour type always present in MEN 2A is medullar thyroid carcinoma (MTC). Only 25% of all MTC are hereditary, and generally they are identified by a careful family history. However, some familial MTCs are not easily detected by this means and underdiagnosis of MEN 2A is suspected. METHODS: DNA samples from MEN 2A patients were amplified by PCR. The products were incubated with the restriction enzyme Bst ApI or Bgl I. The samples were loaded in non-denaturing 10% Polyacrilamyde Gel and run at 120 volts for 40 min. The gels were stained with 10 μg/ml ethidium bromide, and the bands were visualized under a UV lamp. RESULTS: We developed a PCR-mutagenic method to check the integrity of the three bases of the cysteine 634 codon. CONCLUSION: The method can be used to detect inherited mutations in MTC patients without a clear family history. The method is relatively simple to use as a routine test in these patients to decrease the underdiagnosis of MEN 2A. In addition, the assay can be used to screen affected families with any mutation in cysteine 634

Screening poblacional de portadores de hemoglobina S en Mendoza, Argentina

La drepanocitosis es una enfermedad autosómica recesiva que es causada por una mutación en el codón 6 del gen de la beta globina (HBB) produciendo la Hemoglobina S (Hb S). La Hb S constituye una de las hemoglobinas anormales de mayor prevalencia mundial. La frecuencia de heterocigotas varía significativamente alrededor del mundo, con elevadas tasas asociadas a zonas donde existe alta incidencia de malaria. El objetivo del siguiente trabajo fue determinar la frecuencia alélica de esta mutación en la población de la ciudad de Mendoza, Argentina. Para ello se utilizaron 1000 muestras de sangre extraídas de tres centros bioquímicos del Gran Mendoza (dos hospitales y un laboratorio privado) que fueron combinados en 100 pooles, cada uno conteniendo 10 individuos. La búsqueda de portadores se realizó por dos técnicas de biología molecular: PCR alelo específica y PCR y posterior digestión con enzimas de restricción (PCR - RFLP). No se detectaron muestras con la mutación A—>T en el codón 6 del gen HBB con ninguna de las dos técnicas empleadas. Esto implica que ninguno de los 2000 cromosomas analizados tenía la variante S de la hemoglobina A. La frecuencia estimada de este alelo en la población de Mendoza es por lo tanto cero, con un límite de confianza del 95% de que el valor poblacional no sea superior al 0.15%. Esta frecuencia alélica es similar a la reportada en un estudio poblacional llevado a cabo en dadores de sangre residentes en el Gran Buenos Aires y que hasta la ejecución de este trabajo era el único estudio poblacional de esta enfermedad realizado en nuestro país.Sickle Cell disease is an autosomal recessive disease caused by a mutation in the sixth codon of the beta globin gene (HBB) called sickle hemoglobin (Hb S). Hb S is among the most prevalent abnormal hemoglobin in the world. The carrier frequency varies around the world, its distribution is related to areas where malaria is or was once endemic. Our aim was to perform a screening of this mutation in the population of Mendoza, Argentina. For the screening, 1000 blood samples were obtained from three different centers in Mendoza city and were combined in 100 pools each containing lO different blood samples. Our strategy to detect sickle cell carriers was based in two PCR techniques: Allele Specific Amplification and PCR combined with RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). The mutation A—>T in the sixth codon of the HBB gene was not detected in the pools with these PCR based methods. None of the 2000 chromosomes analyzed had Hb S. In this study we have obtained an allelic estimation of zero, with confidence level of 95% that the population value was not above 0.15%. This carrier frequency is not significantly different from the frequency of Sickle Cell Trait obtained in a population study performed on blood donors from Buenos Aires city.Fil: Pott Godoy, María Clara. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Aplicación de biología molecular veterinaria: diagnóstico molecular de escherichia coli productor de toxina shiga (STEC) en mascotas de niños con síndrome urémico.

ARTÍCULO PUBLICADO EN REVISTA EXTERNA. Boletines de la Dirección de Investigación, Ciencia y Técnica del Ministerio de Salud de Mendoza. Los artículos publicados pertenecen a resultados de proyectos UMaza con subsidio de tal Dirección a través de la convocatoria "Investigadores Mendocinos". Web de la Dirección: http://www.salud.mendoza.gov.ar/dependencias/dicyt

Nigral neurodegeneration triggered by striatal AdIL-1 administration can be exacerbated by systemic IL-1 expression

Neuroinflammation has been proposed as an important component of Parkinson's Disease (PD) aetiology and/or progression. However, the inflammatory components and the mechanisms underlying their effects are only partially known. By injecting an adenovirus expressing IL-1 in the striatum, we provoked progressive neurodegeneration of dopaminergic cells in the substantia nigra, motor symptoms and microglial activation. All these effects were attenuated by an anti-inflammatory treatment. Interestingly, peripheral inflammatory stimuli exacerbated IL-1beta induced neurodegeneration and the central inflammatory reaction. These data provide evidence that central, chronic IL-1beta expression can trigger and systemic IL-1beta exacerbate nigral neurodegeneration and highlight the functional relevance of this cytokine in PD.Fil: Pott Godoy, María Clara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquimicas de Buenos Aires; Argentina. Fundación Instituto Leloir; ArgentinaFil: Ferrari, Carina Cintia. Fundación Instituto Leloir; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquimicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Pitossi, Fernando Juan. Fundación Instituto Leloir; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquimicas de Buenos Aires; Argentin