AVALIAÇÃO DE DANO NO DNA EM PORTADORES DE DOENÇA PULMONAR OBSTRUTIVA CRÔNICA PELO ENSAIO COMETA

A Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica- DPOC é definida como uma doença respiratória inflamatória, causada principalmente pela exposição à fumaça de cigarro, caracterizada pela progressão e incompleta reversibilidade da obstrução das vias aéreas. O objetivo desta pesquisa foi quantificar o Índice de Dano ao DNA em portadores de DPOC e controles. Estudo do tipo caso-controle avaliou 43 portadores de DPOC e 50 controles emparelhados por gênero, idade e índice de massa corporal (IMC). Foi utilizado sangue periférico para realizar o ensaio cometa nas versões alcalino (pH> 13) e neutro (pH ~ 8,5). Avaliação de danos no DNA usando o ensaio cometa na versão alcalina revelou um maior Índice de Dano ao DNA em portadores de DPOC quando comparados aos controles (ID 40,12+26,17 vs ID 26,28+28,12, p=0,03). Na versão Neutra do teste também é possível observar maior Índice de Dano nos casos do que em controles (ID 52,88+32,38 vs ID 38,12+38,17, p=0,018), indicando a presença de quebras duplas, devido a inflamação persistente. Dados preliminares mostram que os portadores de DPOC têm maior índice de dano no DNA do que controles, reforçando assim a necessidade de compreender melhor os mecanismos pelos quais isso acontece no processo da doença

AVALIAÇÃO DE DANO NO DNA EM PORTADORES DE DOENÇA PULMONAR OBSTRUTIVA CRÔNICA PELO ENSAIO COMETA

A Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica- DPOC é definida como uma doença respiratória inflamatória, causada principalmente pela exposição à fumaça de cigarro, caracterizada pela progressão e incompleta reversibilidade da obstrução das vias aéreas. O objetivo desta pesquisa foi quantificar o Índice de Dano ao DNA em portadores de DPOC e controles. Estudo do tipo caso-controle avaliou 43 portadores de DPOC e 50 controles emparelhados por gênero, idade e índice de massa corporal (IMC). Foi utilizado sangue periférico para realizar o ensaio cometa nas versões alcalino (pH> 13) e neutro (pH ~ 8,5). Avaliação de danos no DNA usando o ensaio cometa na versão alcalina revelou um maior Índice de Dano ao DNA em portadores de DPOC quando comparados aos controles (ID 40,12+26,17 vs ID 26,28+28,12, p=0,03). Na versão Neutra do teste também é possível observar maior Índice de Dano nos casos do que em controles (ID 52,88+32,38 vs ID 38,12+38,17, p=0,018), indicando a presença de quebras duplas, devido a inflamação persistente. Dados preliminares mostram que os portadores de DPOC têm maior índice de dano no DNA do que controles, reforçando assim a necessidade de compreender melhor os mecanismos pelos quais isso acontece no processo da doença

El Porvenir del obrero : eco de la sociedad de este nombre: Año 2º Número 26 - 1900 Enero 04

A Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) é uma condição lentamente progressiva de pobre reversibilidade que se caracteriza pela limitação do fluxo aéreo associada a uma resposta inflamatória anormal dos pulmões. Seu desenvolvimento e progressão estão relacionados ao incremento do estresse oxidativo, sendo este um importante componente patogênico da inflamação das vias aéreas nesta doença. Sendo assim, este estudo caso-controle teve por objetivo avaliar e quantificar danos no DNA (pelo do ensaio cometa alcalino simples e modificado com as endonucleases Fpg e Endo III e pelo teste de micronúcleos de esfoliado da mucosa oral) em lipídios (pelo ensaio de TBARS) e proteínas (pelo ensaio com DNPH), bem como avaliar a influência dos polimorfismos de genes envolvidos na Fase I do metabolismo de xenobióticos (CYP1A1 C2453A e CYP2E1 C-1053T), Fase II (GSTM1null, GSTT1null e GSTP1 Ile105Val), e na neutralização de espécies reativas de oxigênio (CAT C-262T e GPx1 Pro198Leu) sobre os biomarcadores. A população estudada compreendeu 51 indivíduos de função pulmonar saudável e 51 pacientes com DPOC da região do Vale do Rio Pardo, RS, Brasil. Os pacientes apresentaram índices de dano superiores no cometa alcalino e modificado com Fpg e Endo III (P<0,001; P=0,023 e P=0,021, respectivamente). Não houve diferença na formação de MN entre os grupos (P=0,651). Os pacientes que não participavam de um programa de reabilitação pulmonar apresentaram índices de peroxidação lipídica superiores aos controles e àqueles que participavam dos exercícios (P<0,001). Adicionalmente, foi encontrada uma tendência a uma maior carbonilação proteica nos pacientes não aderentes ao programa. Todos os polimorfismos investigados apresentaram diferentes efeitos modulatórios nos índices de dano do ensaio cometa, nos controles, pacientes, ou ambos, mas não na formação de micronúcleos. Além de ressaltar os efeitos da inflamação sistêmica típica da DPOC, esse estudo evidencia a influência da variabilidade genética individual sobre o dano não clastogênico no DNA destes pacientes.Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) is a slowly progressive condition of poor reversibility that is characterized by airflow limitation associated with an abnormal inflammatory response of the lungs. Its development and progression are related to increased oxidative stress, which is an important pathogenic component of airway inflammation in this disease. Thus, this case-control study, aimed to evaluate and quantify DNA (using the alkaline and endonuclease-modified comet assay and micronucleus test in exfoliated oral mucosal ), lipid (TBARS) and protein (DNPH assay) damage, and to evaluate the influence of genetic polymorphisms of genes involved in Phase I metabolism of xenobiotics (CYP1A1 C2453A, CYP2E1 C-1053T), Phase II (GSTM1null, GSTT1null, GSTP1 Ile105Val), and neutralization of ROS (CAT C-262T and GPx1 Pro198Leu) on these biomarkers. The target population comprised 51 individuals with healthy pulmonary function and 51 patients with COPD from the Rio Pardo Valley, RS, Brazil. The patients had higher Damage Index (DI) in the alkaline, Fpg and Endo III-modified comet, (P <0.001, P = 0.023 and P = 0.021, respectively). There was no difference in the formation of MN between the groups (P = 0.651). Patients who had not participated in a pulmonary rehabilitation program showed higher levels of lipid peroxidation than the controls and those who participated in the exercises (P <0.001). Additionally, it was found a trend towards a higher protein carbonylation in these non-adherent patients. All investigated polymorphisms had distinct modulatory effects in the comet assay’s DI in controls, patients, or both, but not in the micronucleus formation. Aside from highlighting the effects of the COPD’s typical systemic inflammation, this study stresses the influence of individual genetic variability on non-clastogenic damage in these patients’ DNA

Deciphering the crosstalk : characterisation of the regulation of the ER stress response by the DNA repair enzyme AAG.

The genome is a very dynamic store of genetic information and constantly threatened by endogenous and exogenous damaging agents. To maintain fidelity of the information stored, several robust and overlapping repair pathways, such as the Base Excision Repair (BER) pathway, have evolved. The main BER glycosylase responsible for repairing alkylation DNA damage is the alkyladenine DNA glycosylase (AAG). Repair initiated by AAG can lead to accumulation of cytotoxic intermediates. Here, we report the involvement of AAG in the elicitation of the unfolded protein response (UPR), a mechanism triggered to restore proteostasis in the cell whose dysfunction is implicated in diseases like diabetes, Alzheimer’s disease and cancer. Firstly, we determined that not only human ARPE-19 cells were capable of eliciting the UPR, but that an alkylating agent, methyl methanesulfonate (MMS), also triggers the response, and that in the absence of AAG the response is greatly diminished. Our luciferase reporter assay indicates that the response is activated on multiple branches (IRE1 and ATF6) on both AAG-proficient and deficient cells. Although no transcriptional induction of UPR markers was detected by RT-qPCR at 6 hours post MMS treatment, preliminary western-blot data at 6 and 24h, show activation of key UPR markers (p-eIF2α, BiP and XBP-1) upon MMS treatment in wild-type cells and little or no activation on AAG -/-. To investigate the impact of AAG modulation on the cellular proteome we also conducted a proteomic analysis, identifying 5480 protein groups in wild-type ARPE-19, 5377 in the AAG -/- A2C2 and 5264 in AAG -/- B6C3. After a high-stringency analysis, we identified 13 proteins present only in wild-type cells, indicating promising targets for further investigation into the role of AAG in the UPR. We also identified 44 overrepresented GO-slim terms across all cell lines and 23 overrepresented pathways, mostly related to cellular metabolism processes. Whereas more experiments are required to characterize the nature of AAG’s contribution to the UPR, we demonstrate the existence of crosstalk between the DNA repair response and the ER stress response pathways, that is potentially relevant in a clinical setting

Deciphering the crosstalk : characterisation of the regulation of the ER stress response by the DNA repair enzyme AAG.

The genome is a very dynamic store of genetic information and constantly threatened by endogenous and exogenous damaging agents. To maintain fidelity of the information stored, several robust and overlapping repair pathways, such as the Base Excision Repair (BER) pathway, have evolved. The main BER glycosylase responsible for repairing alkylation DNA damage is the alkyladenine DNA glycosylase (AAG). Repair initiated by AAG can lead to accumulation of cytotoxic intermediates. Here, we report the involvement of AAG in the elicitation of the unfolded protein response (UPR), a mechanism triggered to restore proteostasis in the cell whose dysfunction is implicated in diseases like diabetes, Alzheimer’s disease and cancer. Firstly, we determined that not only human ARPE-19 cells were capable of eliciting the UPR, but that an alkylating agent, methyl methanesulfonate (MMS), also triggers the response, and that in the absence of AAG the response is greatly diminished. Our luciferase reporter assay indicates that the response is activated on multiple branches (IRE1 and ATF6) on both AAG-proficient and deficient cells. Although no transcriptional induction of UPR markers was detected by RT-qPCR at 6 hours post MMS treatment, preliminary western-blot data at 6 and 24h, show activation of key UPR markers (p-eIF2α, BiP and XBP-1) upon MMS treatment in wild-type cells and little or no activation on AAG -/-. To investigate the impact of AAG modulation on the cellular proteome we also conducted a proteomic analysis, identifying 5480 protein groups in wild-type ARPE-19, 5377 in the AAG -/- A2C2 and 5264 in AAG -/- B6C3. After a high-stringency analysis, we identified 13 proteins present only in wild-type cells, indicating promising targets for further investigation into the role of AAG in the UPR. We also identified 44 overrepresented GO-slim terms across all cell lines and 23 overrepresented pathways, mostly related to cellular metabolism processes. Whereas more experiments are required to characterize the nature of AAG’s contribution to the UPR, we demonstrate the existence of crosstalk between the DNA repair response and the ER stress response pathways, that is potentially relevant in a clinical setting