43 research outputs found

    Editorial: Gram-Negative Pathogenesis

    No full text
    International audienceNo abstract availabl

    A bacterial two-hybrid genome fragment library for deciphering regulatory networks of the opportunistic pathogen Pseudomonas aeruginosa.

    No full text
    International audienceBacterial gene regulation is controlled by complex regulatory cascades which integrate input environmental signals and adapt specific and adequate output cellular responses. These complex networks are far from being elucidated, in particular in Pseudomonas aeruginosa. In the present study, we developed bacterial two-hybrid genome fragment libraries of the P. aeruginosa PAO1 strain to identify potential partners involved in the HptB/HsbR/HsbA pathway. This powerful tool, validated by the interaction previously described between HsbR and HsbA proteins, allowed us to demonstrate that the HsbR response regulator dimerizes through its PP2C/ATPase C-terminal effector domain, an observation further confirmed by pull-down experiments. This will also allow us to identify further new partners in this cascade

    Characterization of the Roc Two-component systems in Pseudomonas aeruginosa (a complex regulatory network)

    No full text
    Pseudomonas aeruginosa est une bactérie à Gram négatif à caractère ubiquitaire que l on retrouve dans une grande diversité d environnements. C est un pathogène opportuniste qui est responsable chez l homme d infections chroniques ou aigües qui peuvent être mortelles pour des patients immuno-déficients. L établissement d une infection chronique est généralement associé à la capacité de la bactérie à former un biofilm, qui se définit comme une population bacte rienne attachée sur une surface et englobée par une matrice extracellulaire formée entre autre depolysaccharides. La formation du biofilm est un processus bien défini dans le temps et dans l espace et qui implique la mise en jeu de nombreuses structures de surfaces dont l assemblage est strictement contrôlé. Une des voies de régulation contrôlant cet assemblage est le système à 2composants Roc1 ( regulation of cup genes ). Les gènes cup codent des composants de la voie chaperone-usher qui permet le transport de sous-unités pilines et leur assemblage à la surface bactérienne sous forme de pili. Ces pili Cup sont important dans l établissement du biofilm. Le système Roc1 est aussi impliqué dans la mise en place du système de sécrétion de type III, qui est communément associé aux infections aigues. De fait le système Roc1 peut être considéré comme un interrupteur décidant du mode d infection associé à P. aeruginosa. Le système Roc1 est constitué d un senseur non-orthodoxe (RocS1) et de deux régulateurs de réponse, RocA1 et RocR, dont le domaine effecteur est un domaine de liaison à l ADN ou un domaine EAL à activité phosphodiesterase, respectivement. Il existe également d autres gènes paralogues de Roc1 qui sont le système Roc2 avec RocS2 et RocA2 très similaire à RocS1 et RocA1, ainsi que RocS3 similaire à RocS1. Le travail réalisé au cours de ma thèse a montré qu il existe une régulation croisée entre Roc1 etRoc2. Cependant, chacune des branches du réseau de régulation contrôle l expression d une série de gènes bien spécifiques. Nous avons montré que la signalisation via RocS2 et RocS1 lorsqu elle converge sur RocA1 contrôle l expression des gènes cupC et ce contrôle est totalement indépendantde RocA2. Par contre lorsque la signalisation RocS1 et RocS2 converge vers RocA2 alors ce sont les gènes mexAB-oprM, qui codent une pompe d efflux impliquée dans la résistance aux antibiotiques, dont l expression est alors réprimée.En conclusion, nous avons mis en évidence un modèle unique de régulation croisée qui résulte dans un effet antagoniste entre formation du biofilm et résistance aux antibiotiques. Si cela peut paraître inattendu, quelques données cliniques sont en faveur d une telle balance. En effet, l analyse de souches de P. aeruginosa, isolées à partir de patients atteints de mucoviscidose, révèle que dans ces isolats la pompe MexAB-OprM est inactive. La raison de cette adaptation n est pas élucidée, mais l absence de pompe fonctionnelle pourrait procurer un avantage, une meilleure aptitude à la souche à persister dans cet environnement. Il est également reconnu que dans les poumons de ces patients le mode préféré de développement pour P. aeruginosa est le biofilm. Mises bout à bout ces observations suggèrent donc que le système Roc pourrait être un système de régulation important pour percevoir l environnement du poumon chez le patient mucoviscidosique et déclencher une réponse adaptée.The opportunistic pathogen Pseudomonas aeruginosa is responsible for diverse chronic and acute infections in human. Chronic infections are associated with the capacity of P. aeruginosa to form biofilms. One of the pathways controlling biofilm formation is the Roc1 two-component system, involved in the regulation of cup genes allow the assembly of thin fimbriae at the surface of the bacterium. Cup fimbiae are important in biofilm formation. There exist paralogues of the Roc1 system - the Roc2 and Roc3 system. The work in this thesis has shown that cross-regulation occurs between Roc1 and Roc2. However, each branch in this network appears to control the expression of a specific subset of genes whose role and functions are striking in the context of an infection process. We characterized here a unique model of cross-regulation which results in the antagonistic regulation of biofilm formation and antibiotic resistanceAIX-MARSEILLE2-Bib.electronique (130559901) / SudocSudocFranceF

    Organization and PprB-Dependent Control of the Pseudomonas aeruginosa tad Locus, Involved in Flp Pilus Biology▿ ‡

    No full text
    Bacterial attachment to the substratum involves several cell surface organelles, including various types of pili. The Pseudomonas aeruginosa Tad machine assembles type IVb pili, which are required for adhesion to abiotic surfaces and to eukaryotic cells. Type IVb pili consist of a major subunit, the Flp pilin, processed by the FppA prepilin peptidase. In this study, we investigated the regulatory mechanism of the tad locus. We showed that the flp gene is expressed late in the stationary growth phase in aerobic conditions. We also showed that the tad locus was composed of five independent transcriptional units. We used transcriptional fusions to show that tad gene expression was positively controlled by the PprB response regulator. We subsequently showed that PprB bound to the promoter regions, directly controlling the expression of these genes. We then evaluated the contribution of two genes, tadF and rcpC, to type IVb pilus assembly. The deletion of these two genes had no effect on Flp production, pilus assembly, or Flp-mediated adhesion to abiotic surfaces in our conditions. However, our results suggest that the putative RcpC protein modifies the Flp pilin, thereby promoting Flp-dependent adhesion to eukaryotic cells

    NMR assignments of the GacS histidine-kinase periplasmic detection domain from Pseudomonas aeruginosa PAO1

    Get PDF
    International audiencePseudomonas aeruginosa is a highly adaptable opportunistic pathogen. It can infect vulnerable patients such as those with cystic fibrosis or hospitalized in intensive care units where it is responsible for both acute and chronic infection. The switch between these infections is controlled by a complex regulatory system involving the central GacS/GacA two-component system that activates the production of two small non-coding RNAs. GacS is a histidine kinase harboring one periplasmic detection domain, two inner-membrane helices and three H1/D1/H2 cytoplasmic domains. By detecting a yet unknown signal, the GacS histidine-kinase periplasmic detection domain (GacSp) is predicted to play a key role in activating the GacS/GacA pathway. Here, we present the chemical shift assignment of 96 % of backbone atoms (HN, N, C, Ca, Cb and Ha), 88 % aliphatic hydrogen atoms and 90 % of aliphatic carbon atoms of this domain. The NMR-chemical shift data, on the basis of Talos server secondary structure predictions, reveal that GacSp consists of 3 b-strands, 3 a-helices and a major loop devoid of secondary structures

    Effects of ISSo2 Insertions in Structural and Regulatory Genes of the Trimethylamine Oxide Reductase of Shewanella oneidensis

    No full text
    We have isolated three Shewanella oneidensis mutants specifically impaired in trimethylamine oxide (TMAO) respiration. The mutations arose from insertions of an ISSo2 element into torA, torR, and torS, encoding, respectively, the TMAO reductase TorA, the response regulator TorR, and the sensor TorS. Although TorA is not the sole enzyme reducing TMAO in S. oneidensis, growth analysis showed that it is the main respiratory TMAO reductase. Use of a plasmid-borne torE′-lacZ fusion confirmed that the TorS-TorR phosphorelay mediates TMAO induction of the torECAD operon

    Development of a genetic tool for activating chromosomal expression of cryptic or tightly regulated loci in Pseudomonas aeruginosa.

    No full text
    International audienceA method for replacing endogenous promoter by a constitutive promoter in Pseudomonas aeruginosa is described. Plasmid pKNG101, a broadly used shuttle suicide vector in P. aeruginosa, was improved to allow chromosomal introduction of a Plac promoter in front of any kind of gene especially those with unknown function. Using this strategy alleviates the need for cloning difficulties encountered in this bacteria and antibiotic marker selection
    corecore