Cytochrome P4504A inhibitors attenuate the exaggerated natriuretic response to volume expansion in thyroidectomized rats

Thyroidectomy augments the natriuretic response to volume expansion; however, the mechanism remains unknown. This study assessed the role of 20-hydroxyeicosatetraenoic acid (20-HETE) in the natriuretic response to an acute volume expansion in hypothyroid rats. Urine flow (1.9-fold), sodium excretion (2.4-fold), fractional sodium excretion (3.8-fold), and distal delivery of sodium (4.1-fold) increased to a greater extent in thyroidectomized rats (TX) than in sham-operated controls (SHAM) following i.v. infusion of isotonic saline (5% body weight) over 60 min. This was associated with inhibition of both proximal and distal tubular reabsorption of sodium. Administration of two mechanistic and chemical dissimilar inhibitors of the synthesis of 20- HETE, 1-aminobenzotriazole (ABT), and N-hydroxy-N?-(-4-butyl-2-methylphenyl) formamidine (HET0016) decreased the natriuretic response in TX rats. Glomerular filtration rate was lower in TX than in SHAM rats and was not altered by the CYP4A inhibitors. The expression, intrarenal distribution, and the formation of 20-HETE and expoxygenase metabolites of arachidonic acid were similar in the cortex and medulla of SHAM and TX rats. These results suggest that CYP4A-derived metabolites of arachidonic acid play an important role in the enhanced natriuretic response to volume expansion in hypothyroid rats even though TX did not alter the expression or activity of these enzymes.Fil: Colombero Rivas, Cecilia Edith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Venara, Marcela Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Gonzalez, Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Roman, Richard J.. University Of Mississippi; Estados UnidosFil: Nowicki, Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; Argentin

Naturaleza analógica: obra en proceso

Somos cuatro artistas de la ciudad de Rosario, Santa Fe. Desde mediados del año 2014 estamos trabajando en una obra de danza/ performance llamada Naturaleza analógica con la cual ganamos el concurso Cosecha Escénica 2014 de la Municipalidad de nuestra ciudad, premio que nos posibilitó, entre otras cosas dedicarnos a trabajar intensamente junto a otras profesionales como Fabiana Capriotti, Marina Giancaspro y Ana Varela. Propuesta que se da en el marco de un devenir constante del presente, jugando con la luz y la oscuridad, proyecciones de imágenes aleatorias, cuerpos- movimiento y sonidos que se generan del mismo hacer y del contexto. Es una obra abierta, que danza entre lo íntimo y lo público, que está todo el tiempo a la expectativa de lo inesperado, que muta, que se mueve, que se alimenta. Específicamente, Naturaleza analógica es una obra / performance de danza en la cual la significación, el espacio escénico y los relatos dramáticos no preexisten, sino que se conforman y entretejen en la interacción de todos los elementos que intervienen en la propuesta.Eje 1: Investigaciones sobre procesos creativos. Talleres, obras y performancesFacultad de Humanidades y Ciencias de la Educació

Intracellular signaling pathways triggered by the stimulation of the G-coupled Protein Receptor GPR75 by 20-hydroxyeicosatetraenoic acid (20-HETE) in androgen independent prostate cancer cells

20-HETE, the product of 20-hydroxylation of arachidonic acid by cytochrome P450 isoforms (CYP4F2 and CYP4A11), has a role in the oncogenesis of several human tumors. Recently, the GPR75 receptor has been identified as the target for 20-HETE. We have shown that androgen independent prostate cancer cells (PC-3) express GPR75. The aim of this study was to identify intracellular signaling molecules activated upon GPR75 stimulation by 20-HETE in PC-3 cells.Cells were incubated with 20-HETE (0.1 nM) in the presence or absence of the antagonist of the 20-HETE receptor, AAA (5 or 10 uM). Protein expression of the inducible focal adhesion protein Hydrogen Peroxide Inducible Clone-5 (HIC-5), the phosphorylated and total form of NF-kB, AKT, p38 MAP-Kinase (p38) and EGFR were assessed by western blot. Intracellular localization of p-AKT, NF-kB and PKCa were determined by immunofluorescence and subcellular fractionation. Migration of PC-3 cells incubated with diferentes inhibitors were evaluated by scratch wound healing assay. Results were analyzed using one-way ANOVA followed by Dunnet?s.Incubation with 20-HETE (2 h) increased the phosphorylation of EGFR, NF-kB and AKT by 146, 172 and 219%, respectively (vs control, p<0.01 for NF-kB, and p<0.001 for EGFR and AKT, n=3), and this was inhibited by AAA (vs 20-HETE alone, p<0.05 for NF-kB, p<0.01 for AKT and p<0.001 for EGFR). AAA alone increased p-38 phosphorylation by 248% (p<0.001 vs control, n=3). 20-HETE (1 h) induced the translocation of p-AKT to the nuclei (p<0.001, n=3) and promoted the redistribution of PKCa out of the nuclei (p<0.05, n=3) to the plasma membrane (p<0.001). Both effects were inhibited by AAA (vs 20-HETE, p<0.01 for AKT and p<0.05 for PKCa). AAA alone reduced the nuclear signal of p-AKT and NF-kB usually activated in tumoral cells (p<0.001 for both, n=3). Additionally, 20-HETE (12 h) increased by 150% the protein expression of Hic-5 (p<0.0001, n=5) and this was abolished by AAA (p<0.001).Our results show that 20-HETE modulates signaling pathways known to be deregulated in malignant cells through the GPR75-axis.Fil: Cardenas, Sofía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Colombero, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Panelo, Laura Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Dakarapu, Rambabu. University of Texas. Southwestern Medical Center; Estados UnidosFil: Falck, John. University of Texas. Southwestern Medical Center; Estados UnidosFil: Costas, Monica Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Nowicki, Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaReunión anual de las Sociedades de BiocienciaMar del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaAsociación Argentina de Farmacología ExperimentalSociedad Argentina de BiologíaAsociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de LaboratorioSociedad Argentina de Protozoologí

Estudio de la participación de los productos del metabolismo del ácido araquidónico por el citocromo P450 en procesos tumorales

Fil: Colombero Rivas, Cecilia Edith del Valle. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, ArgentinaLos derivados hidroxilados (20-HETE) y epoxigenados (EETs) del ácido araquidónico por acción de enzimas del citocromo P450 (CYP) son mediadores lipídicos que actúan sobre varias vías de señalización intracelular. La expresión de estos CYPs se ha encontrado aumentada en varias neoplasias. Asimismo, se ha demostrado el efecto de estos eicosanoides sobre la viabilidad y malignidad de algunas células tumorales.\nLa hipótesis general de este trabajo es que el 20-HETE y los EETs participan en procesos claves para el desarrollo tumoral del feocromocitoma y del cáncer de próstata (CaP).\nEl feocromocitoma es un tumor derivado de las células cromafines ubicadas en la médula adrenal o en ganglios distribuidos en el organismo. Entre el 25-40% de estos tumores forman parte de un síndrome familiar hereditario, y se agrupan de acuerdo a las mutaciones en los genes susceptibles como esporádicos, pseudo-hipóxicos y proliferativos.\nEl desarrollo del CaP depende de los andrógenos circulantes en las primeras etapas de la enfermedad. En estadios más avanzados y en ausencia de estas hormonas, el receptor de andrógenos (RA) sigue activo, aunque con una señalización aberrante.\nPara el feocromocitoma, se evaluó la expresión de los CYPs con actividad de 20-hidroxilasa y epoxigenasa en muestras humanas, se realizaron experimentos utilizando una línea celular de feocromocitoma murino (MPC) en presencia de 20-HETE y EETs in vitro. Además, se utilizaron las células MPC para la obtención de un modelo murino de feocromocitoma en el cual se utilizó un inhibidor de la actividad de 20-hidroxilasas y epoxigenasas (ABT) para evaluar el crecimiento tumoral.\nEn feocromocitomas humanos, se demostró la expresión del ARNm y la proteína de las 20-hidroxilasas (CYP4A11 y CYP4F2), las epoxigenasas (CYP2C8 y CYP2J2), y la enzima encargada de degradar los EETs, epóxido hidrolasa soluble (sEH). Al agrupar los tumores de acuerdo a su estirpe genética se encontraron diferencias en la expresión proteica de CYP2J2 y en la del ARNm de la sEH. Estas diferencias impactaron en la actividad de los CYPs analizados, los tumores del clúster proliferativos fueron los mayores productores de 20-HETE y EETs.\nEn células MPC, la incubación con EETs (11,12-EET o 14,15-EET: 10nM) en un medio pobre en suero, aumentó la viabilidad a las 48hs un 60%-89%* respecto al control. Esto se pudo explicar por un aumento en la proliferación celular entre un 16-18%* y una disminución del 40%* en la apoptosis respecto a los controles. Por otro lado, la incubación con 20-HETE no tuvo efecto sobre la viabilidad de estas células.\nEn el modelo murino, la administración de ABT (50mg/kg/día) redujo el crecimiento tumoral en alrededor de un 50%* respecto a los controles, se observó una disminución en la vascularización de los tumores tratados con ABT mientras que la proliferación celular fue similar en ambos grupos.\nDe estos resultados se deduce que, la expresión y actividad de las 20-hidroxilasas y epoxigenasas depende de la estirpe genética de los feocromocitomas, y que el 11,12-EET y el 14,15-EET forman parte de los mecanismos celulares que sostienen la proliferación y previenen la apoptosis celular.\nPara el estudio del CaP se utilizaron dos líneas celulares con diferente sensibilidad a los andrógenos: LNCaP: sensibles y PC-3: insensibles, sobre las cuales se evaluó el efecto del 20-HETE o del inhibidor de su síntesis (HET0016) sobre la viabilidad celular y las características in vitro que se relacionan con el proceso de metástasis.\nSe observó una respuesta heterogénea a la inhibición de la síntesis de 20-HETE, que no afectó la viabilidad de células PC-3 mientras que disminuyó la de las células LNCaP en un 64%* (HET0016 10?M), este efecto se observó consistentemente en presencia de andrógenos, ya sea provistos por el suero fetal bovino o en presencia de dihidrotestosterona. La modificación en la viabilidad en ambos casos pudo explicarse por una disminución del 40%* en la proliferación celular y un aumento de 15 veces* en el número de células que entran en apoptosis. La incubación con 20-HETE (50nM) aumentó la viabilidad solamente en células LNCaP a través de una disminución en la apoptosis sin afectar la proliferación celular.\nFinalmente, la incubación de células LNCaP con HET0016 10?M redujo la expresión del RA (ARNm y proteína) y la producción de PSA, lo que podría explicar las diferencias en la respuesta encontrada. Además, la incubación de células LNCaP con DHT (10nM) aumentó la expresión y actividad del CYP4F2.\nLa incubación de células PC-3 con 20-HETE (100nM) aumentó la expresión de un marcador de estirpe mesenquimática (vimentina), la migración celular en un 42%*, y la actividad de metaloproteasa-2, mientras que la ausencia de 20-HETE (HET0016) aumentó la expresión del marcador de estirpe epitelial (e-cadherina), disminuyó la migración celular en un 34%*al desorganizar los filamentos de actina, y disminuyó la resistencia a la muerte inducida por pérdida de anclaje.\nEstos resultados sugieren que los efectos del 20-HETE sobre la viabilidad de células de cáncer de próstata dependen de la señalización mediada por los andrógenos, mientras que sus efectos sobre la invasión celular son independientes de ella. Asimismo, en las células LNCaP la disponibilidad de 20-HETE es necesaria para mantener la expresión del receptor de andrógenos.\nEn resumen, tanto el 20-HETE como los EETs emergen como noveles mediadores celulares de importancia en la proliferación, la apoptosis, la angiogénesis y la malignidad en los modelos tumorales analizados, con un perfil diferente de actividad según la estirpe celular y el comportamiento biológico de la misma.\n*p<0,05 vs condición contro

20-Hydroxyeicosatetraenoic acid (20-hete) promotes a malignant phenotype in human castration-resistant prostate cancer cells through stimulation of the g protein-coupled receptor gpr75

20-Hydroxyeicosatetraenoic acid (20- HETE), the product of 20-hydroxylation of arachidonic acid by cytochrome P450 isoforms (CYP4F2 and CYP4A11), has a role in the oncogenesis of several human tumors. Recently, the GPR75 receptor has been identified as the target for 20-HETE. We have shown that androgen independent prostate cancer cells (PC-3) express GPR75. The aim of this study was to assess in vitro if 20-HETE/GPR75 modify the metastatic features of PC-3 cells. Cells were incubated with 20-HETE or its stable analog 5,14- HEDGE (both 0.1 nM) in the presence or absence of two different antagonists of the 20-HETE receptor, AAA or 19-HEDE (both 5 or 10 uM). The following assays were performed: e-cadherin and vimentin protein expression (epithelial-mesenchymal transition), zymography (release of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2)), immunofluorescence and p-FAK (changes of cytoskeleton), scratch wound healing (migration), and soft agar colony formation (anchorage-independent growth). Results were analyzed using one-way ANOVA followed by Dunnet’s. 20-HETE (24 h) increased by 150 % the expression of vimentin (p<0.0001, n= 3) and diminished by 40 % the expression of ecadherin (p<0.0001, n= 3), whereas these effects were reversed by AAA (p<0.0001 and p<0.05, respectively). 20-HETE increased by 52 % the release of MMP-2 (p<0.05, n= 3), and this was also inhibited by AAA (p<0.001). AAA disorganized the actin filaments throughout PC-3 cells, while tubulin filaments remained unchanged. Also, 20-HETE increased by 89 % FAK phosphorylation (Y397) (p<0.0001, n= 3). 20-HETE increased by 147 % cell migration rate (p<0.0001, n= 3) and this effect was reverted by both antagonists, AAA or 19-HEDE (p<0.05 and p<0.0001, respectively), or by knockdown of GPR75 (p<0.0001). Finally, 5,14-HEDGE (21 days) formed twice the number of colonies vs. control (p<0.05, n= 2) and this was abolished by AAA (p<0.05). These results strongly suggest a role for GPR75 in 20-HETE-mediated metastatic features in PC-3 cells.Fil: Cardenas, Sofia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Colombero, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Panello, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Dakarapu, Rambabu. University of Texas. Southwestern Medical Center; Estados UnidosFil: Falck, John. University of Texas. Southwestern Medical Center; Estados UnidosFil: Costas, Monica Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Nowicki, Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaLXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); LI Reunión Anual de la Asociación Argentina de Farmacología Experimental (SAFE); XXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biología (SAB); XXXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología (SAP) y IX Reunión Anual de la Asociación Argentina de Nanomedicinas (NANOMED-ar)Mar del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaAsociación Argentina de Farmacología ExperimentalSociedad Argentina de BiologíaSociedad Argentina de ProtozoologíaAsociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de LaboratorioAsociación Argentina de Nanomedicina

Cytochrome 450 metabolites of arachidonic acid (20-HETE, 11,12-EET and 14,15-EET) promote pheochromocytoma cell growth and tumor associated angiogenesis

The importance of cytochrome P450 (CYP)-derived arachidonic acid (AA) metabolites, 20-hydroxyeicosatetraenoic acid (20-HETE) and epoxyeicosatrienoic acids (EETs) as tumor growth promotors has already been described in several cancer types. The aim of this study was to evaluate the role of these compounds in the biology of pheochromocytoma/paraganglioma. These tumors originate from chromaffin cells derived from adrenal medulla (pheochromocytomas) or extra-adrenal autonomic paraganglia (paragangliomas), and they represent the most common hereditary endocrine neoplasia. According to mutations in the driver genes, these tumors are divided in two clusters: pseudo-hypoxic and kinase-signaling EETs, but not 20-HETE, exhibited a potent ability to sustain growth in a murine pheochromocytoma cell line (MPC) in vitro, EETs promoted an increase in cell proliferation and a decrease in cell apoptosis. In a mouse model of pheochromocytoma, the inhibition of CYP-mediated AA metabolism using 1-aminobenzotriazol resulted in slower tumor growth, a decreased vascularization, and a lower final volume. Also, the expression of AA-metabolizing CYP monooxygenases was detected in tumor samples from human origin, being their apparent abundance and the production of both metabolites higher in tumors from the kinase-signaling cluster. This is the first evidence of the importance of CYP- derived AA metabolites in the biology and development of pheochromocytoma/paraganglioma tumors.Fil: Cecilia, Colombero. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Cárdenas, Sofía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Venara, Marcela Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Martin, Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Pennisi, Patricia Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Barontini, Marta Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Nowicki, Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentin

20-Hydroxyeicosatetraenoic acid (20- hete) promotes a malignant phenotype in human castration-resistant prostatecancer cells through stimulation of the g protein-coupled receptor GPR75

20-Hydroxyeicosatetraenoic acid (20- HETE), the product of 20-hydroxylation of arachidonic acid by cytochrome P450 isoforms (CYP4F2 and CYP4A11), has a role in the oncogenesis of several human tumors. Recently, the GPR75 receptor has been identified as the target for 20-HETE. We have shown that androgen independent prostate cancer cells (PC-3) express GPR75. The aim of this study was to assess in vitro if 20-HETE/GPR75 modify the metastatic features of PC-3 cells. Cells were incubated with 20-HETE or its stable analog 5,14- HEDGE (both 0.1 nM) in the presence or absence of two different antagonists of the 20-HETE receptor, AAA or 19-HEDE (both 5 or 10 uM). The following assays were performed: e-cadherin and vimentin protein expression (epithelial-mesenchymal transition), zymography (release of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2)), immunofluorescence and p-FAK (changes of cytoskeleton), scratch wound healing (migration), and soft agar colony formation (anchorage-independent growth). Results were analyzed using one-way ANOVA followed by Dunnet’s. 20-HETE (24 h) increased by 150 % the expression of vimentin (p<0.0001, n= 3) and diminished by 40 % the expression of ecadherin (p<0.0001, n= 3), whereas these effects were reversed by AAA (p<0.0001 and p<0.05, respectively). 20-HETE increased by 52 % the release of MMP-2 (p<0.05, n= 3), and this was also inhibited by AAA (p<0.001). AAA disorganized the actin filaments throughout PC-3 cells, while tubulin filaments remained unchanged. Also, 20-HETE increased by 89 % FAK phosphorylation (Y397) (p<0.0001, n= 3). 20-HETE increased by 147 % cell migration rate (p<0.0001, n= 3) and this effect was reverted by both antagonists, AAA or 19-HEDE (p<0.05 and p<0.0001, respectively), or by knockdown of GPR75 (p<0.0001). Finally, 5,14-HEDGE (21 days) formed twice the number of colonies vs. control (p<0.05, n= 2) and this was abolished by AAA (p<0.05). These results strongly suggest a role for GPR75 in 20-HETE-mediated metastatic features in PC-3 cells.Fil: Cárdenas, Sofía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Colombero, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Panelo, Laura Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Dakarapu, Rambabu. University of Texas. Southwestern Medical Center; Estados UnidosFil: Falck, John. University of Texas. Southwestern Medical Center; Estados UnidosFil: Costas, Monica Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Nowicki, Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaReunión Anual de las Sociedades de BiocienciaMar Del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClinicaAsociación Argentina de Farmacología ExperimentalSociedad Argentina de BiologíaAsociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de LaboratorioSociedad Argentina de Protozoologí

Role of 20-Hydroxyeicosatetraenoic Acid (20-HETE) in androgen-mediated cell viability in prostate cancer cells

20-Hydroxyeicosatetraenoic acid (20-HETE) is generated intracellularly through the ω-hydroxylation of arachidonic acid by the cytochrome P450 (in humans, CYP4A11 and CYP4F2). 20-HETE induces mitogenic responses in different cancer cells. The aim of this study was to analyze how 20-HETE impacts cell survival, proliferation, and apoptosis in prostate cancer cells. Incubation of the human androgen-sensitive cells (LNCaP) with 1?10 μM HET0016 (a selective inhibitor of 20-HETE synthesis) reduced cell viability by 49*?64%* (*p < 0.05 vs. control). This was explained by a reduction in cell proliferation (vehicle, 46 ± 3%; 1 μM, 23 ± 3%*; 10 μM, 28 ± 3%*) and by an increase in apoptosis (vehicle, 2.1 ± 0%; 1 μM, 16 ± 4%*; 10 μM, 31 ± 3%*). Furthermore, the increase in LNCaP cell viability induced by dihydrotestosterone (DHT, 0.1 nM) was abrogated by 30*?42%* by 1?10 μM HET0016. Incubation with 20-HETE (5?1000 nM) increased LNCaP cell viability up to 50%*, together with a 70%* reduction in apoptosis. PC-3 (androgen-insensitive) cell viability was not affected by either HET0016 or 20-HETE. In LNCaP cells, HET0016 (10 μM) diminished the expression of androgen receptors (AR): messenger RNA (mRNA) (40%*) and protein (50%*). DHT (10 nM) augmented CYP4F2 protein expression (1.9-fold*) and 20-HETE levels (50%*). Oppositely, enzalutamide (AR antagonist) reduced CYP4F2 mRNA and protein expressions by 30 and 25%, respectively. Thus, intracellular availability of 20-HETE is necessary to sustain LNCaP cell viability. 20-HETE may act as a signaling molecule in the pathways involved in LNCaP cell viability upon stimulation of the AR. This effect may be partially attributed to its role on securing normal AR expression levels that in turn contribute to maintain intracellular levels of 20-HETE.Fil: Colombero Rivas, Cecilia Edith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Papademetrio, Daniela Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Sacca, Paula Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Mormandi, Eduardo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos Dr. Carlos Durand; ArgentinaFil: Alvarez Carbonetto, Elida M. del C.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Nowicki, Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentin

GPR75 receptor mediates 20-HETE-signaling and metastatic features of androgen-insensitive prostate cancer cells

Purpose: Recent studies have shown that 20-hydroxyeicosatetraenoic acid (20-HETE) is a key molecule in sustaining androgen-mediated prostate cancer cell survival. Thus, the aim of this study was to determine whether 20-HETE can affect the metastatic potential of androgen-insensitive prostate cancer cells, and the implication of the newly described 20-HETE receptor, GPR75, in mediating these effects. Methods: The expression of GPR75, protein phosphorylation, actin polymerization and protein distribution were assessed by western blot and/or fluorescence microscopy. Additionally, in vitro assays including epithelial-mesenchymal transition (EMT), metalloproteinase-2 (MMP-2) activity, scratch wound healing, transwell invasion and soft agar colony formation were used to evaluate the effects of 20-HETE agonists/antagonists or GPR75 gene silencing on the aggressive features of PC-3 cells. Results: 20-HETE (0.1 nM) promoted the acquisition of a mesenchymal phenotype by increasing EMT, the release of MMP-2, cell migration and invasion, actin stress fiber formation and anchorage-independent growth. Also, 20-HETE augmented the expression of HIC-5, the phosphorylation of EGFR, NF-κB, AKT and p-38 and the intracellular redistribution of p-AKT and PKCα. These effects were impaired by GPR75 antagonism and/or silencing. Accordingly, the inhibition of 20-HETE formation with N-hydroxy-N′-(4-n-butyl-2-methylphenyl) formamidine (HET0016) elicited the opposite effects. Conclusions: The present results show for the first time the involvement of the 20-HETE-GPR75 receptor in the activation of intracellular signaling known to be stimulated in cell malignant transformations leading to the differentiation of PC-3 cells towards a more aggressive phenotype. Targeting the 20-HETE/GPR75 pathway is a promising and novel approach to interfere with prostate tumor cell malignant progression.Fil: Cardenas Alcoser, Elena Sofia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Colombero Rivas, Cecilia Edith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Panelo, Laura Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Dakarapu, Rambabu. University of Texas Southwestern Medical Center; Estados UnidosFil: Falck, John R.. University of Texas Southwestern Medical Center; Estados UnidosFil: Costas, Monica Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Nowicki, Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentin