Zona pellucida from fertilised human oocytes induces a voltage-dependent calcium influx and the acrosome reaction in spermatozoa, but cannot be penetrated by sperm

BACKGROUND: The functions of three zona glycoproteins, ZP1, ZP2 and ZP3 during the sperm-zona pellucida (ZP) interaction are now well established in mice. The expression of an additional zona glycoprotein, ZPB/4, in humans, led us to reconsider the classical mouse model of gamete interaction. We investigated the various functions of human ZP (hZP) during the interaction of spermatozoa with fertilised and unfertilised oocytes. RESULTS: The hZP of fertilised oocytes retained their ability to bind sperm (albeit less strongly than that from unfertilised oocytes), to induce an intraspermatic calcium influx through voltage-dependent channels similar to that observed with hZP from unfertilised oocytes and to promote the acrosome reaction at a rate similar to that induced by the ZP of unfertilised oocytes (61.6 ± 6.2% vs60.7 ± 9.1% respectively). Conversely, the rate of hZP penetrated by sperm was much lower for fertilised than for unfertilised oocytes (19% vs 57% respectively, p < 0.01). We investigated the status of ZP2 in the oocytes used in the functional tests, and demonstrated that sperm binding and acrosome reaction induction, but not ZP penetration, occurred whether or not ZP2 was cleaved. CONCLUSION: The change in ZP function induced by fertilisation could be different in human and mouse species. Our results suggest a zona blocking to polyspermy based at the sperm penetration level in humans

In Vitro Fertilization and Embryo Culture Strongly Impact the Placental Transcriptome in the Mouse Model

BACKGROUND: Assisted Reproductive Technologies (ART) are increasingly used in humans; however, their impact is now questioned. At blastocyst stage, the trophectoderm is directly in contact with an artificial medium environment, which can impact placental development. This study was designed to carry out an in-depth analysis of the placental transcriptome after ART in mice. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: Blastocysts were transferred either (1) after in vivo fertilization and development (control group) or (2) after in vitro fertilization and embryo culture. Placentas were then analyzed at E10.5. Six percent of transcripts were altered at the two-fold threshold in placentas of manipulated embryos, 2/3 of transcripts being down-regulated. Strikingly, the X-chromosome harbors 11% of altered genes, 2/3 being induced. Imprinted genes were modified similarly to the X. Promoter composition analysis indicates that FOXA transcription factors may be involved in the transcriptional deregulations. CONCLUSIONS: For the first time, our study shows that in vitro fertilization associated with embryo culture strongly modify the placental expression profile, long after embryo manipulations, meaning that the stress of artificial environment is memorized after implantation. Expression of X and imprinted genes is also greatly modulated probably to adapt to adverse conditions. Our results highlight the importance of studying human placentas from ART

Optimal Timing for Oocyte Denudation and Intracytoplasmic Sperm Injection

Objectives. To analyze the impact of oocyte denudation and microinjection timings on intracytoplasmic sperm injection (ICSI) outcomes. Study Design. We included ICSI cycles with the following parameters: rank 1 or 2, female age <36 years, male factor infertility, long protocol using GnRH agonist and rFSH for ovarian stimulation, and use of freshly ejaculated sperm (=110). Several ICSI parameters were analyzed according to the time between oocyte retrieval and denudation (1) and the time between denudation and ICSI (2) using a statistical logistic regression analysis. Results. Neither 1 nor 2 had a significant influence on the Metaphase II (MII) rate but the fertilisation rate (FR) showed a significant improvement when 1 was longer (optimal results at 1=3 hours) while FR significantly decreased with the increase of 2. Optimal implantation (IR) and pregnancy (PR) rates were obtained when 1 was around 2 hours. Conclusion. Incubation of oocytes around 2 hours between retrieval and denudation may not increase MII rate but appears to lead to the optimal combination of FR and IR

Pathogenic Mouse Hepatitis Virus or Poly(I:C) Induce IL-33 in Hepatocytes in Murine Models of Hepatitis.

International audienceThe IL-33/ST2 axis is known to be involved in liver pathologies. Although, the IL-33 levels increased in sera of viral hepatitis patients in human, the cellular sources of IL-33 in viral hepatitis remained obscure. Therefore, we aimed to investigate the expression of IL-33 in murine fulminant hepatitis induced by a Toll like receptor (TLR3) viral mimetic, poly(I:C) or by pathogenic mouse hepatitis virus (L2-MHV3). The administration of poly(I:C) plus D-galactosamine (D-GalN) in mice led to acute liver injury associated with the induction of IL-33 expression in liver sinusoidal endothelial cells (LSEC) and vascular endothelial cells (VEC), while the administration of poly(I:C) alone led to hepatocyte specific IL-33 expression in addition to vascular IL-33 expression. The hepatocyte-specific IL-33 expression was down-regulated in NK-depleted poly(I:C) treated mice suggesting a partial regulation of IL-33 by NK cells. The CD1d KO (NKT deficient) mice showed hepatoprotection against poly(I:C)-induced hepatitis in association with increased number of IL-33 expressing hepatocytes in CD1d KO mice than WT controls. These results suggest that hepatocyte-specific IL-33 expression in poly(I:C) induced liver injury was partially dependent of NK cells and with limited role of NKT cells. In parallel, the L2-MHV3 infection in mice induced fulminant hepatitis associated with up-regulated IL-33 expression as well as pro-inflammatory cytokine microenvironment in liver. The LSEC and VEC expressed inducible expression of IL-33 following L2-MHV3 infection but the hepatocyte-specific IL-33 expression was only evident between 24 to 32h of post infection. In conclusion, the alarmin cytokine IL-33 was over-expressed during fulminant hepatitis in mice with LSEC, VEC and hepatocytes as potential sources of IL-33

Le statut nucléaire est-il un critère prédicitf de la qualité embryonnaire et du potentiel implantatoire

Les critères morphologiques permettant de sélectionner les embryons pour le transfert sont étroitement liés entre eux, rendant le pronostic implantatoire de chacun difficile à mesurer. Le Statut Nucléaire des embryons à leur deuxième jour de développement a fait l objet d une étude rétrospective. Les modèles statistiques étudiant chaque paramètre indépendament les uns des autres révèlent, que l absence de BMN et une proportion élevée de blastomères contenant un noyau visible sont majoritairement observés quand les embryons ont été vus clivés précocement, possèdent 4 blastomères et 0 % de fragmentation à J2, et lorsqu ils ont été fécondés avec un sperme frais éjaculé en ICSI; et que le clivage précoce, le stade de clivage et le degré de fragmentation ont un effet propre sur les taux d implantation. Cependant l impact du statut nucléaire s est révélé non significatif suggérant qu il ait un rôle dépendant des autres paramètres morphologiques sur les TI.Morphological criteria allowing to choose embryos for the transfer are closely linked between them, making implantatory forecast of each difficult to measure. The Nuclear Status of embryos in their second day of development made the object of a retrospective study. The statistical models studying every parameter independently reveal, that the absence of BMN and a high proportion of blastomere containing a visible core are predominantly noticed when embryos were seen to be cleaved early, have 4 blastomeres and 0 % of fragmentation to J2, and when they being fertilized with a cool sperm ejaculated in ICSI; and that the early cleavage, the cleavage stage and the degree of fragmentation have an appropriate effect on the implantation rates. However the impact of nuclear status turned out to be not significant suggesting that it has a role dependent of the other morphological parameters on IR.CHATENAY M.-PARIS 11-BU Pharma. (920192101) / SudocSudocFranceF

Azoospermie obstructive et Aide Médicale à la Procréation (AMP) (intérêt du niveau de recueil des spermatozoïdes et de leur congélation)

La prise en charge en AMP (Aide Médicale à la Procréation) de couples dont l'homme est porteur d'une azoospermie obstructive a considérablement progressée depuis l'avènement de l'ICSI et le développement des prélèvements chirurgicaux de spermatozoïdes. Cependant, l'influence sur les résultats de l'ICSI du gamète mâle, et notamment de son origine, n'est pas très bien connue. Le but de ce travail était d'étudier, dans différentes étiologies d'azoospermie obstructive, les conséquences du choix du niveau de recueil des spermatozoïdes, testiculaire ou épididymaire, sur les tentatives d'ICSI. L'étude a porté sur 373 tentatives d'ICSI pour 178 couples. 120 cycles ont été réalisés à partir de spermatozoïdes testiculaires et 253 cycles à partir de spermatozoïdes épididymaires. Les taux de fécondation, de clivage embryonnaire, d'implantation, de grossesse clinique et d'accouchement étaient comparables. Toutefois le taux de FCS obtenu avec les spermatozoïdes testiculaires était significativement supérieur à celui obtenu avec des spermatozoïdes épididymaires. Cette différence ne peut s'expliquer pas par l'âge des femmes, ni par une pathologie ovarienne éventuellement associée, ni par des antécédents masculins ou par la congélation préalable des spermatozoïdes. Ces résultats demandant à être confirmés, nous invitent à réfléchir sur la stratégie même, du choix du prélèvement chirurgical de spermatozoïdes chez des hommes atteints d'une azoospermie obstructive.NANTES-BU Médecine pharmacie (441092101) / SudocSudocFranceF

Influence de la fécondation in vitro sur la mise en place de l'inactivation du chromosome X au cours du développement embryonnaire pré-implantatoire chez la souris

PARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Détection de l ARN VIH-1 dans le plasma séminal chez des patients sous thérapie antirétrovirale combinée avec une charge virale indétectable dans le sang

Il est désormais acquis que les thérapies antirétrovirales combinées (cARV) réduisent la charge virale VIH-1 dans le sang et le plasma séminal. Des études ont rapporté que le VIH-1 était indétectable dans le plasma séminal chez des patients traités et avec une charge virale sanguine indétectable. L objectif de cette étude rétrospective était de déterminer la fréquence de détection de l ARN VIH-1 dans le sperme.De janvier 2006 à décembre 2011, 88 hommes ont été inclus dans notre service d AMP. Ils ont effectué 306 recueils de sperme correspondant à 177 congélations (deux recueils effectués à une heure d intervalle (n=129) ou un seul recueil (n=48)). Tous les patients étaient sous cARV avec une charge virale VIH-1 indétectable dans le sang depuis au moins 6 mois. La quantification de l ARN VIH-1 dans le plasma séminal a été effectuée en utilisant la trousse Roche CobasTaqman HIV-1 test.L ARN VIH-1 était détectable dans 23 recueils (7,5%) pour 17 patients (19,3%), avec des prévalences stables d une année sur l autre. Pour les congélations réalisées avec 2 recueils prélevés à une heure d intervalle nous avons montré une discordance entre le premier et le second recueil dans 9,3% (12/129) des cas.Nos résultats confirment l excrétion intermittente du VIH-1 dans le sperme mais sur des intervalles très courts, ce qui n avait encore jamais été démontré.PARIS6-Bibl.Pitié-Salpêtrie (751132101) / SudocSudocFranceF

L'origine des vacuoles spermatiques observées en MSOME est-elle acrosomique ? (étude en MSOME/fluorescence)

PARIS7-Xavier Bichat (751182101) / SudocSudocFranceF

Désir de paternité du patient azoospermique (état des lieux et résultats de la prise en charge à l'hôpital Bichat)

En France 17% des couples rencontrent des difficultés à procréer et l azoospermie a une prévalence de 10% dans cette population. Depuis l invention de l ICSI, les biopsies testiculaires sont devenues thérapeutiques. Les objectifs de notre étude étaient tout d abord de déterminer pour quelle proportion de patients nous avons pu cryoconserver des spermatozoïdes, de déterminer s il existait des facteurs prédictifs de réussite de la biopsie testiculaire et enfin d analyser les succès et les facteurs déterminants d une prise en charge en AMP. Nous avons suivi une cohorte de 137 patients et avons montré que 70.8% des patients ont eu une biopsie testiculaire et/ou épididymaire positive. Nous n avons pas mis en évidence de facteurs prédictifs de biopsie positive en dehors de l étiologie masculine (sécrétoire, excrétoire ou mixte) et du site de prélèvement. Nous avons obtenu des taux de grossesse clinique à 43.5% par transfert et la naissance d un enfant bien portant dans 60% des grossesses.CHATENAY M.-PARIS 11-BU Pharma. (920192101) / SudocSudocFranceF