<i>In vitro</i> antiviral activity of the anti-HCV drugs daclatasvir and sofosbuvir against SARS-CoV-2, the aetiological agent of COVID-19

BackgroundCurrent approaches of drug repurposing against COVID-19 have not proven overwhelmingly successful and the SARS-CoV-2 pandemic continues to cause major global mortality. SARS-CoV-2 nsp12, its RNA polymerase, shares homology in the nucleotide uptake channel with the HCV orthologue enzyme NS5B. Besides, HCV enzyme NS5A has pleiotropic activities, such as RNA binding, that are shared with various SARS-CoV-2 proteins. Thus, anti-HCV NS5B and NS5A inhibitors, like sofosbuvir and daclatasvir, respectively, could be endowed with anti-SARS-CoV-2 activity.MethodsSARS-CoV-2-infected Vero cells, HuH-7 cells, Calu-3 cells, neural stem cells and monocytes were used to investigate the effects of daclatasvir and sofosbuvir. In silico and cell-free based assays were performed with SARS-CoV-2 RNA and nsp12 to better comprehend the mechanism of inhibition of the investigated compounds. A physiologically based pharmacokinetic model was generated to estimate daclatasvir's dose and schedule to maximize the probability of success for COVID-19.ResultsDaclatasvir inhibited SARS-CoV-2 replication in Vero, HuH-7 and Calu-3 cells, with potencies of 0.8, 0.6 and 1.1 μM, respectively. Although less potent than daclatasvir, sofosbuvir alone and combined with daclatasvir inhibited replication in Calu-3 cells. Sofosbuvir and daclatasvir prevented virus-induced neuronal apoptosis and release of cytokine storm-related inflammatory mediators, respectively. Sofosbuvir inhibited RNA synthesis by chain termination and daclatasvir targeted the folding of secondary RNA structures in the SARS-CoV-2 genome. Concentrations required for partial daclatasvir in vitro activity are achieved in plasma at Cmax after administration of the approved dose to humans.ConclusionsDaclatasvir, alone or in combination with sofosbuvir, at higher doses than used against HCV, may be further fostered as an anti-COVID-19 therapy

Avaliação histológica da viabilidade de folículos ovarianos suínos submetidos a diferentes condições de transporte

A maioria dos oócitos utilizados em biotecnologias reprodutivas são provenientes de ovários obtidos em locais geograficamente distantes de laboratórios especializados. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade de folículos ovarianos em diferentes condições de transporte para identificar qual melhor se adequa ao sucesso do tratamento. Ovários suínos (32) foram obtidos em abatedouro, sendo um par utilizado como grupo controle  prontamente fixado em formol 10%. Os demais pares foram imersos em solução salina 0,9% e mantidos nas temperaturas de 4 e 35,5 °C pelos períodos de 2, 16 e 24 horas. Após os referidos tempos de armazenamento, os ovários foram fixados em formol 10% por 24 horas e submetidos à realização de rotina histológica com impregnação em parafina. As secções foram analisadas com microscopia de luz avaliando a morfologia dos folículos antrais sendo analisados no máximo 30 folículos por secção. Após a análise pôde-se verificar que folículos antrais dos ovários conservados a 4 e 35,5 °C pelo período de 2 horas não apresentaram diferença significativa do grupo controle (p>0,05), bem como os tratamentos de 4 °C durante 16 e 24 horas. Porém, os tratamentos a 35,5 °C por 16 e 24 horas apresentaram significativa redução da frequência de folículos normais em comparação com os tratamentos de mesmo período de conservação a 4 °C e com o grupo controle (p<0,05). Em conclusão, o armazenamento ideal ovário suíno para torná-lo viável para experimentos de reprodução pode ser realizado a 35,5 °C por 2 horas ou a 4 °C por 24 horas

Avaliação histológica da viabilidade de folículos ovarianos suínos submetidos a diferentes condições de transporte

Resumo: A maioria dos oócitos utilizados em biotecnologias reprodutivas são provenientes de ovários obtidos em locais geograficamente distantes de laboratórios especializados. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade de folículos ovarianos em diferentes condições de transporte para identificar qual melhor se adequa ao sucesso do tratamento. Ovários suínos (32) foram obtidos em abatedouro, sendo um par utilizado como grupo controle  prontamente fixado em formol 10%. Os demais pares foram imersos em solução salina 0,9% e mantidos nas temperaturas de 4 e 35,5 °C pelos períodos de 2, 16 e 24 horas. Após os referidos tempos de armazenamento, os ovários foram fixados em formol 10% por 24 horas e submetidos à realização de rotina histológica com impregnação em parafina. As secções foram analisadas com microscopia de luz avaliando a morfologia dos folículos antrais sendo analisados no máximo 30 folículos por secção. Após a análise pôde-se verificar que folículos antrais dos ovários conservados a 4 e 35,5 °C pelo período de 2 horas não apresentaram diferença significativa do grupo controle (p>0,05), bem como os tratamentos de 4 °C durante 16 e 24 horas. Porém, os tratamentos a 35,5 °C por 16 e 24 horas apresentaram significativa redução da frequência de folículos normais em comparação com os tratamentos de mesmo período de conservação a 4 °C e com o grupo controle (p<0,05). Em conclusão, o armazenamento ideal ovário suíno para torná-lo viável para experimentos de reprodução pode ser realizado a 35,5 °C por 2 horas ou a 4 °C por 24 horas.

Avaliação histológica da viabilidade de folículos ovarianos suínos submetidos a diferentes condições de transporte

A maioria dos oócitos utilizados em biotecnologias reprodutivas são provenientes de ovários obtidos em locais geograficamente distantes de laboratórios especializados. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade de folículos ovarianos em diferentes condições de transporte para identificar qual melhor se adequa ao sucesso do tratamento. Ovários suínos (32) foram obtidos em abatedouro, sendo um par utilizado como grupo controle  prontamente fixado em formol 10%. Os demais pares foram imersos em solução salina 0,9% e mantidos nas temperaturas de 4 e 35,5 °C pelos períodos de 2, 16 e 24 horas. Após os referidos tempos de armazenamento, os ovários foram fixados em formol 10% por 24 horas e submetidos à realização de rotina histológica com impregnação em parafina. As secções foram analisadas com microscopia de luz avaliando a morfologia dos folículos antrais sendo analisados no máximo 30 folículos por secção. Após a análise pôde-se verificar que folículos antrais dos ovários conservados a 4 e 35,5 °C pelo período de 2 horas não apresentaram diferença significativa do grupo controle (p>0,05), bem como os tratamentos de 4 °C durante 16 e 24 horas. Porém, os tratamentos a 35,5 °C por 16 e 24 horas apresentaram significativa redução da frequência de folículos normais em comparação com os tratamentos de mesmo período de conservação a 4 °C e com o grupo controle (p<0,05). Em conclusão, o armazenamento ideal ovário suíno para torná-lo viável para experimentos de reprodução pode ser realizado a 35,5 °C por 2 horas ou a 4 °C por 24 horas.

RESSONÂNCIA MAGNÉTICA NUCLEAR DE SUBSTÂNCIAS ORGANOFLUORADAS: UM DESAFIO NO ENSINO DE ESPECTROSCOPIA

Nuclear magnetic resonance is a technique that is widely used for elucidating and characterizing organic substances. Organofluorine substances have applications in many areas from drugs to liquid crystals, but their NMR spectra are often challenging due to fluoride coupling with other nuclei. For this reason, NMR spectra of this class of substances are not commonly covered in undergraduate and graduate chemistry courses and related fields. Thus, the aim of this work was the presentation and discussion of 1H, 13C, and 19F NMR spectra of eleven organofluorine substances which, in the case of 1H and 13C nuclei, showed classic patterns of first-order coupling and the effects of the fluorine nucleus in different chemical and magnetic environments. In addition, the observation of long distance coupling constants was possible through the use of apodization functions in the processing of the spectra. It is expected that the examples presented herein can be utilized and discussed in undergraduate and graduate NMR spectroscopy disciplines and thus improve the teaching and future research of organofluorine compounds

Projeto de extensão núcleo de cidadania ativa da Unesp Franca

The project on screen aims to introduce the activities of the Extension Project “Active Citizienship Center of Unesp/Franca”. Focusing on the first axis of participation, there is noticed the correspondence of the group activities and objectives with the theme of this axis. On this context, the public policies take place as affirmative acts that assure social rights, incontestable and fundamental rights that lead to the effective social participation on the government decisions and consequent consolidation of the democracy and human rights. Keeping this context, the Social Control of the Public Policies emerges as an emancipatory tool that assure the popular participation on government decisions against the corruption of agents that could destitute the public policies from its vocation, turning it in empty government acts. The Center has, therefore, an incontestable compromise with the democracy and with the population, a compromise that will be evident on this project through the highlight of the group objectives, methods and results on the academic and social field.O projeto em tela visa apresentar o Projeto de Extensão “Núcleo de Cidadania Ativa – Unesp/Franca”. Focando-se no eixo de participação número 1, percebe-se estreita pertinência das atividades e objetivos do grupo com todas as temáticas dispostas no eixo. Nesse contexto, as políticas públicas se inserem como medidas afirmativas e asseguradoras de direitos sociais, direitos estes fundamentais e incontestáveis para a efetiva participação social nas decisões governamentais e consequente consolidação da democracia e dos direitos humanos. Sob este aspecto, o Controle Social das Políticas Públicas surge como ferramenta emancipatória e garantidora de participação popular nas gestões e contra o emparelhamento e cooptação de agentes que possam vir a destituir as políticas públicas de sua vocação, transformando-as em meras ações governamentais vazias. O Núcleo tem, portanto, um compromisso inalienável com a democracia e com o povo, compromisso este que será evidente no projeto através do destaque de seus objetivos, métodos e resultados nos campos acadêmicos e sociais

A Review of the Development of Multitarget Molecules against HIV-TB Coinfection Pathogens

The human immunodeficiency virus (HIV) produces the pathologic basis of acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). An increase in the viral load in the body leads to a decline in the number of T lymphocytes, compromising the patient’s immune system. Some opportunistic diseases may result, such as tuberculosis (TB), which is the most common in seropositive patients. Long-term treatment is required for HIV-TB coinfection, and cocktails of drugs for both diseases are used concomitantly. The most challenging aspects of treatment are the occurrence of drug interactions, overlapping toxicity, no adherence to treatment and cases of resistance. Recent approaches have involved using molecules that can act synergistically on two or more distinct targets. The development of multitarget molecules could overcome the disadvantages of the therapies used to treat HIV-TB coinfection. This report is the first review on using molecules with activities against HIV and Mycobacterium tuberculosis (MTB) for molecular hybridization and multitarget strategies. Here, we discuss the importance and development of multiple targets as a means of improving adherence to therapy in cases of the coexistence of these pathologies. In this context, several studies on the development of structural entities to treat HIV-TB simultaneously are discussed

Anti-<i>Trypanosoma cruzi</i> Activity, Mutagenicity, Hepatocytotoxicity and Nitroreductase Enzyme Evaluation of 3-Nitrotriazole, 2-Nitroimidazole and Triazole Derivatives

Chagas disease (CD), which is caused by Trypanosoma cruzi and was discovered more than 100 years ago, remains the leading cause of death from parasitic diseases in the Americas. As a curative treatment is only available for the acute phase of CD, the search for new therapeutic options is urgent. In this study, nitroazole and azole compounds were synthesized and underwent molecular modeling, anti-T. cruzi evaluations and nitroreductase enzymatic assays. The compounds were designed as possible inhibitors of ergosterol biosynthesis and/or as substrates of nitroreductase enzymes. The in vitro evaluation against T. cruzi clearly showed that nitrotriazole compounds are significantly more potent than nitroimidazoles and triazoles. When their carbonyls were reduced to hydroxyl groups, the compounds showed a significant increase in activity. In addition, these substances showed potential for action via nitroreductase activation, as the substances were metabolized at higher rates than benznidazole (BZN), a reference drug against CD. Among the compounds, 1-(2,4-difluorophenyl)-2-(3-nitro-1H-1,2,4-triazol-1-yl)ethanol (8) is the most potent and selective of the series, with an IC50 of 0.39 µM and selectivity index of 3077; compared to BZN, 8 is 4-fold more potent and 2-fold more selective. Moreover, this compound was not mutagenic at any of the concentrations evaluated, exhibited a favorable in silico ADMET profile and showed a low potential for hepatotoxicity, as evidenced by the high values of CC50 in HepG2 cells. Furthermore, compared to BZN, derivative 8 showed a higher rate of conversion by nitroreductase and was metabolized three times more quickly when both compounds were tested at a concentration of 50 µM. The results obtained by the enzymatic evaluation and molecular docking studies suggest that, as planned, nitroazole derivatives may utilize the nitroreductase metabolism pathway as their main mechanism of action against Trypanosoma cruzi. In summary, we have successfully identified and characterized new nitrotriazole analogs, demonstrating their potential as promising candidates for the development of Chagas disease drug candidates that function via nitroreductase activation, are considerably selective and show no mutagenic potential