PERFIL SOROEPIDEMIOLÓGICO DE ANTICORPOS CONTRA Toxoplasma gondii EM ESTUDANTES DE MEDICINA VETERINÁRIA

The state of Pará due to its location in equatorial region, presents climatic and epidemiologic characteristics propitious to the maintenance of the Toxoplasma gondii in the environment. The objective of the present study is verifying the occurrence of anti-T. gondii antibodies in Veterinary Medicine students from the Federal University of Pará and serologically following them up for three consecutive semesters assessing their hygiene-food habits and behaviors. 51 veterinary students (22 women and 29 men) participated on the study. All the volunteers signed an informed consent and answered an epidemiologic questionnaire. The anti-T. gondii antibodies research was performed by indirect immunofluorescence reaction. From the 51 students 22 (43.14%) were reactant to anti-T. gondii antibodies. The variables with strong statistical association were: the presence of cats at home (p=0.002), cats from the neighborhood with access to the backyard (p=0.046), the consumption of water or juice of unknown provenance in the streets (p=0.026), the consumption of raw salad in restaurants (p=0.031), and the consumption of sandwiches containing raw vegetables in the streets (p=0.009). It can be concluded that eating food in places without hygienic standards of sanitation favors the contamination by T. gondii.Keywords: toxoplasmosis; serology; college students; Pará.O Estado do Pará por se localizar em região equatorial apresenta características climáticas e epidemiológicas propicias para a manutenção do Toxoplasma gondii no meio ambiente. O objetivo do presente estudo é verificar a ocorrência de anticorpos anti-T. gondii em alunos de Medicina Veterinária da Universidade Federal do Pará e acompanhá-los sorologicamente durante três semestres consecutivos avaliando os seus hábitos e comportamentos higiênico-alimentares. Participaram do estudo 51 alunos de Medicina Veterinária (22 mulheres e 29 homens). Todos os voluntários assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido e responderam a um questionário epidemiológico. A pesquisa de anticorpos anti-T. gondii foi realizada pela reação de imunofluorescência indireta. Dos 51 alunos 22 (43.14%) foram reagentes a anticorpos anti-T. gondi. As variáveis que tiveram forte associação estatística foram: a presença de gatos em casa (p=0.002), se gatos dos vizinhos tinham acesso ao quintal (p=0.046), o consumo de água ou suco na rua com procedência desconhecida (p=0.026), o consumo de salada crua em restaurantes (p=0.031) e o consumo de sanduíches contendo legumes crus na rua (p=0.009). Conclui-se que a alimentação realizada em locais sem padrão higiênico sanitário favorece a infecção pelo T. gondii.Palavras-chave: toxoplasmose, sorologia, universitários, Pará

T. gondii Infection in urban and rural areas in the Amazon: where Is the risk for toxoplasmosis?

This work was supported by the Instituto Evandro Chagas/Ministério da Saúde; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Brasil (CAPES), Finance Code 001, PROPESP/UFPA and Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq; Grant 302292/2017–9)Universidade Federal do Pará. Instituto de Ciências Biológicas. Curso de Pós-graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários. Belém, PA, Brazil / Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Universidade Federal do Pará. Instituto de Ciências Biológicas. Curso de Pós-graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários. Belém, PA, Brazil / Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Toxoplasmosis, an infection caused by Toxoplasma gondii, which is found worldwide, can affect human and animal health in different ways. This study aimed to estimate the infection prevalence in humans and to determine risk factors related to urban and rural areas in a municipality in the Brazilian Amazon where an outbreak had been registered. Blood samples for serological analysis were obtained, and interviews were performed to fill out an epidemiological questionnaire. A total of 1140 individuals were included, of which 70.6% (804/1140; 95% CI: 67.9-73.2%) were positive for IgG anti-T. gondii antibodies. In rural areas, the prevalence was 62.6% (95% CI: 58.9-66.3%), while in urban areas, it was 81.9% (95% CI: 78.4-85.4%). The risk of becoming infected in urban areas was 2.7 times higher (95% CI = 2.0-3.6%) than that in rural areas. When comparing the prevalence in the age group from 1 to 10 years in both areas, the rate was 28.6% (42/147; 95% CI: 21.3-35.9%) for rural areas and 69.4% (61/88; CI 95%: 59.7-79.0%) for urban areas. Therefore, it is concluded that parasite exposure starts in the first years of life in urban areas and that disordered urban area expansion may cause an increase in exposure to the different strains of T. gondii present in the Amazon

Comparación entre dos métodos de obtención de DNA a ser usados como protocolos alternativos para la detección de parásitos humanos causadores de malaria por nested PCR

Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Laboratório de Pesquisas Básicas em Malária. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Laboratório de Pesquisas Básicas em Malária. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Laboratório de Pesquisas Básicas em Malária. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Laboratório de Pesquisas Básicas em Malária. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Laboratório de Pesquisas Básicas em Malária. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Laboratório de Pesquisas Básicas em Malária. Ananindeua, PA, Brasil.Um diagnóstico laboratorial correto e preciso de malária humana ainda é considerado um desafio, pois o método de referência, o da gota espessa com colocação pelo Giemsa, apresenta limitações que dificultam o controle da malária. Devido a esses problemas, várias pesquisas têm objetivado desenvolver métodos alternativos para o diagnóstico da malária. Grande parte desses estudos aborda métodos de diagnóstico molecular, que têm acarretado o desenvolvimento de algumas alternativas ao método de coloração pelo Giemsa. No entanto, esses métodos, por sua vez, apresentam suas limitações, que incluem seu alto custo, a complexidade do protocolo e a variação da qualidade das fontes de DNA e de reagentes. Neste aspecto, a técnica de nested PCR tem demonstrado ser um bom método e pode ser melhorado usando uma fonte de DNA de alta qualidade. Neste estudo foram avaliados dois métodos para a obtenção de DNA de amostras de sangue seco colhidas em papel de filtro: 1) lavagem e 2) saponina/Chelex-100. O segundo método apresentou sensibilidade e especificidade mais altas em relação ao primeiro, pois detectou mais infecções, tanto simples como mistas, bem como infecções por Plasmodium malariae. Com base nesses resultados, apresentamos o segundo como o protocolo de escolha para a obtenção de DNA. A técnica de nested PCR usando saponina/Chelex-100 para extração de DNA pode ser um método alternativo ou complementar de diagnóstico de parasitas da malária humana, mas não é considerado adequado para o uso de rotina.The correct and precise laboratory diagnosis of human malaria is still a challenge because the reference method, the Giemsa-stained thick blood smear (TS), has limitations that present problems for malaria control. Because of these problems, several studies have attempted to develop alternative methods for malaria diagnosis. Many of these studies focus on molecular diagnosis methods and have led to the development of some alternatives to TS. However, their limitations include high cost, protocol complexity and variable quality of DNA sources and reagents. Nested PCR has been shown to be a good method in this respect and it can be improved by using a high-quality source of DNA. In this study we evaluated two methods for the obtainment of DNA from dried blood samples on filter paper: 1) washing and 2) saponin/chelex-100. The second method showed higher sensitivity and specificity compared to the first, as it detected more infections, whether single or mixed, as well as Plasmodium malariae infections. Based on these results, we present this method as the protocol of choice for DNA obtainment. Nested PCR using saponin/chelex-100 for DNA extraction could be an alternative or complementary diagnosis method for human malaria parasites, but it is not appropriate for routine use

Brote de toxoplasmosis humana en la Comarca de Monte Dourado, en el municipio de Almeirim (Estado de Pará, Brasil)

Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Universidade do Estado do Pará, Belém, PA, Brasil.OBJETIVO: Relatar um surto de toxoplasmose humana ocorrido no Distrito de Monte Dourado, Município de Almeirim, Pará, Brasil. MATERIAIS E MÉTODOS: Após diagnóstico confirmatório de cinco pacientes-índices com sintomas sugestivos de toxoplasmose aguda, teve início uma investigação clínica e soroepidemiológica de toxoplasmose na localidade de procedência dos pacientes. Foram avaliados 186 indivíduos, incluindo pacientes sintomáticos, seus familiares e/ou contatos próximos. Todos, espontaneamente, submeteram-se a inquérito epidemiológico, avaliação clínica e sorologia pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) para detecção de anticorpos IgG e IgM anti-Toxoplasma gondii. RESULTADOS: Quarenta indivíduos (21,5%) apresentaram perfil sorológico de toxoplasmose aguda, considerando-se IgM e IgG reagentes em elevados títulos. A análise epidemiológica indicou que os casos poderiam estar vinculados à infecção com oocistos eliminados pelos gatos, cuja população era elevada. A hipótese provável de transmissão seria pelo contato direto com oocistos do parasito, na ingestão de alimentos contaminados, ou, possivelmente, até por inalação dessas formas presentes no solo. A possibilidade de transmissão hídrica por meio do sistema de distribuição de água local foi descartada, já que o sistema é inacessível aos gatos. Os indivíduos doentes foram tratados nos serviços de saúde do Município. As autoridades sanitárias locais foram orientadas para implementar medidas de controle de gatos errantes, visando prevenir novos casos ou surtos. CONCLUSÃO: O surto ocorrido entre fevereiro e março de 2004, em Monte Dourado-PA, foi causado pelo T. gondii. Admite-se que houve uma somatória de fatores que mantêm a hipótese sustentada da contaminação via oocistos, tais como: elevada população de gatos no Distrito; procedimentos frequentes de jardinagem; e ausência de relatos de ingestão de carne crua ou mal cozida.OBJECTIVE: To report an outbreak of human toxoplasmosis that occurred in the District of Monte Dourado, Municipality of Almeirim, Pará State, Brazil. MATERIALS AND METHODS: After the positive diagnosis of five patients with symptoms suggestive of toxoplasmosis, clinical research and epidemiology were executed in the locality. A total of 186 individuals were evaluated, including symptomatic patients, their relatives and/or close contacts. All subjects underwent epidemiological inquiry, clinical assessment and serology by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of anti-Toxoplasma gondii IgG and IgM. RESULTS: A total of 40 individuals presented a serological profile of acute toxoplasmosis. Epidemiological analysis indicated that the cases could be related to infection with oocysts eliminated by cats, whose population density was very high in the surveyed locality. The most likely hypothesis of transmission would be through direct contact with oocysts of the parasite, either by the ingestion of contaminated food or by the inhalation of these forms in the soil. The possibility of water transmission through the local supply system was discarded because the system is inaccessible to cats. Infected individuals were treated at the local health care units. Moreover, local health authorities were instructed to implement measures to control stray cats in order to prevent new cases or outbreaks. CONCLUSION: The outbreak that occurred between February and March 2004 in Monte Dourado was caused by T. gondii. The hypothesis of contamination via oocysts of the parasite is supported by several factors, such as a high population density of cats in the surveyed District, frequent gardening habits and a lack of reports of ingestion of raw or undercooked meat

Nested PCR utilizando a gota espessa como fonte do DNA de Plasmodium: uma alternativa para esfregaços de sangue arquivados

Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.The study aimed to evaluate a protocol of nested PCR using archival Giemsa-stained thick blood smears (GTS)as source of Plasmodium DNA. A total of 138 GTS from patients of five municipalities from Pará State (Amazon Region, Brazil) was included in this survey. These samples were classified in three groups (group 1: 85 Plasmodium positive and negative GTS stored in plastic box during five years; group 2: 28 Plasmodium positive and negative GTS stored in wooden box during 10 years; and group 3: 25 Trypanosoma cruzi GTS negative for Plasmodium stored in plastic box during a month) and were submitted to DNA extraction with Chelex-100. Subsequently, extracted DNA samples were quantified and the integrity was verified by electrophoresis. Nested PCR protocol was performed to detect Plasmodium species. The results of nested PCR were compared to microscopy and statistic parameters were calculated by screening test. DNA samples from all groups had acceptable quantity and purity level, but the evaluation of integrity showed 19 degraded samples from group 2. By nested PCR, this group showed very low sensitivity (29.63%) and accuracy (32.14%), while nested PCR for samples from group 1 showed 100% of sensitivity and 97.65% of accuracy. The results of this research showed that samples stored until five years can be useful as Plasmodium DNA source for nested PCR to identify Plasmodium species, being an important alternative to support retrospective studies.O estudo teve como objetivo avaliar um protocolo de nested PCR, utilizando o teste de gota espessa corada por Giemsa (GTS) como fonte de DNA de Plasmodium. Um total de 138 amostras de GTS de pacientes de cinco municípios do Estado do Pará (Região Amazônica, Brasil) foi incluído neste estudo. Essas amostras foram classificadas em três grupos (grupo 1: 85 Plasmodium GTS positivos e negativos armazenados em uma caixa de plástico durante cinco anos; grupo 2: 28 Plasmodium GTS positivos e negativos armazenados na caixa de madeira durante 10 anos; e grupo 3: 25 Trypanosoma cruzi GTS negativos para Plasmodium armazenados em caixa de plástico durante um mês) e foram submetidas à extração de DNA com Chelex-100. Subsequentemente, as amostras de DNA extraídas foram quantificadas e sua integridade foi verificada pela eletroforese. O protocolo de nested PCR foi realizado para detectar resultados das espécies de Plasmodium. Os resultados do nested PCR foram comparados com os de microscopia e os parâmetros estatísticos foram calculados pelo teste de triagem. As amostras de DNA de todos os grupos obtiveram nível, quantidade e pureza aceitáveis, mas a avaliação da integridade mostrou 19 amostras degradadas do grupo 2. Pelo nested PCR, esse grupo mostrou baixa sensibilidade (29,63%) e precisão (32,14%), enquanto que as amostras do grupo 1 apresentaram 100% de sensibilidade e 97,65% de precisão. Os resultados desta pesquisa apontam que as amostras armazenadas até cinco anos podem ser úteis como fonte de DNA de Plasmodium para que o nested PCR identifique as espécies de Plasmodium, sendo uma alternativa importante para apoiar estudos retrospectivos

Incidência de toxoplasmose congênita na Cidade de Belém, Estado do Pará, norte do Brasil, através de um programa de triagem neonatal: resultados preliminares

Introduction: The aim of this study was to determinate the incidence of congenital toxoplasmosis among a group of newborns (NBs) from Belém using neonatal screening. Methods: Among the 6,000 newborns referred for investigation of genetic and metabolic diseases, 1,000 were selected for screening for congenital toxoplasmosis by determining the amount of IgM in the eluates of blood collected on filter paper. Positive tests were confirmed using paired serology of the NB and his mother. Results: Out of the 1,000 NBs assessed, one had a positive screening result that was confirmed by paired serology. Conclusions: The incidence of congenital toxoplasmosis in Belém was 10/10,000 live NBs.Introdução: O objetivo do estudo foi determinar a incidência da toxoplasmose congênita em um grupo de recém-nascidos (RNs) de Belém, pela triagem neonatal. Métodos: Entre 6.000 RNs, encaminhados para investigação de doenças genéticas e metabólicas, foram selecionados 1.000 para triagem de toxoplasmose congênita, através da pesquisa de anticorpos IgM em eluatos de sangue colhido em papel de filtro. Os testes positivos foram confirmados, através da sorologia pareada do RN e respectiva genitora. Resultados: Dos 1.000 RNs investigados, um apresentou triagem positiva confirmada pela sorologia pareada. Conclusões: A incidência de toxoplasmose congênita em Belém foi de 10/10.000 RNs vivos

Anticorpos anti-Toxoplasma gondii em bovinos de corte abatidos na região metropolitana de Belém, Amazônia brasileira

CNPq (Universal call #484537/2006-2007), FAPESPA, PPG-BAIP/UFPA and PROPESP/UFPA (Call PAPQ 01/2016)Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Universidade Federal do Pará. Programa de Pós-graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários. Belém, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Universidade Federal do Pará. Programa de Pós-graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários. Belém, PA, Brasil.Universidade Federal do Pará. Faculdade de Medicina Veterinária. Castanhal, PA, Brasil.Universidade Federal do Pará. Faculdade de Medicina Veterinária. Castanhal, PA, Brasil.Universidade Estadual de Santa Cruz. Departamento de Ciências Agrárias e Ambientais. Ilhéus, BA, Brasil.Universidade Estadual de Feira de Santana. Departamento de Ciências Biológicas. Feira de Santana, BA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Universidade Federal do Pará. Programa de Pós-graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários. Belém, PA, Brasil.The relevance of consuming raw or undercooked beef in the transmission of toxoplasmosis is unclear due to the high resistance of cattle to infection. However, this possibility needs to be considered in endemic areas, such as the Amazon, where the consumption of beef is frequent. The objective of this study was to determine the frequency of anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies in beef cattle slaughtered in the metropolitan region of Belem, Pará state, Brazil. Blood samples were collected from 500 animals of both genders in a licensed slaughterhouse in Belém. Anti-T. gondii IgG antibodies were detected by an indirect immunofluorescence assay (IFA) with a cut-off titer of 1:64. Anti-T. gondii antibodies were found in 203 animals (40.6%), with a titer of 64 in 112 animals (55.2%), 128 in 68 animals (33.5%), 256 in 15 animals (7.4%), 512 in 5 animals (2.5%), and 1,024 in 3 animals (1.4%). No significant difference was observed between males and females (p > 0.05). The high frequency of anti-T. gondii antibodies observed in beef cattle slaughtered in Belém indicates that the meat of these animals may be an important source of infection for humans and carnivorous domestic animals when inadequately cooked beef is consumed.A importância do consumo de carne bovina crua ou mal passada na transmissão da toxoplasmose ainda é pouco definida, devido à alta resistência desses animais à infecção. Contudo, em áreas endêmicas, como da Amazônia, onde o consumo de carne bovina é frequente, essa possibilidade precisa ser considerada. O objetivo do presente estudo foi determinar a frequência de anticorpos IgG anti-T. gondii em bovinos de corte abatidos na região metropolitana de Belém, Estado do Pará. Foram coletadas amostras de sangue de 500 animais, de ambos os sexos, em um abatedouro oficial do município de Belém. A detecção de anticorpos IgG anti-T. gondii foi realizada pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte de 1:64. Anticorpos anti-T. gondii foram encontrados em 203 animais (40,6%), com títulos de 64 em 112 animais (55,2%); 128 em 68 (33,5%); 256 em 15 (7,4%); 512 em 05 (2,5%); e 1.024 em 03 (1.4%). Não foi observada diferença estatisticamente significativa entre machos e fêmeas (p > 0,05). A alta frequência de anticorpos anti-T. gondii, observada nos bovinos de corte abatidos em Belém, indica que a carne desses animais pode ser importante fonte de infecção para humanos e animais domésticos carnívoros, caso venha a ser consumida de forma inadequada

Anti-Toxoplasma gondii antibodies in beef cattle slaughtered in the metropolitan region of Belém, Brazilian Amazon

Abstract The relevance of consuming raw or undercooked beef in the transmission of toxoplasmosis is unclear due to the high resistance of cattle to infection. However, this possibility needs to be considered in endemic areas, such as the Amazon, where the consumption of beef is frequent. The objective of this study was to determine the frequency of anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies in beef cattle slaughtered in the metropolitan region of Belem, Pará state, Brazil. Blood samples were collected from 500 animals of both genders in a licensed slaughterhouse in Belém. Anti-T. gondii IgG antibodies were detected by an indirect immunofluorescence assay (IFA) with a cut-off titer of 1:64. Anti-T. gondii antibodies were found in 203 animals (40.6%), with a titer of 64 in 112 animals (55.2%), 128 in 68 animals (33.5%), 256 in 15 animals (7.4%), 512 in 5 animals (2.5%), and 1,024 in 3 animals (1.4%). No significant difference was observed between males and females (p > 0.05). The high frequency of anti-T. gondii antibodies observed in beef cattle slaughtered in Belém indicates that the meat of these animals may be an important source of infection for humans and carnivorous domestic animals when inadequately cooked beef is consumed