Morfoanatomia, composição química e avaliação biológica do óleo essencial de Baccharis milleflora DC., Asteraceae

Orientador : Prof. Dr. Obdulio Gomes MiguelCoorientador : Prof. Dr.Paulo Vitor FaragoTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 14/06/2017Inclui referênciasResumo: Baccharis milleflora (Less.) DC. popularmente conhecida como carqueja, carqueja do lajeado, possui poucos estudos registrados na literatura. É utilizada na medicina popular como diurética e estomáquica. O objetivo desse trabalho foi realizar a análise morfoanatômica, caracterizar o óleo essencial (OE) e avaliar as atividades antioxidante, antimicrobiana, pediculicida, citotóxica e imunomoduladora. Por meio de microscopia óptica e de microscopia eletrônica de varredura foram evidenciados estômatos anomocíticos e actinocíticos, tricomas glandulares capitados bisseriados, tectores flageliformes simples e dutos secretores de produtos lipofílicos. Os compostos majoritários identificados por CG/EM nas quatro estações do ano foram: trans-cariofileno, ?-humuleno, germacreno D e o biciclogermacreno. A atividade antioxidante pelo método DPPH apresentou IC50 entre 15,45 ?g/mL - 21,06 ?g/mL e pelo método ABTS IC50 entre 3,85 ?g/mL - 4,60 ?g/mL. A atividade antioxidante pelo fosfomolibdênio foi de 77,9% a 79,81%. O índice antioxidante pelo TBARS variou de 12,60% a 29,06%. Foi verificada atividade frente a S. aureus nas quatro estações por microdiluição em caldo. A atividade pediculida apresentou um IR de 80,65% e um KT50 de 10,63 min. O OE apresentou citotoxicidade frente às linhagens Jurkat, Raji e HL-60 pelo ensaio de redução do brometo de 3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5- difenil-tetrazólio (MTT) e inibiu a proliferação celular (30 e 100 ?g/mL) por afetar o conteúdo de DNA. A 10 ?g/mL diminuiu significativamente o conteúdo de DNA nas três linhagens tumorais mediante o ensaio com o iodeto de propídeo. O óleo essencial a 60 ?g/mL gerou parada em G0/G1 com uma diminuição no número de células nas fases S e G2/M. A coloração com EB/AO e Hoechst 33342 demonstrou que o OE provoca a morte celular por mecanismos de necrose e apoptose. O índice de seletividade de 3,97 obtido reforça a seletividade deste óleo frente às células malignas Raji. Frente às células J774 o óleo essencial (30 e 100 ?g/mL) apresentou moderado efeito citotóxico pelo ensaio do MTT e da sulforodamina com valores de IC50 independentes do tempo de exposição. As células J774 incubadas com OE (8 ?g/mL) apresentaram uma redução estatisticamente significativa na produção de óxido nítrico. A 10 e 20 ?g/mL o OE não inibiu a produção de espécies reativas de oxigênio nos tempos avaliados. A capacidade fagocítica do OE utilizando partículas não opsonizadas de zimozan foi de aproximadamente 40%, sugerindo atividade imunomoduladora. Palavras-chave: Antioxidante. Baccharis milleflora. Cultura celular. Óleo essencial. Pediculicida.Abstract: Baccharis milleflora (Less.) DC. popularly known as carqueja, carqueja do lajeado, has few studies registered in the literature. It is used in folk medicine as diuretic and stomatal. The objective of this work was to perform the morphoanatomic analysis, to characterize the essential oil (EO) and to evaluate the antioxidant, antimicrobial, pediculida, cytotoxic and immunomodulatory activities. Scanning electron microscopy and optical microscopy revealed anomocytic and actinocytic stomata, bisserial capillary glandular trichomes, simple flagelliform tectonics and secretory ducts of lipophilic products. The major compounds identified by GC/MS in the four seasons were: trans-caryophyllene, ?-humulene, germacrene D and bicyclogermacrene. The antioxidant activity by the DPPH method presented IC50 between 15.45 ?g/mL - 21.06 ?g/mL and by ABTS method IC50 between 3.85 ?g/mL - 4.60 ?g/mL. The antioxidant activity by fosfomolibdenium was 77.9% to 79.81%. The antioxidant index by TBARS ranged from 12.60% to 29.06%. Activity against S. aureus was verified in the four seasons by broth microdilution. The repellent activity had an repellency index of 80.65% and a KT50 of 10.63 min. Essential oil showed cytotoxicity against the Jurkat, Raji and HL-60 cells by the MTT assay and inhibited cell proliferation (30 and 100 ?g/mL) for affecting the DNA content. At 10 ?g/mL significantly decreased the DNA content in the three tumor lines by the propidium iodide assay. The essential oil at 60 ?g/mL generated a G0/G1 arrest with a decrease in the number of cells in the S and G2/M phases. The staining with EB/AO and Hoechst 33342 demonstrated that EO causes cell death by mechanisms of necrosis and apoptosis. The selectivity index of 3.97 obtained reinforces the selectivity of this oil against the Raji malignant cells. The EO (30 and 100 ?g/mL) presented a moderate cytotoxic effect in J744 cells by the MTT and SRD assay with IC50 values independent of the exposure time. J774 cells incubated with EO (8 ?g/mL) showed a statistically significant reduction in nitric oxide production. At 10 and 20 ?g/mL EO did not inhibit oxigen-reactive species production at the times evaluated. The phagocytic capacity of EO using nonopsonized zimozan particles was approximately 40%, suggesting immunomodulatory activity. Key-words: Antioxidant. Baccharis milleflora. Cell culture. Essential oil. Pediculicide

PHYSICO-CHEMICAL QUALITY CONTROL AND DOSAGE OF TOTAL POLYPHENOLS, FLAVONOIDS OF Morus alba LEAVES (MORACEAE)

To establish parameters for quality control ofMorus alba leaves were done tests of purity by determining the loss on drying, foreign matter, total ash, acid insoluble ash, swelling index, bitterness index, yield of crude extract, pH and organoleptic properties. The tests were done with samples collected on March, June, September and December, which were according to Brazilian Pharmacopeia and World Health Organization.Through 70 % ethanol extracts of M. alba leaves it was done the dosage of total polyphenols and flavonoids, which were used, respectively, the acidgallic and rutin standards

Stability evaluation of propolis topical bases for veterinary use

This study aimed to evaluate and select different dermatological bases incorporated with propolis for veterinary use as well as to analyze the chemical compounds of the propolis hydroalcoholic extract by LC-MS/MS. Thus, formulations were submitted to accelerated stability tests under different temperatures and to mechanical stress, and evaluated for the appearance, color, odor, pH, viscosity, spreadability, and the mean size of the dispersed globules from the internal phase during a period of three months. The creamy gel formulation showed satisfactory results for all the evaluated items with an excellent capability to incorporate the hydroalcoholic extract of propolis associated to the maintenance of its physicochemical properties. The propolis used in this study had been shown to possess antibacterial and antifungal in vitro activity against the main microorganisms responsible for such diseases. Therefore, the propolis creamy gel described here could be a promising formulation for use in the veterinary medicine

Atividade Anti-inflamatória e Avaliação da Toxicidade do Extrato Hidroetanólico de Morus alba (Moraceae)

No presente trabalho, avaliou-se a atividade antiinflamatória do extrato hidroetanólico das folhas de Morus alba, através do modelo de indução de tecido granulomatoso e analisaram-se os efeitos toxicológicos sobre o fígado pela dosagem de AST e ALT e sobre o rim, pela dosagem de creatinina. O extrato hidroetanólico das folhas de M. alba foi administrado oralmente, três vezes ao dia, durante 6 dias. A nimesulida (5 mg/kg/dia) foi utilizada como controle positivo e o propilenoglicol 20% como controle negativo. Após o tratamento, foi avaliada a formação do granuloma e realizada a dosagem de AST, ALT e creatinina em todos os grupos. Os animais tratados com o extrato de M. alba apresentaram inibição do processo inflamatório de 20,24 ± 6,94%, enquanto que os tratados com controle positivo apresentaram 21,42 ± 6,52%. O extrato hidroetanólico de M. alba demonstrou atividade antiinflamatória semelhante à nimesulida com ausência de indícios de hepatotoxicidade e nefrotoxicidade

Atividade Antimicrobiana e Citotoxicidade do extrato bruto obtido de Morus Alba L. (Moraceae)

O presente trabalho avaliou a atividade antimicrobiana in vitro do extrato hidroetanólico e frações hexânica, clorofórmica, acetato de etila e butanólica das folhas de Morus alba L. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada frente à Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Aspergillus fumigatus e Prothoteca zophii. As frações que apresentaram melhores respostas para a atividade antimicrobiana foram acetato de etila e clorofórmica com CIM de 256 µg/mL. Não foi possível detectar atividade antimicrobiana para Aspergillus fumigatus em nenhuma das concentrações testadas. A citotoxidade do extrato hidroetanólico foi avaliada através de culturas de células de ovário de hamster chinês (CHO) e células do tecido conectivo de camundongo (NCTC) clone 929, determinando o índice de citotoxidade (IC50). O IC50 foi de 0,34 mg/mL para as células CHO e 3,24 mg/mL para as células NCTC 929. De modo geral, as frações acetato de etila e clorofórmica das folhas de M. alba L. apresentaram moderada atividade antimicrobiana e o extrato bruto demonstrou ação citotóxica in vitro frente as células CHO e NCTC 929