PRODUCTION DE CYTOKINES DE TYPE 2 (IL-4 ET IL-13) PAR LES POLYNUCLEAIRES BASOPHILES (EFFECTS DES CHIMIOKINES ET STIMULATION PAR LES PARTICULES DE DIESEL)

L'INFLAMMATION ALLERGIQUE REPOND A DES MECANISMES IMMUNOLOGIQUES COMPLEXES, CONTROLES PAR LES CYTOKINES DE TYPE 2, D'OU UN ROLE PIVOT DE LA CELLULE T. APRES ACTIVATION ANTIGENIQUE (AG), LE BASOPHILE (BA) EXPRIME AUSSI LES IL-4 ET -13. LES CC CHIMIOKINES FAVORISENT SON CHIMIOTACTISME, ET LA LIBERATION DES MEDIATEURS INFLAMMATOIRES. CEPENDANT LA CONTRIBUTION DU BA A LA PRODUCTION TOTALE DES CYTOKINES, ET L'IMPACT DES CC CHIMIOKINES SUR CELLE-CI RESTENT IMPRECIS. IL EXISTE UNE CORRELATION ENTRE L'INCIDENCE DE L'ALLERGIE ET L'EXPOSITION AUX POLLUANTS. UN ROLE ADJUVANT DES PARTICULES DE DIESEL (PD) SUR LA REPONSE ALLERGIQUE EST ETABLI, MAIS LEUR ROLE SUR LE BA EST INCONNU. POUR CARACTERISER LA PRODUCTION DES CYTOKINES PAR LE BA, L'IMPACT DES CC CHIMIOKINES ET DES PD, LES LEUCOCYTES DU SANG PERIPHERIQUE SONT ACTIVES PAR UN AG, DES CC CHIMIOKINES, OU DES PD, ET ANALYSES EN CYTOMETRIE DE FLUX. LA SECRETION DE CYTOKINES EST EVALUEE EN ELISA. APRES STIMULATION AG, 5-20% DES BA DE PATIENTS ALLERGIQUES UNIQUEMENT EXPRIMENT L'IL-4 ET L'IL-13, (80% DES CELLULES PRODUCTRICES D'IL-4). LA STIMULATION PAR LA IONOMYCINE EST RESPONSABLE D'UNE PRODUCTION DES DEUX CYTOKINES PAR LA MAJORITE DES BA, ET INTERVIENT QUEL QUE SOIT LE STATUT CLINIQUE. L'EXPRESSION DE L'IL-4 PAR LE BA EST RAPIDEMENT MAXIMALE, CELLE DE L'IL-13 EST RETARDEE, PERMETTANT AU BA D'INITIER, ET D'AMPLIFIER LA REPONSE ALLERGIQUE. DE PLUS L'AUGMENTATION PRECOCE DE L'EXPRESSION DE CD40 LIGAND PAR LE BA, SUGGERE SON INTERVENTION DANS LA PRODUCTION INITIALE DES IGE. LES CC CHIMIOKINES SONT RESPONSABLES D'UNE AUGMENTATION DE LA PRODUCTION D'IL-4 PAR LE BA, ET DES CONCENTRATIONS D'AG 40 FOIS INFERIEURES SONT ALORS REQUISES POUR ASSURER UNE PRODUCTION EQUIVALENTE D'IL-4. LES PD INDUISENT UNE PRODUCTION PRECOCE D'IL-4, PAR LA MAJORITE DES BA, OBSERVEE CHEZ DES SUJETS ALLERGIQUES OU NON. LA PRODUCTION D'IL-4 EST ABOLIE PAR UNE INCUBATION DES CELLULES EN PRESENCE DE N ACETYL CYSTEINE. CES RESULTATS SUGGERENT UN ROLE DU BA DANS LE DEVELOPPEMENT DE L'ALLERGIE. ILS IDENTIFIENT UNE FONCTION POTENTIALISATRICE DES CC CHIMIOKINES SUR LA PRODUCTION DE L'IL-4 PAR LE BA. ENFIN, ILS MONTRENT QUE LE BA EST UNE CIBLE DES PD, RESPONSABLE D'UNE IMPORTANTE PRODUCTION D'IL-4, INDEPENDANTE DU STATUT CLINIQUE, MAIS DEPENDANTE DU STRESS OXYDANT.GRENOBLE1-BU Sciences (384212103) / SudocSudocFranceF

Etude d'une collectine, la MBL (Mannan Binding Lectin), au niveau intra-hépatocytaire

La Mannan Binding Lectin (MBL) est une lectine complexe présentant une dualité : une partie lectine spécialisée dans la fixation sur des polysaccharides et une partie de type collagène responsable d'autres interactions. Le but de ce travail a été d'analyser la MBL intracellulaire au cours de sa synthèse par des cellules hépatocytaires ; les résultats principaux concernent les formes de MBL de faible poids moléculaire. Le premier volet de l'étude a concerné l'obtention de matériel biologique et la mise au point de techniques indispensables pour l'expérimentation envisagée : une technique de purification de la protéine MBL à partir du sérum humain, un test fonctionnel basé sur le clivage de C4 par le complexe MBL/MASP-2. L'intérêt potentiel de ce test a été illustré dans le suivi de patients atteints d'hépatite C chronique. L'essentiel du travail a concerné l'étude de la MBL intracellulaire dans l'hypothèse d'un rôle en relation avec la structure de ses formes intracellulaires. Les résultats obtenus basés sur une compétition avec du D-mannose indiquent une fixation de certaines formes de MBL intracellulaire de faibles poids moléculaires (60 kDa) par leur partie lectine ; ceci évoque une fonction de type chaperon. Les résultats obtenus après ajout de collagénase ou d'un plasma déficitaire en MBL, utilisé comme source de MASPs, suggèrent l'association d'un ligand à la partie collagène de la MBL de faible poids moléculaire. Une relation entre le polymorphisme du gène de structure de la MBL et la réactivité de la partie collagène de cette protéine a été observée après action de la collagénase. Des mutations présentes au niveau des codons 54 ou 57 du gène de la MBL pourraient conduire à une modification de la structure du collagène et à une perturbation de sa réactivité. Un autre point de ce travail a été de tenter d'identifier une protéine associée à la MBL, mais ces essais avec des ligands potentiels de localisation hépatique, n'ont pas été concluants dans les conditions expérimentales choisies. En fonction de la complexité de cette lectine bifonctionnelle, les éléments acquis lors de ce travail posent de nombreuses questions et nécessiteront des études plus approfondies au niveau circulant et intracellulaire.GRENOBLE1-BU Sciences (384212103) / SudocSudocFranceF

Major involvement of cathepsin B in the intracellular proteolytic processing of exogenous IgGs in U937 cells

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Involvement of complement pathways in patients with bacterial septicemia.

The complement system is a major humoral portion of the innate immune system, playing a significant role in host defence against microorganisms. The biological importance of this system is underlined by the fact that at least three different pathways for its activation exist, the classical, the MBL and the alternative pathway. To elucidate the involvement of the classical and/or the MBL pathway during bacterial septicemia, 32 patients with gram-positive and 30 patients with gram-negative bacterial infections were investigated. In patients with gram-positive bacteria, a significant consumption of C1q (p=0.005) but not of mannose-binding lectin (MBL) (p=0.2) was found during the acute phase of infection. In contrast, in patients with gram-negative bacterial infections, a significant reduction of MBL (p=0.002) and only a moderate, less significant reduction of C1q (p=0.03) were observed. As a model for the binding of MBL to gram-negative bacteria, Salmonella strains with defined mutations in their lipopolysaccharide (LPS) structure were used. The comparison of the binding of MBL to these Salmonella strains with that of the corresponding isolated LPS forms bound to microtiter plates revealed a similar binding pattern, supporting the interpretation that LPS on the surface of gram-negative bacteria is the major acceptor molecule for MBL on these bacteria, which according to our results obviously also takes place during gram-negative bacterial septicaemia. Furthermore, we were able to demonstrate that MBL bound to LPS was able to initiate activation of the complement cascade as measured by the occurrence of the cleavage product C4c

Acylation of the lipid a region of a Klebsiella pneumoniae LPS controls the alternative pathway activation of human complement

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Connaître, caractériser et évaluer les rotations en systèmes de grandes cultures biologiques

Le choix de la rotation des cultures en grandes cultures biologiques spécialisées (sans élevage) est le premier levier activé pour maîtriser de nombreux problèmes, avant tout techniques (maintenir la fertilité des sols, maîtriser les bio-agresseurs, adventices en tête), mais aussi économiques (assurer le revenu de l’agriculteur). Diverses démarches développées dans le cadre du projet RotAB (Casdar 2008-2010) ont permis de mieux connaître les rotations pratiquées en grande culture biologique, de les caractériser et les évaluer. Il ressort que leur conception dépend de nombreux facteurs, avant tout pédoclimatiques (cultures possibles, potentiels de rendement, possibilité d’interventions mécaniques…) et économiques (existence et pérennité des débouchés). Si l’alimentation azotée et la maîtrise de la flore adventice demeurent les principales préoccupations agronomiques des producteurs en AB, la disponibilité en phosphore risque d’être le prochain facteur limitant à moyen et long terme en matière de fertilité des sols et de durabilité de ces systèmes