Functional studies of p.R132C, p.R149C, p.M283V, p.E431K, and a novel c.652-2A>G mutations of the CYP21A2 gene

Congenital adrenal hyperplasia (CAH) due to 21-hydroxylase deficiency is the most frequent inborn error of metabolism and accounts for 90–95% of CAH cases. In the present work, we analyzed the functional consequence of four novel previously reported point CYP21A2 mutations -p.R132C, p.R149C, p.M283V, p.E431K- found in Argentinean 21-hydroxylase deficient patients. In addition, we report an acceptor splice site novel point mutation, c.652-2A.G, found in a classical patient in compound heterozygosity with the rare p.R483Q mutation. We performed bioinformatic and functional assays to evaluate the biological implication of the novel mutation. Our analyses revealed that the residual enzymatic activity of the isolated mutants coding for CYP21A2 aminoacidic substitutions was reduced to a lesser than 50% of the wild type with both progesterone and 17-OH progesterone as substrates. Accordingly, all the variants would predict mild non-classical alleles. In one non-classical patient, the p.E431K mutation was found in cis with the p.D322G one. The highest decrease in enzyme activity was obtained when both mutations were assayed in the same construction, with a residual activity most likely related to the simple virilizing form of the disease. For the c.652-2A.G mutation, bioinformatic tools predicted the putative use of two different cryptic splicing sites. Nevertheless, functional analyses revealed the use of only one cryptic splice acceptor site located within exon 6, leading to the appearance of an mRNA with a 16 nt deletion. A severe allele is strongly suggested due to the presence of a premature stop codon in the protein only 12 nt downstream.Fil: Taboas, Melisa Ivana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Gómez Acuña, Luciana Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Scaia, María Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental; ArgentinaFil: Bruque, Carlos David. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Buzzalino, Noemí Delia. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán". Centro Nacional de Genética Médica; ArgentinaFil: Stivel, M.. Gobierno de la Ciudad Autonoma de Buenos Aires. Hospital General de Agudos Carlos Durand.; ArgentinaFil: Ceballos, Nora Raquel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Dain, Liliana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; Argentin

Large-scale molecular analysis of hereditary hearing loss genes in argentinean deaf patients: lookingfora needle in a haystack

Hereditary Hearing Loss (HHL) is a common trait affecting 1 in 2000 new born children. The presence of over 100 different genes involved in HHL, lead us to go on board with Whole Exome Sequencing (WES) in order to search for the causative mutations.The main objective of this project was to diagnose Argentinean deaf families and discover novel mutations or new genes involved in pathology.We designed a flowchart to exclude all the spurious variations obtained and target for few candidates. To approach this, we filtered results, and candidate variations were segregated throughout family members. Variations positively selected, were analyzed using bioinformatic predictors and tracked in public databases. Additionally, conservation studies, structure and functional domain analysis in proteins, and in-vivo studies were performed.Using this strategy we analysed 15 WES results. We identified 16 causative mutations in 12 families with syndromic and non-syndromic hearing loss (11 missense, 4 frameshift and 1 splicing site mutations). Six were novel and functional studies of some of the identified mutations, using Zebra fish models, are under way. In the remaining 3 families, variables of uncertain significance were detected (Vous).To our knowledge this is the first study using WES to diagnose deaf patients in Argentina. We show in the present study that our flowchart is advantageous and noteworthy for large-scale molecular analysis in deaf patients. These findings clearly highlight the importance of genetic studies followed by in-sílico and in-vivo validation to better understand the genetic basis of Hereditary Hearing loss.Fil: Buonfiglio, Paula Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Bruque, Carlos David. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán". Centro Nacional de Genética Médica; ArgentinaFil: Lotersztein, Vanesa. Ministerio de Defensa. Ejército Argentino. Hospital Militar Central Cirujano Mayor "Dr. Cosme Argerich"; ArgentinaFil: Goldschmidt, E.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Juan A. Fernández"; ArgentinaFil: Elgoyhen, Ana Belen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Dalamon, Viviana Karina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina51st European Society of Human Genetics ConferenceMilanItaliaEuropean Society of Human Genetic

In silico and in vivo analyses of novel variants identified by Whole Exome Sequencing in Argentinean deaf patients: To be or not be pathogenic

Hereditary hearing loss (HHL) is the most common sensory disorder affecting 1 in 500 newborn children. Since HHL is related to more than 150 target genes, we designed a diagnosis strategy in order to identify pathogenic variants.A total of 1250 patients were analyzed for frequent mutations in GJB2 and GJB6 genes by Sanger Sequencing, genotyping 25% of them. From undiagnosed patients, 29 families were selected to perform Whole exome sequencing. After filtering and analysis process, 45% of patients were genotyped, identifying 23 causative mutations (11 novel, 12 reported) classified according to ACMG Standards.Some of the novel variants were further studied in silico by structural and stability studies of the mutated proteins. In addition, datasets from deafness and specific variant databases were correlated with different protein motifs in order to predict the theoretical pathogenicity effect of the aminoacid changes. Furthermore, knock-down phenotype rescue assays in zebrafish are underway to accomplish in vivo validation. In some cases, extensive analysis reinforced the pathogenicity prediction effect of variants and surprisingly, in one case, discouraged the deleterious effect of a genetic variant to the protein.Preliminary results in zebrafish confirmed the pathogenicity of one novel variant in the hair cell function and auditory system.This study shows that our algorithm is successful for the genetic diagnosis of deafness. Comprehensive analysis is crucial to strengthen prediction of variant pathogenicity. These findings highlight the importance of genetic studies followed by in silico and in vivo validation to better understand the genetic basis of HHL.Fil: Buonfiglio, Paula Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Bruque, Carlos David. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán". Centro Nacional de Genética Médica; ArgentinaFil: Goldschmidt, Ernesto. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Juan A. Fernández"; ArgentinaFil: Lotersztein, Vanesa. Ministerio de Defensa. Ejército Argentino. Hospital Militar Central Cirujano Mayor "Dr. Cosme Argerich"; ArgentinaFil: Menazzi, Sebastián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Paoli, Bibiana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Plazas, Paola Viviana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Cátedra de Farmacología. 3º Cátedra de Farmacología; ArgentinaFil: Elgoyhen, Ana Belen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Dalamon, Viviana Karina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina53rd European Society of Human Genetics ConferenceVienaAustriaEuropean Society of Human Genetic

GJB2 and GJB6 genetic variant curation in an Argentinean non-syndromic hearing-impaired cohort

Genetic variants in GJB2 and GJB6 genes are the most frequent causes of hereditary hearing loss among several deaf populations worldwide. Molecular diagnosis enables proper genetic counseling and medical prognosis to patients. In this study, we present an update of testing results in a cohort of Argentinean non-syndromic hearing-impaired individuals. A total of 48 different sequence variants were detected in genomic DNA from patients referred to our laboratory. The y were manually curated and classified based on the American College of Medical Genetics and Genomics/Association for Molecular Pathology ACMG/AMP standards and hearing-loss-gene-specific criteria of the ClinGen Hearing Loss Expert Panel. More than 50% of sequence variants were reclassified from their previous categorization in ClinVar. The se results provide an accurately interpreted set of variants to be taken into account by clinicians and the scientific community, and hence, aid the precise genetic counseling to patients.Fil: Buonfiglio, Paula Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Bruque, Carlos David. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Luce, Leonela Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Giliberto, Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Lotersztein, Vanesa. Ministerio de Defensa. Ejército Argentino. Hospital Militar Central Cirujano Mayor "Dr. Cosme Argerich"; ArgentinaFil: Menazzi, Sebastián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Paoli, Bibiana Patricia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Elgoyhen, Ana Belen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Farmacología; ArgentinaFil: Dalamon, Viviana Karina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentin

Genetic analysis in a familial case with high bone mineral density suggests additive effects at two loci

Osteoporosis is the most common bone disease, characterized by a low bone mineral density (BMD) and increased risk of fracture. At the other end of the BMD spectrum, some individuals present strong, fracture-resistant, bones. Both osteoporosis and high BMD are heritable and their genetic architecture encompasses polygenic inheritance of common variants and some cases of monogenic highly penetrant variants in causal genes. We have investigated the genetics of high BMD in a family segregating this trait in an apparently Mendelian dominant pattern. We searched for rare causal variants by whole-exome sequencing in three affected and three nonaffected family members. Using this approach, we have identified 38 rare coding variants present in the proband and absent in the three individuals with normal BMD. Although we have found four variants shared by the three affected members of the family, we have not been able to relate any of these to the high-BMD phenotype. In contrast, we have identified missense variants in two genes, VAV3 and ADGRE5, each shared by two of out of three affected members, whose loss of function fits with the phenotype of the family. In particular, the proband, a woman displaying the highest BMD (sum Z-score = 7), carries both variants, whereas the other two affected members carry one each. VAV3 encodes a guanine-nucleotide-exchange factor with an important role in osteoclast activation and function. Although no previous cases of VAV3 mutations have been reported in humans, Vav3 knockout (KO) mice display dense bones, similarly to the high-BMD phenotype present in our family. The ADGRE5 gene encodes an adhesion G protein-coupled receptor expressed in osteoclasts whose KO mouse displays increased trabecular bone volume. Combined, these mouse and human data highlight VAV3 and ADGRE5 as novel putative high-BMD genes with additive effects, and potential therapeutic targets for osteoporosis. © 2022 The Authors. JBMR Plus published by Wiley Periodicals LLC on behalf of American Society for Bone and Mineral Research

Prognostic significance of α‐ and β2‐adrenoceptor gene expression in breast cancer patients

Breast cancer is the most frequently diagnosed and leading cause of cancer death among women worldwide. It was classified within molecular intrinsic subtypes: luminal A, luminal B, human epidermal growth factor receptor 2‐enriched and basal‐like. Epinephrine and norepinephrine, released during stress, bind to adrenoceptors. α2‐adrenoceptors are encoded by the ADRA2A , ADRA2B and ADRA2C genes and β2 by ADRB2 .Fil: Rivero, Ezequiel Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Martinez, Leandro Marcelo. Hospital for Special Surgery; Estados UnidosFil: Bruque, Carlos David. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Gargiulo, Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bruzzone, Ariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Luthy, Isabel Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Análisis integral de variantes genéticas identificadas en pacientes con hipoacusia hereditaria en Argentina

La hipoacusia afecta a 1:500 niños recién nacidos. Es una enfermedad heterogénea y se han descrito más de 170 genes relacionados. Dada su complejidad, diseñamos un abordaje multi-target, para detectar las variantes genéticas y validar las causas de la patología mediante análisis *in-sílico* e *in-vivo*.Se analizaron 1250 pacientes mediante secuenciación de Sanger para detectar las mutaciones frecuentes en 2 genes y 30 pacientes mediante WES.Las variantes candidatas se analizaron con herramientas bioinformáticas, se clasificaron y curaron siguiendo las recomendaciones del Hearing Loss Expert Panel. Se realizó el análisis estructural y de estabilidad de proteínas mutadas demostrando la patogenicidad *in-silico* de las variantes nóveles. Confeccionamos un extenso estudio de correlación de bases de datos para inferir una relación ?mutación/probabilidad?. Además, comprobamos la pérdida de funcionalidad proteica con ensayos *in vivo* mediante rescate de fenotipo en pez cebra.El 38% de los pacientes fue genotipificado mediante WES, detectando 23 variantes (12 nóveles). Los distintos abordajes analíticos permitieron predecir y comprobar la patogenicidad de las variantes missense en las proteínas involucradas.La patogenicidad de una variante novel fue demostrada mediante la pérdida de función de la proteína mutada en pez cebra.Este estudio evidencia la eficacia de una estrategia integral para el diagnóstico genético involucrando estudios moleculares seguidos de su validación *in-sílico* e *in-vivo* para comprender mejor los mecanismos que subyacen a la hipoacusia hereditaria.Fil: Buonfiglio, Paula Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Bruque, Carlos David. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán". Centro Nacional de Genética Médica; ArgentinaFil: Menazzi, Sebastián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Plazas, Paola Viviana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Cátedra de Farmacología. 3º Cátedra de Farmacología; ArgentinaFil: Elgoyhen, Ana Belen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Dalamon, Viviana Karina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaXLVIII Congreso Argentino de GenéticaCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaSociedad Argentina de Genétic

Adrenergic receptors in breast cancer: differential effects of α2A and 2C-adrenergic receptor expression on tamoxifen sensitivity in stably transfected luminal MCF-7 cells

Breast cancer is the most frequently diagnosed and leading cause of cancer death among women worldwide. Epinephrine and norepinephrine, released during stress, bind to 9 different adrenoceptors. Our group has already described (SAIC 2015, poster 660) by in silico analysis in a great database that patients with high expression of Alpha2A-adrenoceptors (A2A-AR) have better disease-free survival than those with lower expression, mainly in luminal tamoxifen-treated ones. Contrarily, a high expression of Alpha2C-AR was associated with worse outcome in luminal B but not in luminal A patients.Fil: Aparicio, Evangelina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Rivero, Ezequiel. Centro de Regulación Genómica; EspañaFil: Bruque, Carlos David. Dirección Nacional de Instituto de Investigación.Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Rodriguez, María Sol. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bruzzone, Ariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Perez, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Luthy, Isabel Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaReunion Anual de Sociedades de Biociencia 2019Mar del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación Clínica - SAICAsociación Argentina de Farmacología Experimental - SAFESociedad Argentina de Fisiología - SAFISociedad Argentina de Biología - SABSociedad Argentina de Protozoología - SAPAsociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio - AACYTALAsociación Argentina de Nanomedicinas - NANOMED-arThe Histochemical Society - TH

Adrenergic receptors in breast cancer: differential effects of alpha2A and 2C-adrenergic receptor expression on tamoxifen sensitivity in stably transfected luminal MCF-7 cells

Breast cancer is the most frequently diagnosed and leading cause of cancer death among women worldwide. Epinephrine and norepinephrine, released during stress, bind to 9 different adrenoceptors. Our group has already described (SAIC 2015, poster 660) by in silico analysis in a great database that patients with high expression of Alpha2A- adrenoceptors (A2A-AR) have better disease-free survival than those with lower expression, mainly in luminal tamoxifen-treated ones. Contrarily, a high expression of Alpha2C-AR was associated with worse outcome in luminal B but not in luminal A patients. The aim of the present work was to study the sensibility of tamoxifen on A2A or A2C-AR-overexpressing cells. The human luminal breast cancer MCF-7 cells were stably transfected with A2A or A2C-AR or the empty vector. The expression of A2-AR and Estrogen Receptor Alpha (ER) was measured by RT-qPCR, the sensitivity to tamoxifen by tritiated thymidine incorporation and ER, progesterone receptor and pERK relative to ERK, by Western Blot. They were all performed in the absence of adrenergic stimulation because catecholamines released during stress bind to all receptors and no specific ligand for individual A2-AR exists yet. We successfully over expressed alpha2A and alpha2C on MCF-7 cells: 65 (A2A) and 28 % (A2C) increase compared with empty vector (pCDNA, p<0.05 and p<0.01, respectively). When analyzing the sensitivity to tamoxifen treatment, the A2A cells exhibited an EC50 of 2.867e-10 vs. 4.250 e-10 of pCDNA, p<0.01; while A2C of 1.202e-9, p<0.001.This was accompanied by a decrease in both cases of ER levels measured by RT-qPCR, p<0.05 and WB. A2A cells also showed diminished cell proliferation (p<0.01) in the absence of any stimulation when compared with pCDNA and A2C. We suggest that the increase of tamoxifen sensitivity in A2A cells could be due to the combined effect of inhibiting ER expression and cell proliferation.Fil: Aparicio, Evangelina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Rivero, Ezequiel Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bruque, Carlos David. Administración Nacional de Laboratorio e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Epidemiologia. Departamento de Investigación; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rodriguez, Maria Sol. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bruzzone, Ariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Perez, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Luthy, Isabel Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaReunión Anual de Sociedades de BiocienciaMar del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaAsociación Argentina de Farmacología ExperimentalSociedad Argentina de BiologíaSociedad Argentina de ProtozoologíaAsociación Argentina de NanomedicinasAsociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de LaboratorioThe Histochemical Societ

GJB2 and GJB6 genetic variant curation in a non-syndromic hearing loss cohort from argentina

Hereditary hearing impairment affects 1-500 newborn children. It is characterized by the large amount of genes involved (more than 100) and its phenotype heterogeneity. Despite the wide genetic variety of hearing impairment, the most commonly mutated genes in severe to profound autosomal recessive non-syndromic hearing loss are GJB2 and GJB6, accounting for nearly 50% of the cases in most populations around the Mediterranean Sea. Molecular diagnosis enables proper genetic counseling and medical prognosis to patients. Therefore, correct interpretation of the phenotypic consequences of genetic variants is crucial in genetic diagnosis, since discrepancies in sequence variant interpretation and classification has been reported to lead to serious impact in patient health maintenance.In this study we aimed to identify the genetic causes of hearing loss and performed a manual genetic variant curation following the American College of Medical Genetics and Genomics/Association for Molecular Pathology ACMG/AMP standards and hearing-loss-gene-specific criteria of the ClinGen Hearing Loss Expert Panel.A total of 600 patients were studied for genetic variants in GJB2 and GJB6 genes by Sanger Sequencing technique and Multiplex Gap-PCR, respectively.Overall, 48 different sequence variants were detected in our cohort of patients, being the c.35delG the most common causative variant identified. Besides, more than 50% of sequence variants were reclassified from their previous categorization in ClinVar after careful manual analysis. These results provide an accurately analysed and interpreted set of variants to be taken into account by clinicians and the scientific community, and hence, aid the precise genetic counseling to patients.Fil: Buonfiglio, Paula Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Bruque, Carlos David. Hospital de Alta Complejidad Gobernador Cepernic - Presidente Kirchner; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Menazzi, S.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Francipane, S.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Lotersztein, Vanesa. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán". Centro Nacional de Genética Médica; ArgentinaFil: Elgoyhen, Ana Belen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Cátedra de Farmacología. 3º Cátedra de Farmacología; ArgentinaFil: Dalamon, Viviana Karina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaReunión de Sociedades de Biociencias 2021; LXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; LIII Reunión Anual de la Asociación Argentina de Farmacología Experimental; XI Reunión Anual de la Asociación Argentina de NanomedicinasCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de InmunologíaAsociación Argentina de Farmacología ExperimentalAsociación Argentina de Nanomedicina