Caractérisation de suppresseurs de la mort cellulaire programmée chez Arabidopsis thaliana

Programmed cell death (PCD) is essential for several aspects of plant life, including development and stress responses. Mutational analyses have identified several key PCD components in Arabidopsis thaliana, as the enzyme MIPS1 catalysing the limiting step of myo-inositol (MI) synthesis, crucial cellular compound at the root of many derivatives. One of the most striking features of mips1, disrupted for this protein, is the light-dependent formation of lesions on leaves due to Salicylic Acid (SA)-dependent PCD, revealing roles for MI or inositol derivatives in the regulation of PCD. My thesis work was to find and characterize suppressor of mips1 mutant using two complementary approaches: a gene candidate approach by transcriptomic comparisons and a strategy of direct genetic by screening for extra genic secondary mutations that abolish mips1 cell death phenotype. Analysis of different suppressors revealed the involvement of several factors in MCP, such as the polyadenylation factor CPSF30, a hexokinase or the protein PCB2 operating in chlorophyll biosynthesis. Characterization of these suppressors allowed us to demonstrate crucial role of functions as mRNA maturation, primary carbohydrate metabolism or chloroplastic activity in the regulation of MCP depending on MI accumulation. This work brings many opportunities, to better understand the different regulatory pathways of PCD essential for proper development and to cope with biotic and abiotic stress in plants.La Mort Cellulaire Programmée (MCP) est un processus essentiel pour plusieurs aspects de la vie des plantes, incluant le développement et les réponses aux stress. Des analyses génétiques ont permis d’identifier plusieurs acteurs clés de la MCP chez Arabidopsis thaliana,, dont l’enzyme MIPS1, qui catalyse une étape limitante de la biosynthèse du myo-inositol (MI), composé cellulaire majeur à l’origine de nombreux dérivés. Une des caractéristiques les plus importantes du mutant mips1, désactivé pour cette protéine, est l’apparition de lésions sur les feuilles de rosette, dépendante des conditions lumineuses et due à de la MCP impliquant la voie de l’acide salicylique. Ces données avaient permis de révéler un rôle du MI, ou de ses dérivés, dans le contrôle de la MCP. Mon travail de thèse a consisté à rechercher et à caractériser des suppresseurs du mutant mips1 par deux approches complémentaires : une approche gène candidat par comparaison de transcriptome et une stratégie de génétique directe suite au crible de mutations secondaires extra-géniques abolissant le phénotype de mort cellulaire de mips1. Les analyses effectuées sur différents suppresseurs ont mis en évidence l’implication de plusieurs facteurs dans la MCP, tels que le facteur de polyadénylation CPSF30, d’une héxokinase ou encore de la protéine PCB2 intervenant dans la biosynthèse de la chlorophylle. La caractérisation de ces suppresseurs a permis de démontrer l’importance de différentes voies comme la maturation des ARNm, le métabolisme carboné primaire ou l’activité chloroplastique dans le contrôle de la MCP dépendante de l’accumulation de MI. Ce travail apporte de nombreuses perspectives, visant à mieux appréhender les différentes voies de régulation de la MCP indispensables pour un développement correct et pour faire face à des stress biotiques et abiotiques chez les plantes

Involvement of Arabidopsis BIG protein in cell death mediated by Myo- Inositol homeostasis

International audienc

The Polyadenylation Factor Subunit CLEAVAGE AND POLYADENYLATION SPECIFICITY FACTOR30: A Key Factor of Programmed Cell Death and a Regulator of Immunity in Arabidopsis

Programmed cell death (PCD) is essential for several aspects of plant life, including development and stress responses. Indeed, incompatible plant-pathogen interactions are well known to induce the hypersensitive response, a localized cell death. Mutational analyses have identified several key PCD components, and we recently identified the mips1 mutant of Arabidopsis (Arabidopsis thaliana), which is deficient for the key enzyme catalyzing the limiting step of myoinositol synthesis. One of the most striking features of mips1 is the light-dependent formation of lesions on leaves due to salicylic acid (SA)-dependent PCD, revealing roles for myoinositol or inositol derivatives in the regulation of PCD. Here, we identified a regulator of plant PCD by screening for mutants that display transcriptomic profiles opposing that of the mips1 mutant. Our screen identified the oxt6 mutant, which has been described previously as being tolerant to oxidative stress. In the oxt6 mutant, a transfer DNA is inserted in the CLEAVAGE AND POLYADENYLATION SPECIFICITY FACTOR30 (CPSF30) gene, which encodes a polyadenylation factor subunit homolog. We show that CPSF30 is required for lesion formation in mips1 via SA-dependent signaling, that the prodeath function of CPSF30 is not mediated by changes in the glutathione status, and that CPSF30 activity is required for Pseudomonas syringae resistance. We also show that the oxt6 mutation suppresses cell death in other lesion-mimic mutants, including lesion-simulating disease1, mitogen-activated protein kinase4, constitutive expressor of pathogenesis-related genes5, and catalase2, suggesting that CPSF30 and, thus, the control of messenger RNA 3′ end processing, through the regulation of SA production, is a key component of plant immune responses

Characterization of suppressors of programmed cell death in Arabidopsis thaliana

La Mort Cellulaire Programmée (MCP) est un processus essentiel pour plusieurs aspects de la vie des plantes, incluant le développement et les réponses aux stress. Des analyses génétiques ont permis d’identifier plusieurs acteurs clés de la MCP chez Arabidopsis thaliana,, dont l’enzyme MIPS1, qui catalyse une étape limitante de la biosynthèse du myo-inositol (MI), composé cellulaire majeur à l’origine de nombreux dérivés. Une des caractéristiques les plus importantes du mutant mips1, désactivé pour cette protéine, est l’apparition de lésions sur les feuilles de rosette, dépendante des conditions lumineuses et due à de la MCP impliquant la voie de l’acide salicylique. Ces données avaient permis de révéler un rôle du MI, ou de ses dérivés, dans le contrôle de la MCP. Mon travail de thèse a consisté à rechercher et à caractériser des suppresseurs du mutant mips1 par deux approches complémentaires : une approche gène candidat par comparaison de transcriptome et une stratégie de génétique directe suite au crible de mutations secondaires extra-géniques abolissant le phénotype de mort cellulaire de mips1. Les analyses effectuées sur différents suppresseurs ont mis en évidence l’implication de plusieurs facteurs dans la MCP, tels que le facteur de polyadénylation CPSF30, d’une héxokinase ou encore de la protéine PCB2 intervenant dans la biosynthèse de la chlorophylle. La caractérisation de ces suppresseurs a permis de démontrer l’importance de différentes voies comme la maturation des ARNm, le métabolisme carboné primaire ou l’activité chloroplastique dans le contrôle de la MCP dépendante de l’accumulation de MI. Ce travail apporte de nombreuses perspectives, visant à mieux appréhender les différentes voies de régulation de la MCP indispensables pour un développement correct et pour faire face à des stress biotiques et abiotiques chez les plantes.Programmed cell death (PCD) is essential for several aspects of plant life, including development and stress responses. Mutational analyses have identified several key PCD components in Arabidopsis thaliana, as the enzyme MIPS1 catalysing the limiting step of myo-inositol (MI) synthesis, crucial cellular compound at the root of many derivatives. One of the most striking features of mips1, disrupted for this protein, is the light-dependent formation of lesions on leaves due to Salicylic Acid (SA)-dependent PCD, revealing roles for MI or inositol derivatives in the regulation of PCD. My thesis work was to find and characterize suppressor of mips1 mutant using two complementary approaches: a gene candidate approach by transcriptomic comparisons and a strategy of direct genetic by screening for extra genic secondary mutations that abolish mips1 cell death phenotype. Analysis of different suppressors revealed the involvement of several factors in MCP, such as the polyadenylation factor CPSF30, a hexokinase or the protein PCB2 operating in chlorophyll biosynthesis. Characterization of these suppressors allowed us to demonstrate crucial role of functions as mRNA maturation, primary carbohydrate metabolism or chloroplastic activity in the regulation of MCP depending on MI accumulation. This work brings many opportunities, to better understand the different regulatory pathways of PCD essential for proper development and to cope with biotic and abiotic stress in plants

The polyadenylation factor subunit CLEAVAGE AND POLYADENYLATION SPECIFICITY FACTOR30: a key factor of programmed cell death and a regulator of immunity in Arabidopsis

International audienceProgrammed cell death (PCD) is essential for several aspects of plant life, including development and stress responses. Indeed, incompatible plant-pathogen interactions are well known to induce the hypersensitive response, a localized cell death. Mutational analyses have identified several key PCD components, and we recently identified the mips1 mutant of Arabidopsis (Arabidopsis thaliana), which is deficient for the key enzyme catalyzing the limiting step of myoinositol synthesis. One of the most striking features of mips1 is the light-dependent formation of lesions on leaves due to salicylic acid (SA)-dependent PCD, revealing roles for myoinositol or inositol derivatives in the regulation of PCD. Here, we identified a regulator of plant PCD by screening for mutants that display transcriptomic profiles opposing that of the mips1 mutant. Our screen identified the oxt6 mutant, which has been described previously as being tolerant to oxidative stress. In the oxt6 mutant, a transfer DNA is inserted in the CLEAVAGE AND POLYADENYLATION SPECIFICITY FACTOR30 (CPSF30) gene, which encodes a polyadenylation factor subunit homolog. We show that CPSF30 is required for lesion formation in mips1 via SA-dependent signaling, that the prodeath function of CPSF30 is not mediated by changes in the glutathione status, and that CPSF30 activity is required for Pseudomonas syringae resistance. We also show that the oxt6 mutation suppresses cell death in other lesion-mimic mutants, including lesion-simulating disease1, mitogen-activated protein kinase4, constitutive expressor of pathogenesis-related genes5, and catalase2, suggesting that CPSF30 and, thus, the control of messenger RNA 3' end processing, through the regulation of SA production, is a key component of plant immune responses

Chronique de jurisprudence de droit privé du patrimoine

Entre le 1er octobre 2020 et le 15 janvier 2021, la production jurisprudentielle en droit patrimonial a été plutôt dense. Sans révolutionner la matière, la Cour de cassation apporté d’utiles précisions sur les méthodes de calcul du profit subsistant (Civ. 1re, 14 oct. 2020, n° 19-13.702) et de l’indemnité de réduction (Civ. 1re, 4 nov. 2020, n° 19-10.179). Elle aussi rappelé quelques évidences visiblement oubliées telles que la possibilité de prescrire contre un titre (Civ. 3e, 17 déc. 2020, n° 18-24.434) et l’obligation de restituer les sommes ayant fait l’objet d’un quasi-usufruit (Civ. 1re, 4 nov. 2020, n° 19-14.421). Le droit ancien fait aussi quelques apparitions. L’on regardera avec un peu de nostalgie l’arrêt du 16 décembre 2020 relatif à la charge de la preuve d’une donation rémunératoire entre époux dans le contentieux de la révocabilité post-divorce (n° 19-13.701) et avec circonspection l’arrêt du 18 novembre 2020 dans lequel la Première chambre civile s’entête à qualifier la clause de contribution quotidienne aux charges du mariage de présomption irréfragable (n° 19-15.353). I. Régimes matrimoniaux A. Régime primaire Retour sur la nature de la présomption d’acquittement quotidien des charges du mariage I – Le renforcement de la cohérence de la construction jurisprudentielle II – Une solution décevante au regard du droit de la preuve B. Qualification des biens C. Pouvoirs des époux, gage des créanciers D. Liquidation du régime matrimonial Récompenses : détermination du profit subsistant en présence d’un bien partiellement aliéné La donation chassée par la collaboration conjugale excédant l’obligation contributive aux charges du mariage II. Libéralités A. Donations Les délicates règles de preuve en matière de don manuel et de vices du consentement B. Legs C. Testaments D. Contrats de service gratuit III. Assurance-vie Forme de la désignation bénéficiaire : quelle valeur accorder à la lettre type non signée ? IV. Succession A. Ouverture de la succession Demande de fixation d’une créance et opération de partage B. Liquidation de la succession Paiement de l’indemnité de réduction : nécessité d’une revalorisation Opposition d’intérêts et règlement d’une succession : retour sur un concept-clé du droit des mineurs I – Un rappel : une opposition d’intérêts souverainement appréciée par les juges du fond II – Une confirmation : une conception large de la notion d’opposition d’intérêts V. Droit des biens A. Classification des biens B. Propriété individuelle Le rappel d’une évidence : la prescription trentenaire peut toujours être opposée à un titre, même régulièrement publié C. Démembrements de propriété Quasi-usufruit sur comptes bancaires : analyse et conséquences D. Propriété collective E. Autres droit

Involvement of Arabidopsis hexokinase1 in cell death mediated by myo-inositol accumulation

International audienceProgrammed cell death (PCD) is essential for several aspects of plant life, including development and stress responses. We recently identified the mips1 mutant of Arabidopsis thaliana, which is deficient for the enzyme catalyzing the limiting step of myo-inositol (MI) synthesis. One of the most striking features of mips1 is the light-dependent formation of lesions on leaves due to salicylic acid (SA)-dependent PCD. Here, we identified a suppressor of PCD by screening for mutations that abolish the mips1 cell death phenotype. Our screen identified the hxk1 mutant, mutated in the gene encoding the hexokinase1 (HXK1) enzyme that catalyzes sugar phosphorylation and acts as a genuine glucose sensor. We show that HXK1 is required for lesion formation in mips1 due to alterations in MI content, via SA-dependant signaling. Using two catalytically inactive HXK1 mutants, we also show that hexokinase catalytic activity is necessary for the establishment of lesions in mips1. Gas chromatography-mass spectrometry analyses revealed a restoration of the MI content in mips1 hxk1 that it is due to the activity of the MIPS2 isoform, while MIPS3 is not involved. Our work defines a pathway of HXK1-mediated cell death in plants and demonstrates that two MIPS enzymes act cooperatively under a particular metabolic status, highlighting a novel checkpoint of MI homeostasis in plants

Chronique de jurisprudence de droit privé du patrimoine

La période qui vient de s’écouler n’a pas été propice à l’activité des juridictions. C’est donc sans grande surprise que l’on constate un assez faible nombre d’arrêts rendus en droit privé du patrimoine entre le 15 janvier au 31 mai 2020, intervalle couvert par la présente chronique. On notera surtout que l’indivisaire titulaire d’un bail à faible loyer pour la jouissance d’un bien indivis n’est pas tenu d’acquitter une indemnité d’occupation (Civ. 1re, 18 mars 2020, n° 19-11.206) ainsi qu’une réaffirmation de l’autonomie de l’héritier indivisaire pour l’exercice d’actions en justice (Civ. 3e, 28 mai 2020, n° 19-13.150, F-D ; Civ. 3e, 28 mai 2020, n° 19-14.156). En matière successorale, la Cour de cassation a précisé le régime de la charge de la preuve du rapport des dettes (Civ. 1re, 12 févr. 2020, n° 18-23.573), rappelé les conditions du rapport des dons (Civ. 1re, 18 mars 2020, n° 18-25.309 ; Civ. 1re, 18 mars 2020, n° 18-19.650) et refusé qu’un mandataire successoral puisse être désigné pour consentir à un partage (Civ. 1re, 13 mai 2020, n° 18-26.702). Il est également précisé que la régularité d’un avenant au contrat d’assurance-vie au regard des règles de la tutelle n’exclut pas une action en nullité pour insanité d’esprit (Civ. 1re, 15 janv. 2020 n° 18-26.683). I. Régimes matrimoniaux A. Régime primaire B. Qualification des biens C. Pouvoirs des époux, gage des créanciers D. Liquidation du régime matrimonial Règlement des intérêts patrimoniaux des époux : de la nécessité d’un accord pour en obtenir l’homologation… I – Recevabilité d’une demande d’homologation émanant d’un seul époux II – Mal-fondé d’une demande d’homologation à défaut de conclusions concordantes II. Libéralités A. Donations Une donation indirecte entre associés peut être réalisée en réglant des dettes sociales Intention libérale et rapport à la succession B. Legs C. Testaments D. Contrats de service gratuit III. Assurance-vie L’action en nullité pour insanité d’esprit est compatible avec le respect des règles relatives à l’assistance du curateur I – Une solution conforme à la loi II – Une solution en adéquation avec la jurisprudence III – Une solution limitée à la mesure de curatelle ? IV. Succession A. Ouverture de la succession Le mandataire successoral ne peut être désigné pour consentir à un partage B. Liquidation de la succession Limites à la récupération sur succession d’aides sociales départementales facultatives I – Limites tenant aux conditions de la récupération sur succession des aides sociales facultatives A – Caractère facultatif de l’aide sociale B – Caractère récupérable de l’aide sociale au moment de son versement et au décès du bénéficiaire II – Limites tenant aux modalités de la récupération sur succession des aides sociales facultatives A – Obstacles légaux à la récupération B – Aménagement judiciaire de la récupération La charge de la preuve de l’extinction du rapport d’une dette appartient au débiteur V. Droit des biens A. Classification des biens B. Propriété individuelle À défaut de plafonnement, le lissage vaut toujours C. Démembrements de propriété D. Propriété collective L’indivisaire locataire n’est pas redevable d’une indemnité d’occupation I – L’indivisaire locataire n’est pas redevable d’une indemnité d’occupation II – La sous-évaluation du loyer ne porte pas atteinte aux droits concurrents des coïndivisaires L’autonomie de l’héritier indivisaire pour agir en justice E. Autres droit

Chronique de jurisprudence de droit privé du patrimoine

Entre le 1er octobre 2020 et le 15 janvier 2021, la production jurisprudentielle en droit patrimonial a été plutôt dense. Sans révolutionner la matière, la Cour de cassation apporté d’utiles précisions sur les méthodes de calcul du profit subsistant (Civ. 1re, 14 oct. 2020, n° 19-13.702) et de l’indemnité de réduction (Civ. 1re, 4 nov. 2020, n° 19-10.179). Elle aussi rappelé quelques évidences visiblement oubliées telles que la possibilité de prescrire contre un titre (Civ. 3e, 17 déc. 2020, n° 18-24.434) et l’obligation de restituer les sommes ayant fait l’objet d’un quasi-usufruit (Civ. 1re, 4 nov. 2020, n° 19-14.421). Le droit ancien fait aussi quelques apparitions. L’on regardera avec un peu de nostalgie l’arrêt du 16 décembre 2020 relatif à la charge de la preuve d’une donation rémunératoire entre époux dans le contentieux de la révocabilité post-divorce (n° 19-13.701) et avec circonspection l’arrêt du 18 novembre 2020 dans lequel la Première chambre civile s’entête à qualifier la clause de contribution quotidienne aux charges du mariage de présomption irréfragable (n° 19-15.353). I. Régimes matrimoniaux A. Régime primaire Retour sur la nature de la présomption d’acquittement quotidien des charges du mariage I – Le renforcement de la cohérence de la construction jurisprudentielle II – Une solution décevante au regard du droit de la preuve B. Qualification des biens C. Pouvoirs des époux, gage des créanciers D. Liquidation du régime matrimonial Récompenses : détermination du profit subsistant en présence d’un bien partiellement aliéné La donation chassée par la collaboration conjugale excédant l’obligation contributive aux charges du mariage II. Libéralités A. Donations Les délicates règles de preuve en matière de don manuel et de vices du consentement B. Legs C. Testaments D. Contrats de service gratuit III. Assurance-vie Forme de la désignation bénéficiaire : quelle valeur accorder à la lettre type non signée ? IV. Succession A. Ouverture de la succession Demande de fixation d’une créance et opération de partage B. Liquidation de la succession Paiement de l’indemnité de réduction : nécessité d’une revalorisation Opposition d’intérêts et règlement d’une succession : retour sur un concept-clé du droit des mineurs I – Un rappel : une opposition d’intérêts souverainement appréciée par les juges du fond II – Une confirmation : une conception large de la notion d’opposition d’intérêts V. Droit des biens A. Classification des biens B. Propriété individuelle Le rappel d’une évidence : la prescription trentenaire peut toujours être opposée à un titre, même régulièrement publié C. Démembrements de propriété Quasi-usufruit sur comptes bancaires : analyse et conséquences D. Propriété collective E. Autres droit

Chronique de jurisprudence de droit privé du patrimoine

La période qui vient de s’écouler n’a pas été propice à l’activité des juridictions. C’est donc sans grande surprise que l’on constate un assez faible nombre d’arrêts rendus en droit privé du patrimoine entre le 15 janvier au 31 mai 2020, intervalle couvert par la présente chronique. On notera surtout que l’indivisaire titulaire d’un bail à faible loyer pour la jouissance d’un bien indivis n’est pas tenu d’acquitter une indemnité d’occupation (Civ. 1re, 18 mars 2020, n° 19-11.206) ainsi qu’une réaffirmation de l’autonomie de l’héritier indivisaire pour l’exercice d’actions en justice (Civ. 3e, 28 mai 2020, n° 19-13.150, F-D ; Civ. 3e, 28 mai 2020, n° 19-14.156). En matière successorale, la Cour de cassation a précisé le régime de la charge de la preuve du rapport des dettes (Civ. 1re, 12 févr. 2020, n° 18-23.573), rappelé les conditions du rapport des dons (Civ. 1re, 18 mars 2020, n° 18-25.309 ; Civ. 1re, 18 mars 2020, n° 18-19.650) et refusé qu’un mandataire successoral puisse être désigné pour consentir à un partage (Civ. 1re, 13 mai 2020, n° 18-26.702). Il est également précisé que la régularité d’un avenant au contrat d’assurance-vie au regard des règles de la tutelle n’exclut pas une action en nullité pour insanité d’esprit (Civ. 1re, 15 janv. 2020 n° 18-26.683). I. Régimes matrimoniaux A. Régime primaire B. Qualification des biens C. Pouvoirs des époux, gage des créanciers D. Liquidation du régime matrimonial Règlement des intérêts patrimoniaux des époux : de la nécessité d’un accord pour en obtenir l’homologation… I – Recevabilité d’une demande d’homologation émanant d’un seul époux II – Mal-fondé d’une demande d’homologation à défaut de conclusions concordantes II. Libéralités A. Donations Une donation indirecte entre associés peut être réalisée en réglant des dettes sociales Intention libérale et rapport à la succession B. Legs C. Testaments D. Contrats de service gratuit III. Assurance-vie L’action en nullité pour insanité d’esprit est compatible avec le respect des règles relatives à l’assistance du curateur I – Une solution conforme à la loi II – Une solution en adéquation avec la jurisprudence III – Une solution limitée à la mesure de curatelle ? IV. Succession A. Ouverture de la succession Le mandataire successoral ne peut être désigné pour consentir à un partage B. Liquidation de la succession Limites à la récupération sur succession d’aides sociales départementales facultatives I – Limites tenant aux conditions de la récupération sur succession des aides sociales facultatives A – Caractère facultatif de l’aide sociale B – Caractère récupérable de l’aide sociale au moment de son versement et au décès du bénéficiaire II – Limites tenant aux modalités de la récupération sur succession des aides sociales facultatives A – Obstacles légaux à la récupération B – Aménagement judiciaire de la récupération La charge de la preuve de l’extinction du rapport d’une dette appartient au débiteur V. Droit des biens A. Classification des biens B. Propriété individuelle À défaut de plafonnement, le lissage vaut toujours C. Démembrements de propriété D. Propriété collective L’indivisaire locataire n’est pas redevable d’une indemnité d’occupation I – L’indivisaire locataire n’est pas redevable d’une indemnité d’occupation II – La sous-évaluation du loyer ne porte pas atteinte aux droits concurrents des coïndivisaires L’autonomie de l’héritier indivisaire pour agir en justice E. Autres droit