Isolation, expansion, and characterization of equine adipose-derived stem cells

Devido aos excelentes resultados obtidos em pesquisas com células-tronco e suas aplicabilidades promissoras, a terapia com estas células encontra-se em momento de máxima ascensão, estimulando assim, inúmeras pesquisas. A fim de padronizar o cultivo e avaliar a viabilidade de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo de equinos visando a terapia celular nesta espécie, conduziu-se um estudo de isolamento, cultivo e caracterização de tais células. Para tal, foi realizada coleta de tecido adiposo de cinco equinos sem raça definida, com aproximadamente cinco anos. Em seguida, o tecido foi refrigerado e transportado ao laboratório, onde foi realizado o protocolo de cultivo celular durante aproximadamente 14 dias. Após o término deste procedimento, uma alíquota de células foi encaminhada para a realização do teste de quantificação e viabilidade celular com Azul de Tripan 1%, sendo outra porção destinada à confirmação da linhagem de célula tronco mesenquimal por meio de imunofenotipagem com os anticorpos monoclonais anti-CD11b, anti-CD45, anti-CD90 e anti-CD105, e de diferenciação celular em linhagem condrogênica, adipogênica e osteogênica. Houve diferenciação celular e marcação positiva dos antígenos de superfície CD44 e MHCI e negativa dos CD45 e CD11b, confirmando-se a origem mesenquimal e não hematopoiética. A viabilidade celular média obtida das células-tronco mesenquimais foi de 92,83% considerada satisfatória. Portanto, a utilização deste protocolo para obtenção de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo se mostrou uma opção confiável e viável para utilização na terapia celular em equinos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACTDue to the excellent results of stem cell research and its promising applicability, the therapy with these cells is undergoing a period of maximum visibility and numerous studies. In order to standardize the culture and to evaluate the viability of mesenchymal stem cells from adipose tissue of horses, aiming at cell therapy in this species, a study of isolation, expansion and characterization was conducted. For this, adipose tissue was collected from five crossbred horses aged approximately five years old. Subsequently, the tissue was immediately refrigerated and transported to the laboratory where the isolation and culture protocol, lasting approximately 14 days, was performed. After the end of this procedure, a cell pellet was obtained and resuspended in PBS. A portion of material obtained by centrifugation was collected and the cells were stained with 1% Trypan Blue for quantification and assessment of cell viability. Another sample was collected to confirm the lineage of stem cells by flow cytometry using monoclonal against the surface markers CD11b, CD45, CD90 and CD105; and by cellular differentiation assays to chondrogenic, adipogenic and osteogenic lineages. The isolated cells differentiated in the three lineages and showed positive staining for CD90 and CD105 and negative staining for CD11b and CD45, confirming the isolation of stem cells of mesenchymal origin. The average cell viability obtained was 92.83% and thus satisfactory. Therefore, the use of this protocol to obtain mesenchymal stem cells from adipose tissue was deemed to be a promising option for cell therapy in horses

Reflexos da sociedade e a síndrome de Burnout na medicina veterinária: revisão de literatura / Reflexes of society and the Burnout syndrome in veterinary medicine: literature review

Burnout, também designada como Síndrome do Esgotamento Profissional ou Síndrome de Burnout, é um perfil de ansiedade que rodeia o cenário atual da Medicina Veterinária, e esta é definida como o processo no qual os aspectos do contexto de trabalho e interpessoais contribuem para o seu desenvolvimento e uma condição de sofrimento psíquico, que basicamente é caracterizada por três dimensões: o desgaste emocional, a despersonalização e a incompetência profissional (ou baixa realização profissional) e pessoal, que podem ser juntas ou independentemente entre si. O objetivo com esse presente estudo é abordar uma revisão de literatura acerca de um assunto visivelmente frequente no ambiente universitário e no âmbito da indústria de pequenos animais, mas que carece de estudos na área no Brasil. Esta síndrome é de suma importância, visto que traz diversas consequências para o indivíduo, tanto psíquicas tanto quanto físicas. Além disso, diversos estudos em diferentes países relatam que o médico veterinário de pequenos animais é a profissão com maiores problemas relacionais e interpessoais entre amigos e familiares, ou seja, a que possui maior repercussão negativa na vida pessoal. Associado a isso, é também a profissão mais relacionada ao consumo excessivo de bebidas alcoólicas e entorpecentes e a que possui maior índice de suicídio nos Estados Unidos, Escócia, País de Gales e Austrália, quando comparados aos demais profissionais da área da saúde e a população em geral. Com isso, conclui-se que a Síndrome de Burnout é uma doença social difundida globalmente com reflexo direto na saúde e na qualidade dos profissionais da Medicina Veterinária, não somente na área da Medicina Humana. Portanto, mostra-se imprescindível o desenvolvimento de estudos referente a essa área principalmente no Brasil, a fim de detectar a incidência desta síndrome no Brasil e dessa forma, estabelecer diretrizes a fim de melhorar as condições de vida e trabalho dos que amam e apoiam esta profissão

Lesões cutâneas traumática em pequenos animais: características e tratamentos / Traumatic skin injuries in small animals: characteristics and treatments

A ferida é provocada por uma quebra da continuidade cutânea, com comprometimento da proteção do tecido ou de funções fisiológicas. Na rotina clínica da Medicina Veterinária as causas são muitas, como mordidas por brigas; acidentes de trânsito; lacerações de objetos pontiagudos; lesões térmicas e lesões cirúrgicas. Imediatamente após a ocorrência do trauma dá-se início o processo cicatricial, a lesão estimula uma sequência de eventos que vão regenerar o tecido lesionado. É necessário conhecer o tipo de lesão causada e o processo cicatricial envolvido para determinar o tratamento adequado para auxiliar na cicatrização. Diante disso esta revisão tem por objetivo expor e discutir o processo de cicatrização, as possíveis causas e tratamentos utilizados em lesões cutâneas

LL-37 boosts immunosuppressive function of placenta-derived mesenchymal stromal cells

Background: Although promising for graft-versus-host disease (GvHD) treatment, MSC therapy still faces important challenges. For instance, increasing MSC migratory capacity as well as potentializing immune response suppression are of interest. For GvHD management, preventing opportunistic infections is also a valuable strategy, since immunocompromised patients are easy targets for infections. LL-37 is a host defense peptide (HDP) that has been deeply investigated due to its immunomodulatory function. In this scenario, the combination of MSC and LL-37 may result in a robust combination to be clinically used. Methods: In the present study, the effects of LL-37 upon the proliferation and migratory capacity of human placenta-derived MSCs (pMSCs) were assessed by MTT and wound scratch assays. The influence of LL-37 over the immunosuppressive function of pMSCs was then investigated using CFSE cell division kit. Flow cytometry and real-time PCR were used to investigate the molecular mechanisms involved in the effects observed. Results: LL-37 had no detrimental effects over MSC proliferation and viability, as assessed by MTT assay. Moreover, the peptide promoted increased migratory behavior of pMSCs and enhanced their immunomodulatory function over activated human PBMCs. Strikingly, our data shows that LL-37 treatment leads to increased TLR3 levels, as shown by flow cytometry, and to an increased expression of factors classically related to immunosuppression, namely IDO, IL-10, TGF-β, IL-6, and IL-1β. Conclusions: Taken together, our observations may serve as groundwork for the development of new therapeutic strategies based on the combined use of LL-37 and MSCs, which may provide patients not only with an enhanced immunosuppression regime, but also with an agent to prevent opportunistic infections

Comparison of two methods of equine bone marrow aspiration and two solutions for mononuclear cell isolation

O objetivo do presente estudo foi avaliar a concentração e viabilidade da fração de células mononucleares (FCM) a partir de diferentes técnicas de colheita e processamento de medula óssea (MO) em equinos. Foram avaliados cinco equinos adultos, hígidos e sem raça definida. Obtiveram-se frações de medula óssea (MO) do osso esterno, de acordo com dois protocolos: na colheita A, utilizou-se 10mL de solução de heparina dentro da seringa e em seguida, aspirou-se a MO; na colheita B, 10mL de solução de heparina foi injetada na MO e a aspiração foi realizada após 20 segundos. Todos os animais foram submetidos aos dois protocolos de colheitas, realizadas em sequência, sem intervalo entre os dois procedimentos. Após isolamento da fração de células mononucleares (FCM), das amostras de MO obtidas nas colheitas A e B, cada amostra foi dividida em dois tubos, um contendo solução de DMEM e outro contendo PBS. Assim, alternando-se o tipo de colheita e a solução diluidora, obteve-se quatro tubos de amostras por animal. Os tubos foram centrifugados e os sedimentos foram homogeneizados nos respectivos meios obtendo-se o volume final de 100μL. Realizou-se determinação da concentração e viabilidade celular, obtendo-se as concentrações médias de FCM. Para ambos os meios de diluição, a colheita B apresentou valor numérico maior em comparação à colheita A, porém não foi significativo (p>0,05). Atribui-se tal tendência à menor ocorrência de coagulação da MO no momento da colheita B, sugerindo-se melhor aproveitamento da FCM. Não houve diferença (p>0,05) entre os meios DMEM ou PBS, indicando que os mesmos não alteraram a viabilidade celular. Os protocolos utilizados para colheita de MO e separação da FCM se mostraram eficientes, para o uso em terapia celular em equinos.The aim of this study was to evaluate mononuclear cells fraction (MCF) concentration and viability from different techniques of bone marrow (BM) aspiration and processing in horses. Five adult horses, healthy and of unknown breed were evaluated. BM was obtained from sternum bone, according two protocols: in aspiration A, 10mL of heparin solution was used inside the syringe and BM was aspirated; in aspiration B, 10mL of heparin solution was injected into the BM, and aspiration was done after 20 seconds. All the animals were submitted by both protocols realized in sequence, without a gap between the procedures. After MCF isolation, of BM samples obtained from A and B aspiration, each sample was divided into two tubes; one contained DMEM solution and the other with PBS solution. Therefore, interchanging the aspiration protocol and the dilution solution, four sample tubes were obtained for each horse. The tubes were centrifuged and the pellet was homogenized with the respectively solution to obtain the final volume of 100μL. Cellular concentration and viability were determined to obtain the FCM medium concentration. For both solutions, the aspiration B had higher numeric values comparing with aspiration A; however, it was not significant (p>0.05). This tendency is attribute for the less BM coagulation observed in the aspiration B, suggesting greater improvement of MCF. No difference (p>0.05) was found between DMEM and PBS solution, indicating that both do not alter the cell viability. The protocols used for BM aspiration and MCF isolation were efficient for application in equine cellular therapy

Avaliação de margens cirúrgicas e prevalência de neoplasias mamárias em cadelas: um estudo retrospectivo

Na cirurgia de remoção de neoplasias mamárias a obtenção de margens livres é importante para predizer a eficácia do procedimento. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação das margens com os achados clínicos e histopatológicos de cadelas com neoplasia mamária submetidas à exérese cirúrgica. Foi realizado um estudo retrospectivo, no período de 2016 à 2020, de 169 cadelas diagnosticadas com neoplasia mamária maligna, onde foram obtidas informações quanto: avaliação das margens, localização, tamanho, apresentação clínica, grau de aderência, graduação e classificação histopatológica das neoplasias e o comprometimento de linfonodos regionais. As margens estavam comprometidas em 11 (6,5%) pacientes. As neoplasias malignas mais frequentes foram carcinoma em tumor misto (n=83; 29,64%). Pacientes com carcinoma anaplásico (n=6; 2,14%) apresentaram mais probabilidade de ter as margens comprometidas (p= 0,050), e os pacientes com adenomioepitelioma maligno (n=13; 100%), maiores chances de apresentarem as margens livres (p=0,021). Os pacientes que apresentaram os linfonodos com metástases, possuíram mais chance de as margens estarem comprometidas (p=0.041). Podemos concluir que os achados histopatológicos possuem relação com as margens cirúrgicas, enquanto os parâmetros clínicos como: localização, o tamanho, a apresentação não interferiram. Nesse estudo os pacientes acometidos com carcinomas anaplásicos apresentam uma maior chance de as margens estarem comprometidas, enquanto os acometidos por adenomioepitelioma maligno tenderam a apresentar as margens cirúrgicas livres de neoplasia

Avaliação de margens cirúrgicas e prevalência de neoplasias mamárias em cadelas: um estudo retrospectivo

In surgery for removal of mammary neoplasms, the achievement of free margins is important to predict the effectiveness of the procedure. The aim of this study was to evaluate the relationship between margins and clinical and histopathological findings in bitches with mammary neoplasms submitted to surgical excision. A retrospective study was conducted from 2016 to 2020, of 170 bitches diagnosed with malignant mammary neoplasia, where information was obtained regarding: evaluation of the margins, location, size, clinical presentation, degree of adhesion, degree and histopathological classification of neoplasms and the involvement of regional lymph nodes. Margins were compromised in 11 (6.5%) patients. The most frequent malignant neoplasms were mixed tumor carcinoma (n=83, 29.64%). Patients with anaplastic carcinoma (n=6, 2.14%) were more likely to have compromised margins (p= 0.050), and patients with malignant adenomyoepithelioma (n=13, 100%), more likely to have free margins (p=0.021). Patients who had lymph nodes with metastases were more likely to have compromised margins (p=0.041). We can conclude that the histopathological findings are related to surgical margins, while the clinical parameters evaluated, such as location, size and presentation did not interfere. Patients affected with anaplastic carcinomas had a greater chance of having compromised margins, while those affected by malignant adenomyoepithelioma tended to have surgical margins free of neoplasia.Na cirurgia de remoção de neoplasias mamárias a obtenção de margens livres é importante para predizer a eficácia do procedimento. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação das margens com os achados clínicos e histopatológicos de cadelas com neoplasia mamária submetidas à exérese cirúrgica. Foi realizado um estudo retrospectivo, no período de 2016 à 2020, de 169 cadelas diagnosticadas com neoplasia mamária maligna, onde foram obtidas informações quanto: avaliação das margens, localização, tamanho, apresentação clínica, grau de aderência, graduação e classificação histopatológica das neoplasias e o comprometimento de linfonodos regionais. As margens estavam comprometidas em 11 (6,5%) pacientes. As neoplasias malignas mais frequentes foram carcinoma em tumor misto (n=83; 29,64%). Pacientes com carcinoma anaplásico (n=6; 2,14%) apresentaram mais probabilidade de ter as margens comprometidas (p= 0,050), e os pacientes com adenomioepitelioma maligno (n=13; 100%), maiores chances de apresentarem as margens livres (p=0,021). Os pacientes que apresentaram os linfonodos com metástases, possuíram mais chance de as margens estarem comprometidas (p=0.041). Podemos concluir que os achados histopatológicos possuem relação com as margens cirúrgicas, enquanto os parâmetros clínicos como: localização, o tamanho, a apresentação não interferiram. Nesse estudo os pacientes acometidos com carcinomas anaplásicos apresentam uma maior chance de as margens estarem comprometidas, enquanto os acometidos por adenomioepitelioma maligno tenderam a apresentar as margens cirúrgicas livres de neoplasia

Dados epidemiológicos da esporotricose felina na região Sul Do Rio Grande do Sul: uma abordagem em saúde pública / Epidemiological data on feline sporotrichosis in Southern Rio Grande Do Sul: a public health approach

A esporotricose é a micose subcutânea mais importante do Brasil, causada por fungos do Complexo Sporothrix schenckii, e frequentemente acomete humanos, cães e, principalmente, gatos. Atualmente o felino atua como o maior disseminador da doença, tanto para outros animais quanto para os seres humanos, devido a características peculiares da espécie. Assim, torna-se importante monitorar a epidemiologia da esporotricose felina, principalmente em regiões endêmicas, como é o caso da região sul do Rio Grande do Sul (RS). O objetivo deste estudo foi atualizar os dados epidemiológicos da esporotricose felina. Foi conduzido este estudo através de questionamentos aplicados aos tutores de felinos com esporotricose. Os resultados demonstraram que os casos de esporotricose felina são predominantemente representados por adultos, machos, não castrados, com livre acesso à rua, semidomiciliados, com hábito de se envolver em brigas, com contato com humanos, cães e gatos. Além disso, este trabalho evidencia de maneira inédita e alarmante os fatos de que a maioria dos felinos acometidos por esporotricose já estão sob a guarda de um tutor quando contraem a doença; que a maioria dos felinos acometidos recebe tratamento antifúngico sem orientação veterinária, e quando ocorre à orientação os pacientes já estão com seis a 12 meses do início do desenvolvimento das lesões. Conclui-se que o perfil dos animais acometidos não sofreu alterações relevantes, com isso enfatiza-se a necessidade de conscientização da população sobre essa enfermidade, principalmente no que diz respeito às medidas de controle e prevenção e sobre o manejo adequado dos animais doentes e a guarda responsável. 

Goodbye Hartmann trial: a prospective, international, multicenter, observational study on the current use of a surgical procedure developed a century ago

Background: Literature suggests colonic resection and primary anastomosis (RPA) instead of Hartmann's procedure (HP) for the treatment of left-sided colonic emergencies. We aim to evaluate the surgical options globally used to treat patients with acute left-sided colonic emergencies and the factors that leading to the choice of treatment, comparing HP and RPA. Methods: This is a prospective, international, multicenter, observational study registered on ClinicalTrials.gov. A total 1215 patients with left-sided colonic emergencies who required surgery were included from 204 centers during the period of March 1, 2020, to May 31, 2020. with a 1-year follow-up. Results: 564 patients (43.1%) were females. The mean age was 65.9 ± 15.6 years. HP was performed in 697 (57.3%) patients and RPA in 384 (31.6%) cases. Complicated acute diverticulitis was the most common cause of left-sided colonic emergencies (40.2%), followed by colorectal malignancy (36.6%). Severe complications (Clavien-Dindo ≥ 3b) were higher in the HP group (P < 0.001). 30-day mortality was higher in HP patients (13.7%), especially in case of bowel perforation and diffused peritonitis. 1-year follow-up showed no differences on ostomy reversal rate between HP and RPA. (P = 0.127). A backward likelihood logistic regression model showed that RPA was preferred in younger patients, having low ASA score (≤ 3), in case of large bowel obstruction, absence of colonic ischemia, longer time from admission to surgery, operating early at the day working hours, by a surgeon who performed more than 50 colorectal resections. Conclusions: After 100 years since the first Hartmann's procedure, HP remains the most common treatment for left-sided colorectal emergencies. Treatment's choice depends on patient characteristics, the time of surgery and the experience of the surgeon. RPA should be considered as the gold standard for surgery, with HP being an exception

Impact of COVID-19 on cardiovascular testing in the United States versus the rest of the world

Objectives: This study sought to quantify and compare the decline in volumes of cardiovascular procedures between the United States and non-US institutions during the early phase of the coronavirus disease-2019 (COVID-19) pandemic. Background: The COVID-19 pandemic has disrupted the care of many non-COVID-19 illnesses. Reductions in diagnostic cardiovascular testing around the world have led to concerns over the implications of reduced testing for cardiovascular disease (CVD) morbidity and mortality. Methods: Data were submitted to the INCAPS-COVID (International Atomic Energy Agency Non-Invasive Cardiology Protocols Study of COVID-19), a multinational registry comprising 909 institutions in 108 countries (including 155 facilities in 40 U.S. states), assessing the impact of the COVID-19 pandemic on volumes of diagnostic cardiovascular procedures. Data were obtained for April 2020 and compared with volumes of baseline procedures from March 2019. We compared laboratory characteristics, practices, and procedure volumes between U.S. and non-U.S. facilities and between U.S. geographic regions and identified factors associated with volume reduction in the United States. Results: Reductions in the volumes of procedures in the United States were similar to those in non-U.S. facilities (68% vs. 63%, respectively; p = 0.237), although U.S. facilities reported greater reductions in invasive coronary angiography (69% vs. 53%, respectively; p < 0.001). Significantly more U.S. facilities reported increased use of telehealth and patient screening measures than non-U.S. facilities, such as temperature checks, symptom screenings, and COVID-19 testing. Reductions in volumes of procedures differed between U.S. regions, with larger declines observed in the Northeast (76%) and Midwest (74%) than in the South (62%) and West (44%). Prevalence of COVID-19, staff redeployments, outpatient centers, and urban centers were associated with greater reductions in volume in U.S. facilities in a multivariable analysis. Conclusions: We observed marked reductions in U.S. cardiovascular testing in the early phase of the pandemic and significant variability between U.S. regions. The association between reductions of volumes and COVID-19 prevalence in the United States highlighted the need for proactive efforts to maintain access to cardiovascular testing in areas most affected by outbreaks of COVID-19 infection