Nbd2 is required for the rescue of mutant f508del cftr by a thiazole-based molecule: A class ii corrector for the multi-drug therapy of cystic fibrosis

Cystic fibrosis (CF) is caused by loss-of-function mutations in the CF transmembrane conductance regulator (CFTR) protein, an anion channel that regulates epithelial surface fluid secretion. The deletion of phenylalanine at position 508 (F508del) is the most common CFTR mutation. F508del CFTR is characterized by folding and trafficking defects, resulting in decreased functional expression of the protein on the plasma membrane. Several classes of small molecules, named correctors, have been developed to rescue defective F508del CFTR. Although individual correctors failed to improve the clinical status of CF patients carrying the F508del mutation, better results were obtained using correctors combinations. These results were obtained according to the premise that the administration of correctors having different sites of action should enhance F508del CFTR rescue. We investigated the putative site of action of an aminoarylthiazole 4-(3-chlorophenyl)-N-(3-(methylthio)phenyl)thiazol-2-amine, named FCG, with proven CFTR corrector activity, and its synergistic effect with the corrector VX809. We found that neither the total expression nor the maturation of WT CFTR transiently expressed in human embryonic kidney 293 cells was influenced by FCG, administrated alone or in combination with VX809. On the contrary, FCG was able to enhance F508del CFTR total expression, and its combination with VX809 provided a further effect, being able to increase not only the total expression but also the maturation of the mutant protein. Analyses on different CFTR domains and groups of domains, heterologously expressed in HEK293 cells, show that NBD2 is necessary for FCG corrector activity. Molecular modelling analyses suggest that FCG interacts with a putative region located into the NBD2, ascribing this molecule to class II correctors. Our study indicates that the continuous development and testing of combinations of correctors targeting different structural and functional defects of mutant CFTR is the best strategy to ensure a valuable therapeutic perspective to a larger cohort of CF patients

Analisi di due isolati della Sardegna (Italia) attraverso lo studio dei polimorfismi del cromosoma Y

Nel presente lavoro sono stati analizzati due isolati della Sardegna (Italia): l’isolato linguistico di Carloforte e l’isolato geografico di Benetutti attraverso gli YSTRs e gli aplogruppi derivati, con lo scopo di valutare il grado di isolamento e le diverse influenze delle barriere geografiche e culturali sull’isolamento e la struttura genetica. Gli individui campionati sono stati selezionati con il metodo dei cognomi fondatori. Sono stati selezionati anche due campioni di confronto provenienti dalle aree geografiche più vicine agli isolati studiati. Il DNA è stato estratto da sangue periferico o tampone buccale e amplificato mediante il kit AmpFISTR Yfiler con il ciclatore termico Geneamp®PCR System 9700. La separazione e l’individualizzazione dei prodotti della PCR multiplex sono state realizzate con il sistema ABI Prism 3100 Genetic Analyzer. L’analisi dei dati è stata infine realizzata con GeneScan v. 3.1. Gli aplogruppi sono stati stimati mediante Haplogroup predictor. Attraverso l’analisi dei 17 Y-STRs entrambi gli isolati appaiono significativamente differenziati dalle aree circostanti. L’analisi degli aplogruppi rivela una distribuzione caratteristica: la popolazione di Carloforte è caratterizzata dalla bassissima frequenza dell’aplogruppo I2a1. Questo aplogruppo è identificato dalla mutazione M26, caratteristica della Sardegna, e quasi assente nel resto d’Italia. Il confronto con altre popolazioni italiane, realizzato con l’albero Neighbor joining, ha confermato la peculiarità genetica della Sardegna. Carloforte, nonostante sia in una branca separata, si trova nello stesso cluster delle popolazioni italiane, mentre Benetutti, sempre in un ramo separato, si colloca più vicina alle popolazioni sard