COS cell expression studies of P86L, P86R, P480L and P480Q Hunter's disease-causing mutations

AbstractThree missense mutations identified in the IDS gene of our Hunter's disease patients (P86L, P480L and P480Q) and the previously described P86R mutation were expressed in COS cells to evaluate their functional consequence on iduronate-2-sulfatase (IDS) activity and processing. The 86-proline residue belongs to the highly conserved pentapeptide C-X-P-S-R in which cysteine modification to a formylglycine is required for sulfatase activity. The substitution of the 86-proline residue led to a severe mutation as no mature form was targeted to the lysosome in agreement with the severe phenotype observed in patients carrying P86L and P86R mutations. Expression studies with P480L and P480Q mutant cDNAs showed the presence of a small amount of 55 kDa mature form in the lysosomes of transfected COS cells. IDS activity of the P480L and P480Q mutants in cell extracts represents 16.6% and 5.4% of the wild-type, respectively

Towards the convergent therapeutic potential of GPCRs in autism spectrum disorders

Changes in genetic and/or environmental factors to developing neural circuits and subsequent synaptic functions are known to be a causative underlying the varied socio-emotional behavioural patterns associated with autism spectrum disorders (ASD). Seven transmembrane G protein-coupled receptors (GPCRs) comprising the largest family of cell-surface receptors, mediate the transfer of extracellular signals to downstream cellular responses. Disruption of GPCR and their signalling have been implicated as a convergent pathologic mechanism of ASD. Here, we aim to review the literature about the 23 GPCRs that are genetically associated to ASD pathology according to Simons Foundation Autism Research Initiative (SFARI) database such as oxytocin (OXTR) and vasopressin (V1A, V1B) receptors, metabotropic glutamate (mGlu5, mGlu7) and gamma-aminobutyric acid (GABAB) receptors, dopamine (D1, D2), serotoninergic (5-HT1B and additionally included the 5-HT2A, 5-HT7 receptors for their strong relevance to ASD), adrenergic ($\beta$2) and cholinergic (M3) receptors, adenosine (A2A, A3) receptors, angiotensin (AT2) receptors, cannabinoid (CB1) receptors, chemokine (CX3CR1) receptors, orphan (GPR37, GPR85) and olfactory (OR1C1, OR2M4, OR2T10, OR52M1) receptors. We discussed the genetic variants, relation to core ASD behavioural deficits and update on pharmacological compounds targeting these 23 GPCRs. Of these OTR, V1A, mGlu5, D2, 5-HT2A, CB1, and GPR37 serve as the best therapeutic targets and have potential towards core domains of ASD pathology. With a functional crosstalk between different GPCRs and converging pharmacological responses, there is an urge to develop novel therapeutic strategies based on multiple GPCRs to reduce the socioeconomic burden associated with ASD and we strongly emphasize the need to prioritize the increased clinical trials targeting the multiple GPCRs

Surexpression du récepteur de la lutropine. Réassociation fonctionnelle de ses deux domaines

* laboratoire de biologie cellulaire. INRA, centre de Jouy en Josas Diffusion du document : laboratoire de biologie cellulaire. INRA, centre de Jouy en Josas Diplôme : Dr. d'Universit

: Sciences de la vie

Les travaux de recherche décrits dans ce rapport portent d’une part sur la production du récepteur de la lutropine (LH) et de ses deux domaines par voie recombinante et d’autre part sur l’étude des caractéristiques fonctionnelles, pharmacologiques et immunologiques du récepteurs 5-HT4 cardiaque. La première partie concerne l'identification des relations structure-fonction du récepteur gonadotrope de LH, afin d'améliorer les traitements modulateurs de la fertilité en particulier chez le porcelet. Pour réaliser des études biologiques et physico-chimiques, des quantités abondantes de protéines sont nécessaires. J’ai donc établi et optimisé les conditions de production de ce récepteur et de ses deux domaines (ecto- et endodomaine) par voie recombinante à l’aide du système baculovirus-cellule d’insecte. Pour la première fois, j’ai obtenu la sécrétion du domaine N-terminal extracellulaire (ectodomaine) du récepteur de LH sous forme active. De plus, j’ai pu surexprimé ce récepteur à la surface des cellules grâce à une réassociation fonctionnelle de ses domaines N-terminal extracellulaire (ectodomaine) et C-terminal membranaire et cytoplasmique (endodomaine). Par ailleurs, je me suis également intéressée à la cartographie immunopeptidique de ce récepteur et aux mécanismes d’internalisation de la LH. Cette hormone emprunterait deux voies différentes d'internalisation, le récepteur de LH et une autre voie impliquant probablement une lectine de plus faible affinité mais exprimée plus abondamment. Enfin, l’ensemble de ces travaux nous a conduit à développer une méthode immnunocontraceptive à l’aide de séquences peptidiques de l’ectodomaine du récepteur de LH. Les premiers résultats obtenus étaient prometteurs. Dans la deuxième partie de ce mémoire, je cherche à comprendre le rôle du récepteur humain cardiaque à la sérotonine de type 4, 5-HT4, dans la fibrillation auriculaire idiopathique. Une origine autoimmune est proposée pour ce genre d’arythmie. Le récepteur h5-HT4 serait alors la cible d’auto-anticorps fonctionnels. Pour mieux comprendre cette modulation, j’étudie les caractéristiques fonctionnelles, pharmacologiques et immunologiques du récepteurs 5-HT4 cardiaque à la fois dans des systèmes d’expression hétérologues (cellules COS, CHO) et dans les cellules cardiaques d’oreillettes humaines et porcines. J’ai montré que l’activité fonctionnelle de ce récepteur pouvait être modulée par un anticorps anti-peptidique dirigé contre la seconde boucle extracellulaire de ce récepteur, l’anti-G21V. De plus, cet anticorps est capable d’induire des effets fonctionnels variés, « agoniste-like », « agoniste inverse like » ou sans effet visible. Ces comportements sembleraient dépendre de l’environnement membranaire et/ou cellulaire, et de l'équilibre R/R* du récepteur h5-HT4 cardiaque. J’ai également validé notre hypothèse de départ en identifiant des auto-anticorps dirigés contre le récepteur h5-HT4 dans le sérum de patients atteints de FA idiopathique. La fonctionnalité de ce récepteur pourrait être modulée par la présence de ces auto-anticorps. Une composante auto-immune pourrait donc être impliquée dans ce type d’arythmie. Par ailleurs, il est particulièrement surprenant de constater que seule la 5-HT provoque des arythmies auriculaires, alors que ses effets cardiaques et le taux d'expression de son récepteur sont inférieurs à ceux des catécholamines. Les caractéristiques fonctionnelles des récepteurs 5-HT4 et -adrénergiques exprimés dans les cellules atriales humaines ont donc été comparées. Bien que la sérotonine induise une production d'AMPc intracellulaire plus faible que les catécholamines, elle est capable d'activer de façon maximale le courant ICa2+L avec des concentrations identiques à celles de l'isoprotérénol. De plus, les effets de la sérotonine peuvent être amplifiés par le tonus sympathique. L’ensemble des données obtenues ont permis de proposer une localisation des récepteurs 5 HT4 au sein de microdomaines de régulation et de suggérer leur implication dans la FA. L'étude des cellules cardiaques humaines pose de nombreux problèmes : faible nombre de prélèvements disponibles et tissus provenant de patients atteints de cardiomyopathies traités parfois depuis de nombreuses années avec des médicaments. Afin d'établir les caractéristiques fonctionnelles du récepteur h5-HT4 dans des conditions non pathologiques, il est nécessaire d'obtenir des tissus atriaux sains. Nous avons donc choisi d'étudier ce récepteur sur des cellules atriales isolées de porc fermier, espèce animale unique à part l'homme exprimant le récepteur 5 HT4 au niveau cardiaque. Les travaux sont actuellement en cours. En plus de mes propres travaux, je collabore à des projets de recherche développés au sein des autres axes de l'unité : 1) « Effets fonctionnels d'anticorps antipeptidiques dirigés contre la seconde boucle extracellulaire du récepteur muscarinique cardiaque de type M2 » ; 2) Sélection de souris transgéniques. Deux axes de recherche de l’unité utilisent comme modèle d’étude des souris transgéniques : des souris reproduisant la trisomie 21 et des souris surexprimant le récepteur cardiaque bêta-2-adrénergique

Sexualité, relations et prévention chez les homosexuels masculins : un nouveau rapport au risque

Cet ouvrage fait suite à une journée d'études "prévention du VIH/sida chez les homosexuels masculins. Nouveaux enjeux, nouvelles recherches, nouvelles actions" organisée par l'ANRS à Paris le 6 octobre 2005. Il a pour objectif d'approfondir les connaissances sur les prises de risques sexuels des homosexuels masculins en France, sur le fonctionnement de leurs relations, aussi bien les relations stables que les relations sans lendemain, ainsi que sur les pratiques individuelles et informelles de protection qui se mettent en place sans référence au safer sex. Il s'articule en trois parties. La première fournit des données épidémiologiques sur l'infection à VIH et les IST (Infection Sexuellement Transmissible) dans la population homosexuelle masculine française. Elle analyse, d'une part, à partir des résultats de l'enquête Presse gay 2004, les relations stables et les comportements sexuels à risque ; d'autre part, à partir des résultats de l'enquête ANRS-EN12-VESPA, les comportements à risque sexuel chez les homosexuels séropositifs. La deuxième partie aborde la conjugalité et les relations stables chez les gays et souligne les prises de risque tacites. La dernière évoque le bareback et les nouveaux espaces de socialisation homosexuelle autour d'internet

Régulation fonctionnelle des récepteurs à la mélatonine

National audienc

Caractéristiques fonctionnelles, pharmacologiques et immunochimiques du récepteur 5-HT4 cardiaque chez l'enfant (étude comparative avec le récepteur 5-HT4 adulte)

5-HT4 receptor (5-HT4R) is associated with arrhythmies in particular atrial fibrillation. Prevalence of this pathology increases with age and becomes common after 50 years old. Infants are not affected. This absence could be correlated with a different density or functionality of this receptor between infants and adults. In a first part we defined properties of 5-HT4R in infant. These results were then compared with those obtained in adult cardiomyocytes. In a second part of our project, we have repeated the functional characterization of 5-HT4R in a young and healthy animal model: the piglet. Finally, we have studied the ultrastructure of infant and adult atrial cardiomyocytes. In conclusion, all of these results indicate that cardiac h5-HT4 receptor undergoes a postnatal maturation which could explain the different functionality of this receptor between infant and adult.Le récepteur 5-HT4 (5-HT4R) est associé aux arythmies auriculaires et plus particulièrement à la fibrillation atriale. La prévalence de cette pathologie augmente avec l âge des individus et devient majeure après 50 ans. Les enfants quant à eux ne semblent pas être atteints. Cette absence pourrait être corrélée à une différence de fonctionnalité de ce récepteur entre les enfants et les adultes. Dans la première partie de notre travail nous avons défini les propriétés du 5-HT4R chez l'enfant. Les données ont ensuite été comparées avec celles obtenues chez l'adulte. Dans une seconde partie, nous avons réitéré l'analyse fonctionnelle du 5 HT4R dans un model animal jeune et sain : le porcelet. Enfin, nous avons étudié l ultrastructure des cardiomyocytes atriaux d'enfant et d'adulte. En conclusion l ensemble de nos résultats indique que le 5-HT4R cardiaque subit un processus de maturation post-natale à l origine d une différence de fonctionnalité entre l enfant et l adulte.TOURS-BU Sciences Pharmacie (372612104) / SudocSudocFranceF

Endocytosis of lutropin by Leydig cells through a pathway distintc from the high-affinity receptor

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Antagonist-like activity of antibodies against the cardiac h5-HT4 receptor

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