Detección inmunohistoquímica de la proteína L1 de Virus Papiloma Humano (HPV) de alto riesgo en citologías y biopsias de cuello uterino

Para confirmar la detección inmunohistoquímica de la proteína L1 de HPV de alto riesgo, tanto en citologías con anormalidades en células epiteliales como en biopsias con diagnóstico de carcinoma epidermoide cervical, se seleccionaron aleatoriamente: 11 citologías cervicales del año 2004 con interpretación citológica de anormalidades en células escamosas incluyendo: células escamosas atípicas y lesión intraepitelial escamosa de bajo y alto grado y 50 biopsias de cérvix con carcinoma epidermoide diagnosticados entre los años 1950 y 1980. Todas las muestras, tanto citológicas como histológicas fueron sometidas al procedimiento inmunohistoquímico para la detección de la proteína L1 de HPV de alto riesgo, con anticuerpo de alto riesgo VAHP. El 64% de las muestras citológicas fueron satisfactorias para la evaluación, mientras que 4/11 presentaban inflamación moderada o intensa. El 27% citologías cervicales con cuadro citológico sugestivo de 2 lesión de bajo grado (67%) y 1 lesión de alto grado (33%), mostraron coilocitos con núcleos positivos para L1 de HPV de alto riesgo. Todas las muestras citológicas con atipias fueron negativas para la inmunotinción, así como los 50 casos de carcinoma epidermoide. La detección de la proteína L1 de HPV de alto riesgo en las citologías estudiadas fue baja. Estos resultados sugieren que la inmunodetección de la proteína L1 de HPV de alto riesgo es reducida en las lesiones cervicales severas.This study was designed to confirm the immunohistochemical detection of the high risk HPV-L1 protein in abnormal epithelial cells observed in cytologies and also in squamous cells carcinomas diagnosed in biopsies. The samples were selected randomly: 11 cervical cytologies of the year 2004 with a cytological interpretation of abnormalities in squamous cells including: atypical squamous cells and in low and high-grade squamous intraepithelial lesions; and 50 cervical biopsies with squamous cells carcinomas diagnosed during the years 1950 and 1980. All the samples, cytological and histological, were subjected to an immunohistochemical procedure in order to detect the high risk HPV-L1 protein, with the antibody VAHP. 64% of the cytological samples were satisfactory for evaluation, while 4/11 presented moderate to intense inflammation. 27% of the cervical cytologies with a suggestive cytologic interpretation of low-grade (67%) and high-grade intraepithelial lesion (33%), showed koilocytes with positive nuclei for the high risk HPV-L1 protein. All the cytologic samples with atipia were negative to the immunostain, as well as the 50 cervical squamous cells carcinomas. The high risk HPV-L1 protein detection in the studied cases was low. These results suggest that the immunodetection of the high risk HPV-L1 protein is reduced in the severe cervical lesions.Llombart Bosch, Antonio, [email protected]

Tissue microarrays analysis in chondrosarcomas: light microscopy, immunohistochemistry and xenograft study

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Chondrosarcoma (Chs) is the third most frequent primary malignant tumour of bone and can be primary or secondary, the latter results mainly from the malignant transformation of a benign pre-existing tumour.</p> <p>Methods</p> <p>All the cases diagnosed as Chs (primary tumours, recurrences and/or metastasis and xenotransplanted Chs) from the files of our Department were collected. Only cases with paraffin blocks available were selected (Total 32 cases). Six Tissue Microarrays (TMAs) were performed and all the cases and biopsies were distributed into the following groups: a) only paraffin block available from primary and/or metastatic tumours (3 TMAs), b) paraffin block available from primary and/or metastatic tumours as well as from the corresponding Nude mice xenotransplant (2 TMAs), c) only paraffin block available from xenotransplanted Chs (1 TMA). A reclassification of all the cases was performed; in addition, conventional hematoxylin-eosin as well as immunohistochemistry staining (S100, SOX-9, Ki-67, BCL-2, p53, p16, CK, CD99, Survivin and Caveolin) was analyzed in all the TMA.</p> <p>Results</p> <p>The distribution of the cases according to the histopathological pattern and the location of tumours were as follows: fourteen Grade I Chs (all primaries), two primary Grade II Chs, ten Grade III Chs (all primaries), five dedifferentiated Chs (four primaries and one primary with metastasis), and two Chs from cell cultures (Ch grade III). One recurrent extraskeletal myxoid Chs was included as a control in the TMA. Although there was heterogeneity in immunohistochemistry results of the different material analyzed, S100, SOX-9, Caveolin and Survivin were more expressed. The number of passages in xenotransplants fluctuated between 1 and 13. Curiously, in Grade I Chs, these implanted tumours hardly grew, and the number of passages did not exceed one.</p> <p>Conclusion</p> <p>The study of Chs by means of TMA techniques is very important because it will improve the assessment of different antibodies applied in the immunohistochemical assays. Xenotransplanted tumours in TMA improve knowledge concerning the variability in the morphological pattern shown by these tumours during the evolution in nudes.</p

Carcinoma apocrino mamario. Análisis morfológico e nmunohistoquímico en sus formas infiltrantes puras y mixtas asociadas o no a carcinoma in situ /Apocrine breast carcinoma. Morphologic and inmunohistochemical analysis of invasive pure and mix forms asoc

Resumen Objetivo: Caracecterizar morfológica e inmunohitoquimicamente el carcinoma apocrino mamamario. Materiales y métodos: Este estudio toma 24 casos diagnosticados como carcinomas apocrinos o con rasgos apocrinos, clasificándolos como puros y mixtos, reconociendo la presencia de componentes in situ asociados, para evaluar la expresión inmunohistoquími- ca del receptor de andrógenos (AR), receptor de estrógenos (ER), receptor de progesterona (PR), gross cistyc disease proteína (GCDFP-15), BCL2,KI67 y ERB-2 tanto en las áreas infiltrantes como intraepiteliales, estudiando adicionalmente la amplificación génica del ERB-2 en el cromosoma 17 por métodos de FISH. Resultados: Los tumores clasificados como puros correspondieron a 11 casos que expre- san la siguiente positividad inmunohistoquímica en las áreas infiltrativas: AR (100%), ER (18%), PR (18%), GCDFP (63%), BCL2 (54%), KI67 (28%) y ERB-2(28%) con una positividad de GCDFP-15(100%) en la áreas in situ. Los tumores mixtos correspon- dientes a 13 casos mostraron la siguiente positividad inmunohistoquímica: AR (58%), ER (46%), PR (46%), GCDFP-15 (50%), BCL2 (33%), KI67 (58%) y ERB-2(16%), con una positividad de GCDFP-15 (100%) en las áreas in situ. Las áreas in situ expresan GCDFP-15 en todos los casos con una reducción de la expresión en las zonas de infiltra- ción del mismo al 63 y 50% en los tumores puros y mixtos, respectivamente. Conclusiones: Los carcinomas mamarios apocrinos puros deben ser distinguidos de los mixtos mediante un examen morfológico detallado y por su perfil inmunohistoquímico (AR+, ER-, PR-/GCDFP+, BCL2+/, KI67-, ERB2/-). Palabras clave: Carcinoma apocrino mamario, inmunohistoquímica, receptor de andrógenos. Abstract Objetive: To recognize the morphologic and inmunohistochemical aspects of cases of apocrine mamary carcinomas. Matherials and methods: Twenty four cases of apocrine mamary carcinomas and ductal mamary carcinomas with apocrine diferetiation (mix apocine carcinomas) were studied mor- phologically and inmunohistochemically detected androgen receptor (AR), progesterone recep- tor (PR), gross cystic disease protein-15(GCDFP-15), BCL2, KI67 and CERB-2 in infiltrative and in situ areas of the same tumor and adicionally demonstrated the gene amplificacion of ERB-2 in the 17 cromosome by FISH analysis. Results: Eleven cases of pure apocrine carcinomas were encountered, inmunohistochemically positivity was as follows: AR (100%), ER (18%), PR (18%), GCDFP(63%)BCL2 (54%), KI67 (28%), and ERB-2(28%) with positivity of GCDFP-15(100%) over in situ areas; the rest 13 cases of mix apocrine carcinomas expresed positivity as follows: AR (58%), ER(46% ), PR(46% ), GCDFP-15(50%), BCL-2(33%), KI67(58%) and ERB-2(16%). In situ areas ex- presed of GCDFP-15 in all cases (100%) with a reduccion of the expression in the infiltrating areas of the same case to 63% and 50% of pure and mix tumors respectivilly. Conclution: Pure apocrine carcinoma most be distinguied of the mix apocrine forms of ductal and lobular carcinomas by a gently morfologic analysis of the tumor and the following combi- nation would allow for and immunohistochemical identification: AR+, ER-, PR. Keywords: Apocrine breast carcinoma, inmunohistochemical; androgen receptor

Evaluación de la calidad de los diagnósticos premortem de causas de muerte en las autopsias del Hospital Clínico Universitario de Valencia (1985-1992)

Se estudiaron 998 autopsias realizadas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital Clínico Universitario de Valencia entre 1985 y 1992, introducidas y procesadas en el Sistema Automatizado de Registro y Control de Anatomía Patológica (SARCAP) en el Hospital «Hermanos Ameijeiras» de La Habana, Cuba. Los principales resultados fueron: predominio del sexo masculino y las edades avanzadas; las principales causas básicas de muerte fueron los tumores malignos, la ateromatosis coronaria, la cirrosis hepática y el SIDA, y las principales causas directas de muerte fueron la bronconeumonía, la extensión del cáncer y el tromboembolismo pulmonar. Hubo 10,6% de discrepancias diagnósticas premortem y postmortem en la Causa Básica de Muerte (CBM) y 30,7% en la Causa Directa de Muerte (CDM). Se destaca la importancia del estudio multicausal de la muerte y la utilidad del SARCAP para la creación de una base de datos de todas autopsias realizadas en el Hospital Universitario de Valencia y que forme parte de una base de datos de todas las autopsias Iberoamericana.998 necropsies carried out in the Department of Pathology of the University Hospital of Valencia between 1985 and 1992 were evaluated and the data obtained was analyzed by the Pathology Registry and Automated Control System (PRACS) at the «Hermanos Ameijeiras» Hospital in La Habana (Cuba). The results showed a predominance of elderly males and that the principal, basic causes of death (BCD) were malignant tumours, coronary atheromatosis, hepatic cirrhosis and AIDS. The major direct causes of death (DCD) were broncopneumonia, tumour progression and thromboembolism in the lung. A 10.6% discrepancy was found between the pre- and post-mortem results of BCD and a 30.7% discrepancy in the results of DCD. It was concluded that a multicausal study of death is important and that the PRACS is a useful tool for creating a common database of all the necropsies performed in the University Hospital of Valencia within an Iberoamerican network.Llombart Bosch, Antonio, [email protected] ; Ferrandez Izquierdo, Antonio, [email protected]

Sarcoma de estroma endometrial. Estudio clinicopatológico e inmunofenotípico de 5 casos

Introducción: El sarcoma de estroma endometrial uterino es un tumor muy poco frecuente con una incidencia de 0,4 -3,4 por 100.000 mujeres, comprende menos del 1% de tumores malignos ginecológicos y el 2-5% de tumores malignos uterinos, siendo el tercer sarcoma en frecuencia después del carcinosarcoma y el leiomiosarcoma. Material y métodos: Presentamos cinco casos de sarcoma de estroma endometrial diagnosticados en un periodo de siete años con la evolución clínica de las pacientes. Resultados: Immunohistoquímicamente, estos tumores expresaban vimentina, receptores hormonales, CD10 y p53 (sarcomas de alto grado), siendo los marcadores musculares, la CK, el c-kit y ALK negativos. De estos cinco sarcomas dos de ellos eran de alto grado y tres de bajo grado (uno con diferenciación miogénica y otro combinado con áreas tipo «cordones sexuales», áreas miogénicas y áreas estromales puras). Discusión: Asimismo se plantean una serie de diagnósticos diferenciales con metodología práctica para poder caracterizar estos tumores.Introduction: Endometrial stromal sarcoma (ESS) is an infrequent neoplasm with an incidence of 0,4-3,4 cases/100.000 woman. This tumor represents less than 1% of the gynecologic malignancies as well as the 2,5% of the uterine malignant tumors being the third malignancy after carcinosarcoma and leiomyosarcoma. Patients and methods: We present five cases of endometrial sarcoma, diagnosed in a period of seven years. This study includes a complete immunohistochemical analysis as well as the follow-up of the patients. Results: Immunohistochemically, these tumors expressed vimentin, hormone receptors, CD10 and p53 (high grade sarcomas), whereas muscle markers, CK, c-Kit and ALK resulted negative. Two of the ESS were high grade tumors whereas the other three were considered low grade tumors (one with myogenic differentiation and the other combining sex cord areas, myogenic foci and pure stromal areas). Discussion: We discuss their differential diagnosis with other uterine malignant tumors.Martinez Rodriguez, Miguel, [email protected] ; Llombart Bosch, Antonio, [email protected] ; Navarro Fos, Samuel, [email protected]

Patología de los tumores neuroblásticos: evaluación pronóstica. Experiencia del centro español de referencia de la SEOP para estudios biopatológicos del neuroblastoma (1992-2005)

Antecedentes: Los tumores neuroblásticos son los tumores sólidos extracraneales más frecuentes en la infancia y se caracterizan por una evolución clínica heterogénea que va desde una progresión rápida a una regresión tumoral espontánea. Existen factores pronósticos conocidos que determinan dicha evolución como son la edad, estadiaje, histopatología, estatus de MYCN, ploidía y diversas ganancias y pérdidas cromosómicas. El objetivo del trabajo es describir nuestra experiencia como laboratorio de referencia español para la determinación de estos parámetros pronósticos. Métodos: Material tumoral de pacientes con neuroblastoma, remitido a nuestro laboratorio desde 1992 hasta 2005, ha sido sometido a estudio histopatológico, molecular para determinar la amplificación de MYCN, histoquímico y morfométrico para estudiar la ploidía y se ha introducido la técnica de CGH para el análisis de ganancias y perdidas cromosómicas. Resultados: El seguimiento clínico durante estos años, ha demostrado la importancia pronóstica de la clasificación histológica Internacional Neuroblastoma Pathology Classification (INPC), la relación de un contenido diploide-tetraploide de ADN con el histopronóstico desfavorable, la proporción del 20% de casos con amplificación de MYCN y su carácter pronostico desfavorable, así como la presencia de ganancias y pérdidas cromosómicas como 11q- que confieren mal pronóstico. Conclusiones: Se confirma la necesidad de determinar parámetros morfológicos y genéticos de valor pronóstico con el fin de estratificar la terapéutica apropiada de elección en los pacientes con neuroblastoma.Background: Neuroblastic tumors are the most frequent extracranial solid tumors in childhood, and are characterized by a heterogeneous clinic behavior, ranging from a rapid progression of disease to a spontaneous regression. Prognostic indicators that condition such behavior, such as age, staging, histopathology, MYCN oncogene status, ploidy, and diverse chromosomal losses and gains, have been demonstrated. The aim of present work is to describe our experience as reference laboratory for the determination of these prognostic factors in neuroblastic tumors. Methods: Tumor material from patients with neuroblastoma, submitted to our laboratory from 1992 to 2005 has been analyzed. Histopathology following Internacional Neuroblastoma Pathology Classification (INPC) classification, PCR and FISH for MYCN status, static cytometry for ploidy and CGH for chromosomal gains and losses, were performed. Results: The clinical follow-up has demonstrated the prognostic value of INPC, the relationship between diploid-tetraploid DNA content and unfavorable histology, the existence of 20% MYCN amplified cases showing an unfavorable prognosis as well as the presence of chromosomal gains and losses especially 11q-, that confer unfavorable prognosis. Conclusions: We confirm the importance of determining morphological and genetic prognostic parameters in neuroblastic tumors in order to stratify the patients to receive the correct therapy accordingly.Navarro Fos, Samuel, [email protected] ; Llombart Bosch, Antonio, [email protected] ; Pellin Perez, Antonio, [email protected] ; Burgues Gasion, Octavio, [email protected]; Ruiz Sauri, Amparo, [email protected]; Piqueras Franco, Marta, [email protected] ; Noguera Salva, Rosa, [email protected]

Improvement of European translational cancer research. Collaboration between comprehensive cancer centers

Even though the increasing incidence of cancer is mainly a consequence of a population with a longer life span, part of this augmentation is related to the increasing prevalence of patients living with a chronic cancer disease. To fight the problem, improved preventive strategies are mandatory in combination with an innovative health care provision that is driven by research. To overcome the weakness of translational research the OECI is proposing a practical approach as part of a strategy foreseen by the EUROCAN+PLUS feasibility study, which was launched by the EC in order to identify mechanisms for the coordination of cancer research in Europe

Expresión inmunohistoquímica de la proteína mycN y el estado del gen MYCN en tumores neuroblásticos

Antecedentes: Los tumores neuroblásticos son de los tumores pediátricos más frecuentes. A pesar de su gran variedad genética, clínica e histopatológica, la amplificación del gen MYCN es siempre un indicador de mal pronóstico. Este oncogen codifica una proteína nuclear que se une al ADN y activa la transcripción de sus genes diana. Un aumento en el número de copias del gen no se corresponde siempre con sobreexpresión de su proteína. El valor pronóstico de la detección de la proteína es controvertido. Métodos: Se han analizado 220 muestras de NB. Mediante la técnica de FISH se ha establecido el estado del gen, mientras que la inmunohistoquímica ha permitido el estudio de la expresión de la proteína en secciones de parafina. Resultados: Los 15 casos con ganancia y 140 de los 141 casos sin amplificación del gen MYCN no expresan la proteína. En el grupo de los 55 casos amplificados, el 76,4% han sido positivos y 23,6% negativos. Conclusiones: Los niveles de expresión génica no siempre corresponden con el número de copias del gen, ya que intervienen muchos mecanismos moleculares. La mayoría de los casos positivos para este anticuerpo presentan amplificación, así que el estudio inmunohistoquímico de su expresión podría utilizarse para aproximar el estado del gen MYCN en aquellos laboratorios de diagnóstico donde las técnicas moleculares no estén disponibles.Introduction: Neuroblastic tumors are one of the most frequent pediatric tumor. Despite their genetic, clinic and histopathologic variety, MYCN gene amplification is always considered as an adverse prognosis factor. MYCN gene encodes a nuclear protein which binds DNA and activates target genes transcription. An increase of gene copies number not always involves a protein overexpression. The prognostic value of the determination of mycN protein is controversial. Materials and methods: 220 NB samples were analyzed. We established the gene status by FISH and we studied the protein expression in paraffin sections by immunohistochemistry. Results: 15 gain samples and 140 from 141 non-amplified samples don’t express MYCN protein. From 55 amplified cases, 76.4% were positive and 23.6% were negative. Conclusions: Gene expression levels do not always match with gene copies number due to different molecular mechanisms. Most of positive cases to mycN protein are amplified samples. This antibody could be used to approach gene status in those laboratories without available molecular techniques.Piqueras Franco, Marta, [email protected] ; Noguera Salva, Rosa, [email protected] ; Cruz Mojarrieta, Julia, [email protected] ; Subramaniam, Manish Mani, [email protected] ; Llombart Bosch, Antonio, [email protected]; Navarro Fos, Samuel, [email protected]