Attività farmacologiche e possibili bersagli molecolari dei Polisaccaridi del Lycium Barbarum (LPB)

Recentemente, l'isolamento e la ricerca di nuove sostanze di origine naturale con attività biologiche ed effetti benefici per la salute hanno attirato molta attenzione. I frutti del Lycium Barbarum , chiamati anche wolfberry o bacche di Goji, sono stati utilizzati in Cina e altri paesi asiatici per più di 2.000 anni sia come integratore alimentare che nella medicina tradizionale in quanto tonico nutriente ed agente anti-invecchiamento. Vari studi hanno identificato, tra i vari componenti delle bacche di Goji, un gruppo di polisaccaridi (LBPs) responsabili di numerose attività farmacologiche, tra cui effetti anti-invecchiamento, antiossidanti, anti-fatica, antitumorali, anti-diabetici, anti-virali, epatoprotettivi, cardioprotettivi, neuroprotettivi, ipolipemizzanti, radioprotettivi, ed immunomodulanti. Lo scopo del presente elaborato è di illustrare le molteplici attività biologiche e i potenziali bersagli molecolari dei polisaccaridi estratti dal frutto del Lycium Barbarum, attraverso riferimenti agli esperimenti farmacologici e agli studi clinici che sono stati condotti

Dalla tavola alla farmacia: proprietà farmacologiche dell' Olea europaea e dell'olio extravergine di oliva

È stato osservato che nelle popolazioni che seguono la dieta mediterranea, che ha come principale fonte di grassi l’ olio extravergine d’oliva, c’è stata una riduzione dell’ incidenza di mortalità cardiovascolare, di malattie neurodegenerative e di alcuni tipi di cancro. Per questo motivo numerose ricerche si sono focalizzate sullo studio dei costituenti chimici dell’olio extravergine d’oliva e dei suoi potenziali effetti farmacologici, nonché su quelli dell’ Olea europaea, per comprendere le ragioni delle proprietà benefiche della dieta mediterranea. È stato dimostrato che i principali componenti dell’ olio extravergine d’oliva e dell’Olea europaea sono i composti fenolici, di cui i principali sono l’oleocantale, l’oleouropeina, il verbascoside e l’idrossitirosolo, e i composti triterpenici, che comprendono l’acido maslinico, l’acido oleanolico, l’uvaolo e l’eritrodiolo. Studi clinici hanno osservato che questi composti hanno importanti attività biologiche, come antiossidanti, antinfiammatori, antitrombotici, antitumorali, cardioprotettivi e antidiabetici. Di particolare interesse è l’effetto neuroprotettivo dell’oleocantale verso patologie neurodegenerative come la malattia di Alzheimer (AD), e l’effetto antinfiammatorio simile all’ibuprofene. In questa tesi sono descritti ampiamente i vari costituenti chimici dell’olio d’oliva e delle foglie dell’Olea europaea, inoltre sono riportati i vari studi clinici riguardo le loro principali attività farmacologiche

Single step chromatographic purification of plasmid DNA from neutralised lysate aiming its application in gene therapy and vaccination

Orientadores: Everson Alves Miranda, Adriano Rodrigues AzzoniDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia QuímicaResumo: O número de estudos em terapia gênica com vetores plasmídiais (pDNA) têm aumentado nestes últimos anos. Como resultado, a demanda para preparações de pDNA em conformidade com as recomendações das agências reguladoras (EMEA, FDA) também aumentou. O DNA plasmidial é frequentemente obtido através da fermentação de Escherichia coli transformada e purificada por uma série de operações unitárias, incluindo a cromatografia. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um processo cromatográfico para a recuperação e purificação do pDNA superenovelado (sc pDNA) a partir do lisado neutralizado. Os ligantes fenil (hidrofóbico) e mercaptopirimidina (tiofílico) foram imobilizados em matrizes de agarose e celulose. A seletividade destes ligantes para com o sc pDNA foi determinada através de estudos de adsorção utilizando citrato de sódio 1,5 mol/L e fosfato de potássio 2,0 mol/L como tampões de adsorção. A cromatografia com o adsorvente fenil-agarose e o citrato de sódio 1,5 mol/L permitiu recuperar 58% do pDNA sem contaminação por gDNA, proteínas e endotoxinas, sendo uma alternativa potencial para a recuperação primária do sc pDNA. O resultado mais promissor foi obtido com a cromatografia com o adsorvente mercaptopirimidina-agarose e fosfato de potássio 2,0 mol/L como tampão de adsorção. Este sistema tampão de adsorção/adsorvente permitiu a obtenção de pDNA com 100% de pureza e dentro das recomendações das agências reguladoras no tocante à contaminação por RNA e endotoxinas. Assim, este trabalho lançou as bases para o desenvolvimento de dois métodos cromatográficos para a recuperação primária ou purificação de pDNA diretamente do lisado neutralizado, ambos potencialmente aplicáveis em larga escalaAbstract: The number of studies in gene therapy with plasmid vectors (pDNA) has witnessed an increase in the recent years. As result the demand for preparations of pDNA in compliance with recommendations of the regulatory agencies (EMEA, FDA) has also increased. Plasmid DNA is oftenly obtained through fermentation of transformed Escherichia coli and purified by a series of unit operations, including chromatography. This work aimed the development of a chromatographic process for the recovery and purification of supercolied pDNA (sc pDNA) directly from neutralized cell lysate. Phenyl (hydrophobic) and mercaptopyrimidine (thiophilic) molecules immobilized in agarose and cellulose matrices were the ligands used to capture the pDNA. Their selectivity towards sc pDNA was evaluated through adsorption studies using sodium citrate 1.5 mol/L and potassium phosphate 2.0 mol/L as the adsorption buffers. The chromatography with the adsorbent phenyl-agarose and sodium citrate 1.5 mol/L was able to recover 58% of sc pDNA without gDNA, proteins and endotoxins contamination, being an potential alternative for the primary recovery of sc pDNA. The most promising result was obtained with the chromatography with mercaptopyrimidine-agarose and potassium phosphate 2.0 mol/L adsorpition buffer. With the latter buffer/adsorbent system it was possible to obtain in a single step pDNA with 100% purity and within the recommendations of regulatory agencies with regard to contamination by RNA and endotoxins. Thus, this work laid the basis for the development of two chromatographic process for the recovery or purification of pDNA directly from the neutralized lysate, both potentially applicable in larger scaleMestradoDesenvolvimento de Processos BiotecnologicosMestre em Engenharia Químic

A construção dialetica no jogo de regras Traverse, em alunos com queixas de dificuldades escolares

Orientador: Rosely Palermo BrenelliDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de EducaçãoMestrad

Single Cell Oil Producing Yeasts Lipomyces Starkeyi And Rhodosporidium Toruloides: Selection Of Extraction Strategies And Biodiesel Property Prediction

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Single cell oils (SCOs) are considered potential raw material for the production of biodiesel. Rhodosporidium sp. and Lipomyces sp. are good candidates for SCO production. Lipid extractability differs according to yeast species and literature on the most suitable method for each oleaginous yeast species is scarce. This work aimed to investigate the efficiency of the most cited strategies for extracting lipids from intact and pretreated cells of Rhodosporidium toruloides and Lipomyces starkeyi. Lipid extractions were conducted using hexane or combinations of chloroform and methanol. The Folch method resulted in the highest lipid yields for both yeasts (42% for R. toruloides and 48% for L. starkeyi). Also, this method eliminates the cell pretreatment step. The Bligh and Dyer method underestimated the lipid content in the tested strains (25% for R. toruloides and 34% for L. starkeyi). Lipid extractability increased after acid pretreatment for the Pedersen, hexane, and Bligh and Dyer methods. For R. toruloides unexpected fatty acid methyl esters (FAME) composition were found for some lipid extraction strategies tested. Therefore, this work provides useful information for analytical and process development aiming at biodiesel production from the SCO of these two yeast species.8650405052Science without Borders Program (Brazil)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Bio4energy (Sweden)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

High concentrations of dried sorghum stalks as a biomass feedstock for single cell oil production by Rhodosporidium toruloides

Environmental crisis and concerns for energy security have made the research for renewable fuels that will substitute the usage of fossil fuels an important priority. Biodiesel is a potential substitute for petroleum, but its feasibility is hindered by the utilization of edible vegetable oil as raw material, which is responsible for a large fraction of the production cost and fosters the food versus fuel competition. Microbial oils are an interesting alternative as they do not compete with food production, and low cost renewable materials could serve as raw materials during cultivation of microorganisms. Sweet sorghum is an excellent candidate as substrate for microbial oil production, as it possesses high photosynthetic activity yielding high amounts of soluble and insoluble carbohydrates, and does not require high fertilization and irrigation rates8FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESPsem informaçã

Expressão gênica em grãos de café submetidos a diferentes tratamentos pós-colheita-uma análise preliminar.

O conhecimento sobre como os tipos de processamento pós-colheita interferem na qualidade final de bebida é essencial para que cafés com qualidades especiais possam ser desenvolvidos. Dentre as características que podem ser diretamente influenciadas pelo processamento, a composição química do grão é a de maior interesse. Fatores como a regulação da expressão de genes e a atividade de enzimas específicas são determinantes para esta composição. Neste contexto, o objetivo deste estudo preliminar foi avaliar como os processamentos por via seca e úmida afetam o padrão de expressão dos genes isocitrato liase (ICL), ?-mananase (MAN) e ?-galactosidase (GAL). Frutos cereja foram submetidos a condições de secagem natural, despolpamento e desmucilamento. A expressão dos genes foi quantificada pela metodologia de RT-PCR em tempo real. A análise comparativa da expressão dos 3 genes indicou que no processamento via seca a expressão de ICL e MAN nas sementes foi maior do que em sementes de frutos processados por via úmida. Para o gene GAL, não foram observadas diferenças expressivas no perfil de expressão em sementes dos frutos submetidos aos diferentes tratamentos. Esses resultados diferiram dos obtidos em outros estudos já descritos na literatura, em que, apesar de ter sido avaliada a expressão de genes, foram utilizadas etapas de processamento distintas das utilizadas neste trabalho. Esses resultados revelaram, portanto, que há necessidade de se padronizarem os processamentos experimentais em pesquisas visando avaliar efeitos dos tratamentos pós-colheita sobre a qualidade do café

C/N ratio and carbon source-dependent lipid production profiling in Rhodotorula toruloides

Microbial oils are lipids produced by oleaginous microorganisms, which can be used as a potential feedstock for oleochemical production. The oleaginous yeast Rhodotorula toruloides can co-produce microbial oils and high-value compounds from low-cost substrates, such as xylose and acetic acid (from hemicellulosic hydrolysates) and raw glycerol (a byproduct of biodiesel production). One step towards economic viability is identifying the best conditions for lipid production, primarily the most suitable carbon-to-nitrogen ratio (C/N). Here, we aimed to identify the best conditions and cultivation mode for lipid production by R. toruloides using various low-cost substrates and a range of C/N ratios (60, 80, 100, and 120). Turbidostat mode was used to achieve a steady state at the maximal specific growth rate and to avoid continuously changing environmental conditions (i.e., C/N ratio) that inherently occur in batch mode. Regardless of the carbon source, higher C/N ratios increased lipid yields (up to 60% on xylose at a C/N of 120) but decreased the specific growth rate. Growth on glycerol resulted in the highest specific growth and lipid production (0.085\ua0g lipids/gDW*h) rates at C/Ns between 60 and 100. We went on to study lipid production using glycerol in both batch and fed-batch modes, which resulted in lower specific lipid production rates compared with turbisdostat, however, fed batch is superior in terms of biomass production and lipid titers. By combining the data we obtained in these experiments with a genome-scale metabolic model of R. toruloides, we identified targets for improvements in lipid production that could be carried out either by metabolic engineering or process optimization

Expressão de genes relacionados ao metabolismo de nitrogênio, fósforo de potássio em cafeeiros submetidos ao estresse biótico.

As plantas freqüentemente são ameaçadas por agentes externos que podem ser fatores bióticos e/ou abióticos. Para cada tipo de ameaça há um requintado tipo de resposta que caracteriza o processo de defesa. Dentre os processos de defesa enquadram-se a ativação ou repressão de genes relacionados como quitinases, glucanaes, lipoxigenases, transferases, entre outros. Quaisquer modificações bioquímicas que ocorram durante os ataques dos patógenos são indispensáveis para a compreensão deste mecanismo biológico. Correlacionar os mecanismos biológicos de regulação e transporte de íons com os diferentes períodos de infestação e infecção é uma dessas maneiras de elucidar os processos que ocorrem durante a infestação e infecção. Neste estudo foram analisados os perfis de expressão de 5 genes (HAK-5, KEA, PAP-1, PII, NTR) relacionados com o transporte e regulação de potássio e nitrogênio com diferentes estímulos bióticos e em diferentes etapas de cada um desses processos. Os resultados demonstraram que há padrões diferenciais de regulação entre as plantas suscetíveis e resistentes para todos os genes analisados. Estas análises preliminares indicam que a regulação da absorção e/ou transporte de nutrientes exerce um importante papel durante as respostas de defesa em cafeeiros contra o bicho mineiro

Lipidomic Profile of Rhodotorula toruloides by GC/MS and Antioxidant Capacity of the Oil by DPPH and TLC-Plate Methods

This work was undertaken to evaluate the antioxidant capacity of Rhodotorula toruloides lipid extract in TLC plate, using the (DPPH) (1,1-diphenyl-2-picril-  hydrazine) method as an innovative way to visualise lipid groups that comprise this activity. Similarly, carotenoids and crude oil were analysed for  antioxidant capacity by the DPPH and β-carotene/linoleic acid methods. The lipidomic profile extract analysis was performed by GC/MS and HPLC/DAD.  The sample preparation for the GC/MS analysis was made by ultrasound-assisted transesterification. Free compounds were silylated with BSTFA (N,O-Bis  (trimethylsilyl) trifluoracetamide) + 1% TMCS (Trimethylchlorosilane). The analysis of the lipid extract showed that in the saponifiable fraction saturated  fatty acids (SFA) and monounsaturated fatty acids (MUFA) were present; and in the unsaponifiable fraction were steroids and carotenoids. The antioxidant  capacity was expressed as IC50 reaching 6.4 mg/L that means relative efficiency. The oil profile, using TLC, shows the chemical groups:  carotenoids, acylglycerols, free fatty acids and steroids. Similarly, the GC/ MS analysis shows the fatty acids and steroids. The HPLC analysis describes the  carotenoids profile, highlighting b-carotene as the majority and the presence of β-carotene-5,8-epoxide, zeaxanthin and b-cryptoxanthin, characterising  the lipidomic study of this yeast