Influence of methyl-b-cyclodextrin on the relase kinetics of inulin encapsulated in bioadhesive liposomes

Peer reviewe

On the barrier properties of the cornea: a microscopy study of the penetration of fluorescently labeled nanoparticles, polymers, and sodium fluorescein

Overcoming the natural defensive barrier functions of the eye remains one of the greatest challenges of ocular drug delivery. Cornea is a chemical and mechanical barrier preventing the passage of any foreign bodies including drugs into the eye, but the factors limiting penetration of permeants and nanoparticulate drug delivery systems through the cornea are still not fully understood. In this study, we investigate these barrier properties of the cornea using thiolated and PEGylated (750 and 5000 Da) nanoparticles, sodium fluorescein, and two linear polymers (dextran and polyethylene glycol). Experiments used intact bovine cornea in addition to bovine cornea de-epithelialized or tissues pretreated with cyclodextrin. It was shown that corneal epithelium is the major barrier for permeation; pretreatment of the cornea with β-cyclodextrin provides higher permeation of low molecular weight compounds, such as sodium fluorescein, but does not enhance penetration of nanoparticles and larger molecules. Studying penetration of thiolated and PEGylated (750 and 5000 Da) nanoparticles into the de-epithelialized ocular tissue revealed that interactions between corneal surface and thiol groups of nanoparticles were more significant determinants of penetration than particle size (for the sizes used here). PEGylation with polyethylene glycol of a higher molecular weight (5000 Da) allows penetration of nanoparticles into the stroma, which proceeds gradually, after an initial 1 h lag phase

sFlt Multivalent Conjugates Inhibit Angiogenesis and Improve Half-Life In Vivo

We would like to thank Jonathan Winger and Xiao Zhu for guidance with the insect cell protein expression system and providing reagents. We would like to acknowledge Ann Fischer for help with expressing the sFlt protein in the Tissue Culture Facility at UC Berkeley and Dawn Spelke and Anusuya Ramasubramanian for help optimizing protein purification from insect cells. We are also grateful for the help from Leah Byrne and John Flannery at in the Helen Wills Neuroscience Institute at UC Berkeley for aiding us in the development of the rat intravitreal residence time model and for allowing us to use their facilities.Current anti-VEGF drugs for patients with diabetic retinopathy suffer from short residence time in the vitreous of the eye. In order to maintain biologically effective doses of drug for inhibiting retinal neovascularization, patients are required to receive regular monthly injections of drug, which often results in low patient compliance and progression of the disease. To improve the intravitreal residence time of anti-VEGF drugs, we have synthesized multivalent bioconjugates of an anti-VEGF protein, soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt) that is covalently grafted to chains of hyaluronic acid (HyA), conjugates that are termed mvsFlt. Using a mouse corneal angiogenesis assay, we demonstrate that covalent conjugation to HyA chains does not decrease the bioactivity of sFlt and that mvsFlt is equivalent to sFlt at inhibiting corneal angiogenesis. In a rat vitreous model, we observed that mvsFlt had significantly increased intravitreal residence time compared to the unconjugated sFlt after 2 days. The calculated intravitreal half-lives for sFlt and mvsFlt were 3.3 and 35 hours, respectively. Furthermore, we show that mvsFlt is more effective than the unconjugated form at inhibiting retinal neovascularization in an oxygen-induced retinopathy model, an effect that is most likely due to the longer half-life of mvsFlt in the vitreous. Taken together, our results indicate that conjugation of sFlt to HyA does not affect its affinity for VEGF and this conjugation significantly improves drug half-life. These in vivo results suggest that our strategy of multivalent conjugation could substantially improve upon drug half-life, and thus the efficacy of currently available drugs that are used in diseases such as diabetic retinopathy, thereby improving patient quality of life.Yeshttp://www.plosone.org/static/editorial#pee

Les collyres antiglaucomateux (problèmes posés par les conservateurs et alternatives possibles)

Les conservateurs sont présents dans de nombreux collyres multidoses. Ils empêchent la contamination de la solution vis-à-vis des micro-organismes après ouverture du flacon. Cependant, des études ont montré que les conservateurs sont toxiques pour la surface oculaire notamment chez les patients prenant des collyres au long cours, comme dans le cas du glaucome chronique à angle ouvert. Le conservateur le plus employé dans les collyres antiglaucomateux est le chlorure de benzalkonium. L utilisation de cet ammonium quaternaire sur la surface oculaire pourrait avoir des conséquences importantes en particulier sur le long terme. En effet, il provoque la dissolution du film lacrymal et est pro-apoptotique et pro-inflammatoire. Ainsi, chez les patients glaucomateux, l administration prolongée de collyres conservés conduit à une altération des structures superficielles (conjonctives, cornée) et plus profondes (trabéculum, cristallin). Les signes et symptômes oculaires les moins sévères se manifestent par une gêne ou des irritations tandis que les plus graves se traduisent par le développement progressif d une fibrose avec entre autres un risque accru d échec en cas de chirurgie du glaucome. Le meilleur moyen de limiter ces complications passe par l utilisation de collyres sans conservateur, chaque fois que cela est possible. Il s agit des formes unidoses et des systèmes plus complexes de type Abak® et Comod®. Une meilleure prise en charge de la surface oculaire devrait permettre d augmenter le confort du patient, l observance du traitement et d assurer l efficacité d une future chirurgie filtrante chez les patients atteints de glaucome.CHATENAY M.-PARIS 11-BU Pharma. (920192101) / SudocSudocFranceF

Nouvelle stratégie thérapeutique des uvéites par l'administration intraoculaire d'un peptide immunomodulateur, le vasoactive intestinal peptide, dans des liposomes

Les uvéites, inflammations oculaires graves, sont traitées par cortico- et immunothérapie. Une nouvelle stratégie thérapeutique a été étudiée dans cette thèse : l apport externe d une molécule immunosuppressive endogène de l œil, le vasoactive intestinal peptide (VIP) à l aide de liposomes. Une injection intravitréenne de liposomes de VIP, a un effet thérapeutique sur deux modèles d uvéite chez le rat, uvéite induite par endotoxine (UIE) et uvéite auto-immune expérimentale. Les liposomes, après injection intravitréenne chez le rat normal ou atteint d uvéite, se distribuent à partir du vitré vers les tissus oculaires. Ils sortent de l œil par les vaisseaux sanguins et lymphatiques et peuvent être internalisés par les cellules inflammatoires et résidentes oculaires. Un système de rétention des liposomes de VIP dans l œil, à base de gel d acide hyaluronique, constituant naturel du vitré, modifie le devenir des liposomes par effet réservoir et a un effet thérapeutique retardé sur l UIE.Uveitis is a severe ocular inflammation, currently treated by corticotherapy or immunosuppression. A new therapeutic strategy was developed in this thesis: the intravitreal injection of an endogenous immunosuppressive molecule of the eye, vasoactive intestinal peptide (VIP) formulated as liposomes. A single intravitreal injection of VIP, encapsulated in liposomes, reduces ocular inflammation in two rat models, endotoxin-induced uveitis and experimental autoimmune uveoretinitis. Liposomes, injected in normal or inflamed eyes, disperse rapidly from the vitreous to other ocular tissues. They egress from the eye by venous circulation and lymphatic vessels. They can be internalized by ocular inflammatory of resident cells. A new retention system of VIP-loaded liposomes in the eye was developed. A gel-based formulation composed of hyaluronic acid, a natural component of the vitreous, is able to modify the fate of the liposomes, leading to a delayed effect on endotoxin-induced uveitis.CHATENAY M.-PARIS 11-BU Pharma. (920192101) / SudocSudocFranceF

Répartition aseptique d'un vaccin en seringues pré-remplies (maintien des conditions de l'isolateur de classe A et implication du canon à électrons)

La répartition aseptique d'un vaccin en seringues pré-remplies est un procédé particulier de l'industrie pharmaceutique. Elle répond à des normes strictes. Ce travail s'intéresse aux moyens mis en place pour garantir les conditions aseptiques indispensables à la répartition de vaccins injectables, et notamment l'implication du canon à électrons dans le transfert des boîtes de seringues à remplir dans l'isolateur de répartition aseptique de classe A. La maîtrise des conditions environnementales est un facteur nécessaire mais non suffisant pour garantir la stérilité du vaccin. En effet, les différents composants assemblés pour former le produit fini doivent être stériles et notamment les boîtes contenant les seringues introduites dans l'isolateur. Le canon à électrons intégré directement dans la chaîne de répartition contribue au maintien de la stérilité de l'isolateur, tout en permettant un flux d'entrée rapide et continu des boîtes contenant les seringues. L'identification des facteurs de risques de contamination du vaccin et la recherche de la solution appropriée pour minimiser ces risques sont des éléments incontournables pour assurer la sécurité du patient.CHATENAY M.-PARIS 11-BU Pharma. (920192101) / SudocSudocFranceF

Synthèse et caractérisation de porphyrines et de métalloporphyrines à activité anti-prion

Parmi les problèmes posés par le prion et les maladies à prion, deux ont retenu notre attention, comme la résistance de la protéine du prion pathogène, PrPres aux procédés de désinfection et le fait qu'il n'existe aucun médicament. Notre double but est d'inactiver la PrPres dans des conditions douces, basées sur les propriétés de catalyse d'oxydation des métalloporphyrines et de rechercher une nouvelle molécule de type métalloporphyrine active en thérapeutique. Nous avons synthétisé une quarantaine de porphyrines portant des groupements polaires bifonctionnels variables dans le but de cibler et d'interagir avec PrPres. Ces groupements ont été introduits en fonctionnalisant des porphyrines en série TF5PP par une méthode de substitution nucléophile aromatique. Nous avons aussi élaboré une famille de porphyrines tétracationiques dérivant d'une porphyrine de zinc générée par électrosynthèse pour laquelle les charges positives sont directement portées par le macrocycle. Nous avons également fait varier la nature du métal (Mn, Fe, Cu, Zn). Des tests cellulaires in vitro ont montré que neuf porphyrines ont une activité anti-prion avec des IC50 inférieures à 1 [mu]M dont deux sont inférieures o voisines de 100 nM. In vivo deux porphyrines P14 et P8 administrées par voie intracérébrale ont permis d'augmenter la durée de vie des souris de 20 à 50 % par rapport au lot témoin non traité. L'administration de P20 et P8 ont permis de diminuer respectivement la quantité en PrPres au niveau de la rate de 55 et 35 %. En dépollution, nous avons montré que nos systèmes de catalyse d'oxydation à base de certaines de nos métalloporphyrines étaient capables dégrader le prion en solution.Among the problems arising from the prion and the diseases with prion, two held our attention, like the resistance of pathogenic prion protein, PrPres with the disinfection processes and the fact that there is not any drug. Our double goal is to inactivate PrPres under soft conditions, based on the catalytic properties of metalloporphyrins in oxidation and to seek a new metalloporphyrin for therapeutic applications. Forty porphyrins were synthesized carrying variable bifunctional polar groups with an aim of targeting and interacting with PrPres. These groups were introduced by porphyrins functionalization in series TF5PP by a nucleophilic aromatic substitution. We also worked out a family of tetracationic porphyrins deriving from a zinc porphyrin generated by electrosynthesis for which the positive charges are directly carried by the macrocycle. We also varied the nature of metal (Mn, Fe, Cu, Zn). In vitro cellular tests showed that ten porphyrins have an anti-prion activity with IC50 lower than 1 [mu]M to which two are lower or close to 100 nM. In vivo, two porphyrins, P14 and P8, managed by intracerebral way made it possible to increase the lifespan of the mice from 20 to 50 % compared to the pilot batch untreated. The administration of P20 and P8 made it possible respectively to decrease the quantity in PrPres on the level of spleen of 55 and 35 %. For disinfection, we showed that our catalysis systems of oxidation containing some of our metalloporphyrins were able to degrade the prion in solution.ORSAY-PARIS 11-BU Sciences (914712101) / SudocSudocFranceF

La formation du personnel en production aseptique (un outil d'amélioration de la performance)

L'industrie pharmaceutique est aujourd'hui en pleine évolution et doit faire face à de nouveaux enjeux et contraintes dans un environnement fortement réglementé. Ainsi, dans ce double contexte d'amélioration des performances et de respect des obligations légales et réglementaires, il est important pour une entreprise fabricant des médicaments de pouvoir compter sur la qualité de son personnel. Au delà de l'obligation légale, la formation représente un enjeu majeur. Bien que les techniques automatisées modernes et les mesures de protection puissent diminuer le risque de contamination, on ne saurait exagérer l'importance du"facteur humain" dans tous les procédés aseptiques. De ce fait, la formation au poste est essentielle. En développant les compétences nécessaires à la maîtrise du poste de travail, la formation devient un instrument puissant pour améliorer la compétitivité, et constitue alors un des pilliers de la performance de l'entreprise. La recherche de performance permet d'obtenir un médicament de qualité dans la mesure où la compétence au poste de travail devient et reste effective. Et dans ce contexte, son application se doit d'être contrôlée par un suivi régulier.CHATENAY M.-PARIS 11-BU Pharma. (920192101) / SudocSudocFranceF