Molecular and morphological identification of Fusarium spp., associated with black pepper (Piper nigrum) cultivation in Sarapiquí and Guatuso in Costa Rica. Introduction

Introducción. La pimienta es una especie de la familia de la Piperaceae, originaria de la Costa de Malabar, situada en Kerala al sur de la India. En Costa Rica, las principales plantaciones de pimienta se localizan desde Upala hasta Talamanca, e incluye toda la franja costera y la parte baja de Sarapiquí. Según estudios de factibilidad, el país cuenta con el potencial para producir pimienta con altos parámetros de calidad. Sin embargo, las enfermedades vasculares son una de las principales limitantes del cultivo. Objetivo. El objetivo de esta investigación fue el aislamiento e identificación molecular y morfológica de las especies de Fusarium asociadas al cultivo de la pimienta (Piper nigrum L.) en 2 de las principales zonas productoras del país. Materiales y métodos. Se recolectaron treinta muestras de plantas enfermas de distintas fincas en las zonas de Sarapiquí y Guatuso, se describieron detalladamente los síntomas observados en el sistema radical y/o la base del tallo para cada una de las plantas recolectadas. Los veintiún aislamientos de Fusarium spp. obtenidos se identificaron molecularmente con la secuencia parcial del gen Factor de Elongación 1α (EF-1α) y para la identificación morfológica se utilizaron los medios de cultivo PDA y Carnation Leaf-piece Agar (CLA). Resultados y conclusiones. Se confirmó la presencia de Fusarium oxysporum en las muestras provenientes de Sarapiquí, así como la presencia de Fusarium solani en ambas zonas muestreadas. Se reporta por primera vez, la presencia de las especies Fusarium concentricum y Fusarium proliferatum asociadas a la marchitez vascular.Pepper is one of the Piperaceae family, native to the Malabar Coast, located in Kerala in Southern India. In Costa Rica, main pepper plantations are located from Upala to Talamanca including the entire coastal and lower strip of Sarapiquí. According to feasibility studies, Costa Rica has the potential to produce pepper with high quality parameters; however, vascular diseases are one of the main crop limitations. Objective. To isolatate, and molecularly and morphologically identify species of Fusarium associated with the cultivation of pepper (Piper nigrum L.) in 2 of the main productive areas of the country. Materials and methods. Thirty samples from diseased plants were collected from different farms located in Sarapiqui and Guatuso, symptoms observed in the radical system and/or the stem base were described in detail for each plant. The twenty one isolates of Fusarium spp. obtained were identified with the partial sequence of the molecular marker Elongation Factor 1α (EF-1α) gene and for the morphogical identification using the PDA and Carnation Leaf Agar (CLA) culture media were used. Results and conclusions. The presence of Fusarium oxysporum was confirmed in the samples from Sarapiquí, and the presence of Fusarium solani was confirmed in the samples from both areas. The presence of the species Fusarium concentricum and Fusarium proliferatum associated with vascular wilt is reported for the first time,Universidad de Costa Rica/[]/UCR/Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Agroalimentarias::Centro de Investigación en Protección de Cultivos (CIPROC

Mealybugs (Hemiptera: Pseudococcidae) and their impact on the Musaceae crop

Introducción. La cochinilla harinosa (Hemiptera: Pseudococcidae) se conoce por su importancia a nivel comercial, ya que puede afectar todas las etapas de desarrollo del cultivo y causar pérdidas de la cosecha. El nombre se deriva de la secreción de cera blanca que presentan las hembras alrededor del cuerpo. Objetivo. El objetivo de la presente revisión bibliográfca consistió en sintetizar los principales aspectos relacionados con la taxonomía, biología, daños a las plantas hospedantes, distribución geográfca e impacto de la cochinilla harinosa en las Musáceas. Desarrollo. La mayoría de los géneros tienen una amplia distribución a nivel geográfco. Pueden transportarse durante el embarque del cultivo a exportar, escapando a las regulaciones ftosanitarias, con un alto riesgo de introducción como plaga de cultivos de importancia económica de otros países. Para identifcar al individuo a nivel de especie se utilizan las hembras adultas, los machos y ninfas carecen de las características necesarias para su clasifcación. Dentro de la familia Pseudococcidae sobresale Pseudococcus elisae (Borchsenius), como una de las primeras especies identifcadas en el cultivo de Musáceas. El Servicio Fitosanitario del Estado (SFE) del Ministerio de Agricultura y Ganadería (MAG) de Costa Rica, declaró para fnales del 2013 e inicios del 2014, emergencia ftosanitaria a causa del aumento de P. elisae, sin embargo, existen registros de hasta veinticuatro especies como vectores del virus del estriado del banano, pertenecientes a catorce géneros con distintos orígenes. El período de alimentación donde ocurre la transmisión, está relacionado con la especie de cochinilla harinosa y las condiciones ambientales. A la vez que inyectan toxinas, se secretan líquidos azucarados del floema de la planta, que sirven de medio para el establecimiento de hongos sobre la superfcie de los órganos atacados, lo cual provoca daños fsiológicos al cultivo. Conclusión. Por esta razón, es de gran importancia considerar los aspectos relacionados con la taxonomía, la biología, las plantas hospedadoras y la distribución geográfca de las diferentes especies de la cochinilla harinosa para desarrollar estrategias apropiadas que controlen la propagación de la plaga.Introduction. The mealybug (Hemiptera: Pseudococcidae) is known for its importance at commercial level, since it can affect all stages of development on agricultural crops and cause harvest losses. The name is derived from the secretion of white wax that females present around of the body. Objective. The aim of this bibliographical review was to synthesize the main aspects related to taxonomy, biology, damage to host plants, geographic distribution and the impact of the mealybug on Musaceae. Development. Most of the genres have a wide geographical distribution. Can be transported during the shipment of the crop to be exported, slipping away from the phytosanitary regulations, with a high risk of introduction as a pest of economically important crops to other countries. To identify the individual at species level, adult females are used, males and nymphs lack of the necessary characteristics for their classification. Within the Pseudococcidae family, Pseudococcus elisae (Borchsenius) stands out as one of the first species identified in the Musaceae crop. The State Phytosanitary Service (SFE, acronyms in spanish) of the Ministry of Agriculture and Livestock (MAG, acronyms in spanish) from Costa Rica, declared by the end of 2013 and the beginning of 2014, a phytosanitary emergency due to the increase of P. elisae, however there are records of up to twenty-four species as vectors of banana streak virus, belonging to fourteen genera with different origins. The feeding period where the transmission, occurs, is associated with the mealybug species and the environmental conditions. At the same time that they inject toxins, the sugary liquids are secreted from the phloem of the plant, which serves as a means for the establishment of fungi on the surface of the attacked organsthat cause several physiological damages to the crop. Conclusion. For this reason, it is of great importance to consider related aspects to taxonomy, biology, host plants and the geographical distribution of the different species of the mealybug to develop appropriate strategies that control the pest propagation.UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Agroalimentarias::Centro de Investigación en Protección de Cultivos (CIPROC)UCR::Vicerrectoría de Docencia::Ciencias Agroalimentarias::Facultad de Ciencias Agroalimentarias::Escuela de Agronomí

Identification of Fusarium species in black bean grains (Phaseolus vulgaris L.) from Costa Rica

Introducción. El frijol común (Phaseolus vulgaris L.) es una leguminosa consumida ampliamente en países en vías de desarrollo. En Costa Rica su consumo es alto (10,54 kg.persona-1.año-1) y su producción se localiza principalmente en regiones al sur y al norte del país. Los granos de esta leguminosa podrían estar contaminados con Fusarium, un hongo micotoxigénico que coloniza diferentes cultivos. Objetivo. Identificar las especies de Fusarium que colonizan los granos de frijol negro en Costa Rica. Materiales y métodos. Se recolectaron 49 muestras de granos de frijol negro durante 2017, 2018 y 2019 en regiones donde se produce este grano en Costa Rica. Estas se utilizaron para aislar e identificar las especies de Fusarium basado en secuencias parciales de los genes TEF1α (factor de elongación de la traducción 1-alfa) y RPB2 (subunidad de la ARN polimerasa II). Resultados. Se obtuvieron 28 aislamientos de Fusarium, de los cuales 82% pertenecen al com[1]plejo de especies Fusarium incarnatum-equiseti (FIESC). La presencia de especies de Fusarium varió según el año de recolección; en el 2018 se encontró la menor prevalencia (43%) y el 2019 la mayor (76%). El 71% de las especies de Fusarium se aislaron de muestras recolectadas en la región sur del país. F. equisetti se aisló solo de una muestra procedente de la región Atlántica, mientras que F. incarnatum, F. oxysporum y F. verticillioides se encontraron distribuidos en muestras colectadas en diferentes regiones del país. Conclusión. El presente estudio demostró la diversidad de especies de Fusarium que colonizan los granos de frijol negro en Costa Rica según la ubicación geográfica y el año de recolección de la muestra. La mayoría de las especies aisladas resultaron productoras de micotoxinas que causan efectos adversos en la salud humana.Introduction. The common bean (Phaseolus vulgaris L.) is a legume that is widely consumed in developing countries. In Costa Rica, its consumption is still high (10.54 kg.person-1. year), and its production is mainly located in the southern and the northern regions of the country. The grains of this legume could be contaminated with Fusarium, a mycotoxigenic fungus that colonizes different crops. Objective. Identify Fusarium species that colonize the grains of Costa Rican black beans. Materials and methods. Forty-nine samples of black bean grains were collected during 2017, 2018 and 2019 in different regions where this grain is produced in Costa Rica. Those were used to isolate and identify the Fusarium species based on the partial sequences of TEF-1α (translation elongation factor 1-alpha) and RPB2 genes (RNA polymerase II subunit). Results. A total of 28 Fusarium isolates were obtained, of which 82% belong to the Fusarium incarnatum-equiseti species complex (FIESC). The presence of Fusarium species was high and varied according to the year of sample collection; thus 2018 was the year in which the lowest prevalence was found (43%) and 2019 the highest (76%). Seventy-one percent of the Fusarium species were isolated from samples collected in the Brunca region in southern Costa Rica. F. equisetti was isolated only from one sample obtained from the Huetar Atlántica region, while F. incarnatum, F. oxysporum and F. verticillioides were found distributed in samples collected in different regions of the country. Conclusion. The present study demonstrates the diversity of Fusarium species colonizing black bean grains in Costa Rica according to the geographical location and the year of collection of the samples. Most of the isolated species are well known producers of mycotoxins that cause adverse effects on human health.Universidad de Costa Rica/[734-B9-038]/UCR/Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Agroalimentarias::Centro para Investigaciones en Granos y Semillas (CIGRAS)UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Agroalimentarias::Centro de Investigación en Protección de Cultivos (CIPROC

Use of Organic Matter, Mountain Microorganisms (MM) and Fertibiol for the biological control of cabbage club root (Plasmodiophora brassicae wor.) in the cultivation of chinese mustard (Brassica rapa sp. Pekinensis var. Taranko F1)

Introducción. La producción de mostaza (Brassica rapa sp. pekinensis) se ve afectada por la enfermedad causada por Plasmodiophora brassicae. Objetivo. Determinar el efecto de Abono Orgánico, Microorganismos de Montaña y Fertibiol, para el control biológico de P. brassicae. Materiales y métodos. Los tratamientos diseñados se evaluaron de manera individual y en combinación, las variables evaluadas fueron peso fresco y seco de la parte aérea y la radical, relación raíz-tallo, índice de severidad radical y persistencia de esporas en el suelo (rtPCR). Se realizaron 2 ciclos de cultivo y 2 evaluaciones. Se utilizaron las pruebas de Kruscal-Wallis, Shapiro-Wilks y Levene, ANDEVA y la prueba DGC (Di Rienzo, Guzmán y Casanoves) para la separación de medias. Resultados. Los tratamientos que contenían abono orgánico (solo o en mezcla) obtuvieron los mayores valores para las variables de peso fresco y seco, tanto para la parte aérea (más de 300% respecto al testigo) como la radical. La relación raíz-tallo (R/T) fue menor y, por ende, más favorable en el tratamiento con abono orgánico, con un valor de 0,22. Para el índice de severidad, el tratamiento con MM presentó el menor valor en las 2 evaluaciones, mientras que los tratamientos con abono orgánico mostraron el mayor valor, pero esto no afectó negativamente el rendimiento. Para la variable persistencia, fue posible determinar que en el testigo hubo una disminución en la cantidad de esporas germinativas con el avance del tiempo y que los tratamientos aplicados ocasionaron respuestas variables en cuanto a este comportamiento, mostrando ecuaciones con diferente pendiente y muy diversos coeficientes de variación. El tratamiento con MM presentó para la segunda evaluación la menor cantidad promedio de esporas y el menor índice de severidad radical. Conclusión. El abono orgánico mejoró el rendimiento de las plantas y la utilización de MM redujo la severidad y mostró potencial para disminuir la presencia de esporas en el suelo.Introduction. Mustard production (Brassica rapa sp. Pekinensis) is affected by the disease caused by Plasmodiophora brassicae. Objective. To determine the effect of Organic Matter, Mountain Microorganisms and Fertibiol, for the biological control of P. brassicae. Materials and methods. The designed treatments were evaluated individually and in combination, the variables evaluated were fresh and dry aerial and radical weight, root-stem ratio (R/T), radical severity index and spore persistence in the soil (rtPCR). Two culture cycles and 2 evaluations were performed. The Kruscal-Wallis, ShapiroWilks and Levene, ANDEVA tests and the DGC (Di Rienzo, Guzmán & Casanoves) test for the separation of means were used. Results. The treatments containing organic matter obtained the highest values for the variables of fresh weight and dry weight, both for the aerial part (more than 300% compared to the control) and the radical part. The R/T ratio was lower, and therefore more favorable, in the treatment with organic matter, with a value of 0.22. For the severity index, the MM treatment had the lowest value in the 2 evaluations, while the treatments with organic matter showed the highest value, but this did not affect the yield negatively. For the persistence variable, it was possible to determine that in the control treatment there was a decrease in the amount of germinating spores with the advance in time and that the treatments applied caused variable responses regarding this behavior, showing equations with different slopes and very different coefficients of variation. The treatment with MM presented for the second evaluation the lowest average amount of spores and the lowest radical severity index. Conclusion. The organic matter improved the yield of the plants and the use of MM reduced the severity and showed potential to reduce the presence of spores in the soil.Universidad de Costa Rica/[]/UCR/Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Agroalimentarias::Centro de Investigaciones Agronómicas (CIA)UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Agroalimentarias::Centro de Investigación en Protección de Cultivos (CIPROC

First Report of Tomato yellow leaf curl virus in Tomato in Costa Rica

One of the most important invasive and harmful members of the genus Begomovirus (family Geminiviridae) is the monopartite Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV), which is widespread over the world associated with tomato yellow leaf curl disease (TYLCD). Tomato (Solanum lycopersicum) plants infected with TYLCV show upward leaf curling and yellowing. In Latin America, isolates of TYLCV have been reported from Cuba, the Dominican Republic, Mexico and Puerto Rico (1), Guatemala (GenBank Accession No. GU355941), and Venezuela (partial genome sequence DQ302033). In Costa Rica, only isolates of the bipartite begomoviruses Tomato leaf curl Sinaloa virus (TLCSiV) (3) and Tomato yellow mottle virus (KC176780, KC176781) have been reported infecting tomatoes. During a survey conducted in 2012, similar begomovirus-like symptoms (leaf yellowing and upward leaf curling) were observed in tomato plants of five commercial growing areas in the Central Valley (Grecia region) of Costa Rica. In total, 65 tomato samples were randomly collected, 14 from greenhouses and 41 from open fields. Symptoms of upward leaf curling and yellowing were observed in three samples. Total DNA was extracted from collected samples and tested by dot blot hybridization using a probe to the coat protein (CP) gene of a Guatemalan isolate of Bean golden yellow mosaic virus (3). Only the three symptomatic samples tested positive, which represents an incidence of 14% (2 samples) in greenhouses and 2.4% (1 sample) in open field crops. These samples were subjected to rolling circle amplification (RCA) for viral circular genome amplification (2). The amplified products were then digested with MspI restriction endonuclease, which resulted into DNA fragments of 2,320 and 458 bp for all three samples. This suggested infection with a monopartite begomovirus. In order to obtain the full-length clone, the RCA product of two samples (5240 and 5241) was digested with BamHI, and the ~2.8 kb DNA fragment was cloned into pBluescript II SK(+) (Stratagene, La Jolla, CA) vector. After transformation of Escherichia coli DH5α, recombinant plasmids with inserts of expected size were selected and the insert was sequenced by primer walking (Macrogen Inc., Korea). The inserts of three clones from the two samples (CR:5240-16:2012, CR:5240-17:2012, and CR:5241-14:2012) were sequenced (deposited in GenBank as KF533855, KF533856, and KF533857, respectively). Sequences were all 2,781 nt long and shared 100% identity between themselves (1-nt mismatch between CR:5240-16:2012 and CR:5240-17:2012, and CR:5240-16:2012 and CR:5241-14:2012; and 2-nt mismatches between CR:5240-17:2012 and CR:5241-14:2012) and 99% with the sequence of Tomato yellow leaf curl virus-Israel[Japan:Haruno:2005] (TYLCV-IL[JR:Har:05]) (AB192966). These sequences represented full length genomes of isolates of the monopartite begomovirus TYLCV-IL and grouped in a phylogenetic clade (4) that comprised TYLCV-IL isolates reported from Asia (China and Japan) and from Mexico, while more distantly related to the clade comprising TYLCV-IL isolates reported from Central America (Cuba, Guatemala, Puerto Rico) and the United States, suggesting a distinct introduction event in Costa Rica. This is the first report of the presence of TYLCV in Costa Rica, therefore it is imperative to study the incidence and geographical spread of this virus in the country as well as its genetic diversity, since TYLCV infections might lead to significant yield losses, as reported in other countries.UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Básicas::Centro de Investigación en Biología Celular y Molecular (CIBCM

Effect of viral storm in patients admitted to intensive care units with severe COVID-19 in Spain: a multicentre, prospective, cohort study

Background: The contribution of the virus to the pathogenesis of severe COVID-19 is still unclear. We aimed to evaluate associations between viral RNA load in plasma and host response, complications, and deaths in critically ill patients with COVID-19. Methods: We did a prospective cohort study across 23 hospitals in Spain. We included patients aged 18 years or older with laboratory-confirmed SARS-CoV-2 infection who were admitted to an intensive care unit between March 16, 2020, and Feb 27, 2021. RNA of the SARS-CoV-2 nucleocapsid region 1 (N1) was quantified in plasma samples collected from patients in the first 48 h following admission, using digital PCR. Patients were grouped on the basis of N1 quantity: VIR-N1-Zero ([removed]2747 N1 copies per mL). The primary outcome was all-cause death within 90 days after admission. We evaluated odds ratios (ORs) for the primary outcome between groups using a logistic regression analysis. Findings: 1068 patients met the inclusion criteria, of whom 117 had insufficient plasma samples and 115 had key information missing. 836 patients were included in the analysis, of whom 403 (48%) were in the VIR-N1-Low group, 283 (34%) were in the VIR-N1-Storm group, and 150 (18%) were in the VIR-N1-Zero group. Overall, patients in the VIR-N1-Storm group had the most severe disease: 266 (94%) of 283 patients received invasive mechanical ventilation (IMV), 116 (41%) developed acute kidney injury, 180 (65%) had secondary infections, and 148 (52%) died within 90 days. Patients in the VIR-N1-Zero group had the least severe disease: 81 (54%) of 150 received IMV, 34 (23%) developed acute kidney injury, 47 (32%) had secondary infections, and 26 (17%) died within 90 days (OR for death 0·30, 95% CI 0·16–0·55; p<0·0001, compared with the VIR-N1-Storm group). 106 (26%) of 403 patients in the VIR-N1-Low group died within 90 days (OR for death 0·39, 95% CI 0·26–0·57; p[removed]11 página

Molecular identification of microorganisms in agricultural, ornamental and forest crops in Costa Rica, 2009-2018. Part 1

Introducción. El Laboratorio de Técnicas Moleculares aplicadas a la Fitoprotección (LTM), Centro de Investigación en Protección de Cultivos, Universidad de Costa Rica; recibe cultivos agrícolas, ornamentales y forestales para la identificación de microorganismos por medio de técnicas moleculares. Objetivo. Identificar con técnicas moleculares hongos, oomicetes y protozoa patogénicos y no patogénicos en cultivos agrícolas, ornamentales y forestales de Costa Rica. Materiales y métodos. Entre los años 2009 y 2018, se recibieron partes de plantas (raíz, tallo, hojas, frutos) y otros materiales como agua, sustrato y suelo, de los cuales se obtuvieron 805 aislamientos para identificación de microorganimos por mediante técnicas de extracción de ADN, PCR en tiempo final y en tiempo real y secuenciación mediante marcadores moleculares. Resultados. La secuenciación permitió la identificación de un total de 154 especies de hongos, 6 oomicetos y 1 protozoa. Dentro de los hongos identificados predominaron géneros como Fusarium con catorce especies diferentes, seguidos de Colletotrichum y Aspergillus con once especies identificadas para cada uno. En los oomicetes, prevalecieron especies del género Phytophthora y dentro de los protozoa el género Plasmodiophora. Además, las referencias científicas que respaldan la presencia de los microorganismos identificados en un cultivo en particular, han sido incluidas dentro de la información. Conclusión. Fue posible identificar mediante técnicas moleculares especies de hongos, oomicetos y protozoa patogénicos y no patogénicos aislados de diferentes cultivos agrícolas, ornamentales y forestales en Costa Rica.Introduction. The Laboratory of Molecular Techniques applied to Phytoprotection (LTM), Crop Protection Research Center, Universidad de Costa Rica; receives agricultural, ornamental, and forest crops for the identification of microorganisms using molecular techniques. Objective. To identify pathogenic and non-pathogenic fungi, oomycetes, and protozoa in agricultural, ornamental, and forest crops in Costa Rica by molecular methods. Materials and methods. Between 2009 and 2018, plant parts (root, stem, leaves, fruits) and other materials such as water, substrate, and soil were received. A total of 805 isolates were obtained for identification of microorganisms by DNA extraction techniques, end-time and real-time PCR and sequencing using molecular markers. Results. The sequencing allowed the identification of a total of 154 species of fungi, 6 oomycetes, and 1 protozoa. Among the fungi identified, genera such as Fusarium predominated with fourteen different species, followed by Colletotrichum and Aspergillus with eleven species identified for each one. In the oomycetes, species of the genus Phytophthora prevailed, and within the protozoa the genus Plasmodiophora. In addition, the scientific references supporting the presence of the microorganisms identified in each particular crop have been included in the information. Conclusion. It was possible to identify by molecular techniques pathogenic and non-pathogenic fungi, oomycetes and protozoa species isolated from different agricultural, ornamental and forest crops in Costa Rica.Universidad de Costa Rica/[ED-2811]/UCR/Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Agroalimentarias::Centro de Investigación en Protección de Cultivos (CIPROC

Clínicas de diagnóstico en el sector fitosanitario, un aporte al productor, a la sanidad vegetal y al país

La acción social en la Universidad de Costa Rica se desarrolla en diversas áreas. Esta relación constituye un vínculo directo con el país por medio de la ejecución de diferentes programas, proyectos y actividades inscritas en la Vicerrectoría de Acción Social. De forma paralela, la universidad también realiza investigación en diversos temas, relevantes y actuales, cuyos resultados deben verse reflejados en el día a día de la comunidad. Así, la acción social se convierte en una herramienta clave para el intercambio de conocimientos y experiencias entre la universidad y la sociedad.UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Agroalimentarias::Centro de Investigación en Protección de Cultivos (CIPROC

Acondicionamiento de la cochinilla harinosa (Hemiptera: Pseudococcidae) por Microscopía Electrónica de Barrido.

The aim of this work was to determine the methodology for an adequate conditioning for the cleaning of mealybugs specimens and its correct observation. This work was done in the laboratory of the Research Center in Microscopic Structures (CIEMIC) of the University of Costa Rica, in 2012. Four types of methodologies were implemented, which evidenced a gradual improvement of the observation of the ultrastructures through the Scanning Electron Microscopy. Every process was described in detail. The best results were showed with 10% xylene (in some cases it was feasible using 95-100% ethanol). It allowed to remove the wax from the body of the insect, avoiding its collapse, and observing the specific ultrastructures of the individual. This approach will reduce the time and cost of future taxonomic research of mealybugs.El objetivo del presente trabajo fue determinar la metodología de acondicionamiento adecuada para la limpieza de los especímenes de cochinilla harinosa y su correcta observación. La investigación se llevó acabo en el laboratorio del Centro de Investigación en Estructuras Microscópicas (CIEMIC) de la Universidad de Costa Rica durante el año 2012. Se implementaron cuatro tipos de metodología, con los cuales se evidenció una mejora gradual para la observación de las ultraestructuras a través del microscopio electrónico de barrido. Cada proceso fue descrito detalladamente, el que mostró mejores resultados fue en el que se incorporó xilol al 10% (en algunos casos resultó viable utilizando etanol al 95-100%), ya que se logró eliminar la cera del cuerpo del insecto, evitar el colapso del mismo y observar ultraestructuras específicas del individuo. Esta metodología permitirá reducir el tiempo y los costos en futuras investigaciones taxonómicas de la cochinilla harinosa

Ultrastructural variants of the mealybug Pseudococcus elisae Borchsenius (Hemiptera: Pseudococcidae) from Costa Rica

Muchas de las especies de cochinillas harinosas (Hemiptera: Pseudococcidae) consideradas plagas de cultivos, están concentradas en la región de países del trópico. Con el objetivo de disponer de información actualizada sobre la taxonomía de estos insectos, se presentan variantes ultraestructurales de diferentes poblaciones de Pseudococcus elisae Borchsenius, 1947, procedentes de 11 fincas productoras de banano de Costa Rica. Se utilizó microscopía de luz para identificar la especie y microscopía electrónica de barrido (MEB) para describir ultraestructuras. Los caracteres estudiados por MEB, mostraron diferencias respecto de los ostiolos, cerarios, ductos tubulares con anillo oral y poros multiloculares. En la presente investigación se determinó que las cochinillas identificadas como P. elisae en el cultivo de banano, presentan una serie de variantes ultraestructurales con gran valor taxonómico, que podrían ser consideradas a futuro como otros caracteres descriptivos dentro de la clasificación de la especie.Many mealybug species (Hemiptera: Pseudococcidae) that are considered pests of important crops are concentrated in the region of tropical countries. In order to update the information on the taxonomy of these insects, ultrastructural variants from different populations of Pseudococcus elisaeBorchsenius, 1947, from 11 Costa Rican banana producing farms are presented. Light microscopy was used to identify the species and scanning electron microscopy (SEM) to describe the ultrastructures. The characters studied by SEM, showed differences regarding to ostioles, cerarii, oral rim tubular ducts and multilocular pores. In the present investigation it was determined that mealybugs identified as P. elisaein the banana crop, show a series of ultrastructural variants of great taxonomic value, which could be considered in the future as other descriptive characters within the classification of the species.Universidad de Costa Rica/[810-B2-232]/UCR/Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Docencia::Ciencias Agroalimentarias::Facultad de Ciencias Agroalimentarias::Escuela de AgronomíaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Agroalimentarias::Centro de Investigación en Protección de Cultivos (CIPROC