Farmacogenetica dei farmaci anti-VEGF in pazienti affetti da maculopatia degenerativa legata all'età.

Introduzione: La degenerazione maculare senile (DMS) è diventata la maggiore causa di ipovisione negli individui al di sopra dei 65 anni nei Paesi industrializzati. Dal punto di vista clinico, caratteristica è la comparsa delle drusen, accumuli di materiale ialino, che si evolvono nella forma essudativa-emorragica (umida) e atrofica (secca). La forma umida è caratterizzata dalla proliferazione di nuovi vasi nella membrana sottoretinica, promossa da numerosi regolatori proangiogenici fra i quali gioca un ruolo determinante il fattore di crescita dell’endotelio vascolare VEGF-A. Obiettivi dello studio: Lo scopo del presente studio è di analizzare l’associazione tra alcuni SNPs del gene VEGF-A nei pazienti arruolati e l’efficacia del trattamento con l’anticorpo monoclonale ranibizumab diretto contro i fattori di crescita dell’endotelio vascolare. Pazienti e metodi: Sono stati attualmente arruolati 64 pazienti al di sopra dei 65 anni ai quali è stata diagnosticata una DMS di tipo umido avvalendosi di fluoroangiografia con indocianina e fluoresceina e OCT (tomografia a coerenza ottica). È stata valutata la risposta funzionale completa dopo il trattamento che comprende la misurazione dell’acuità visiva (espressa in numero di lettere ed eseguita con tavole ETDRS). È stato eseguito un prelievo di 5 ml di sangue intero dal quale è stato estratto il DNA genomico utilizzando QIAamp DNA Blood Mini Kit (Qiagen). I pazienti sono stati sottoposti a trattamento con ranibizumab, un anticorpo monoclonale anti-VEGF-A. Sono stati analizzati 2 polimorfismi a singolo nucleotide presenti sul gene del VEGF-A, che sembrerebbero essere responsabili della variabile produzione della sua proteina. I polimorfismi presi in esame sono -2578 A/C e -1154 A/G; è stata eseguita la discriminazione allelica in Real-Time PCR su piattaforma Taqman. I risultati ottenuti sono stati analizzati usando il software GraphPad Prism (versione 5.0; GraphPad Prism Software Inc., San Diego, CA, USA). L’equilibrio di Hardy-Weinberg e il test di linkage disequilibrium tra i loci è stato calcolato usando PHASE e Arlequin version 3.1. Risultati: Ranibizumab è risultato significativamente più efficace in termini di migliore acuità visiva in pazienti portatori di allele VEGF-A-2578C (6,26-7,44 ETDRS lettere), mentre nei pazienti portatori del genotipo VEGF-A-2578AA non e’ stata rilevata una risposta funzionale precoce a ranibizumab (-1,78 ETDRS lettere, p = 0,0192). Conclusioni: In conclusione possiamo affermare che lo SNP -2578A/C del VEGF-A puo’ essere considerato un marker farmacogenetico per predire la risposta precoce al ranibizumab intravitreale. Studi clinici futuri dovrebbero essere condotti al fine di validare i dati presentati in questo studio

Attività antiangiogenica/antitumorale della combinazione di axitinib e irinotecano

L’adenocarcinoma pancreatico è una delle principali cause di morte per cancro e, nonostante l'introduzione di nuovi farmaci chemioterapici come irinotecano, un inibitore della topoisomerasi I, rappresenta un problema chemioterapico importante. Axitinib, un nuovo inibitore tirosin-chinasico del recettore VEGFR-2, è stato utilizzato con successo in vivo per inibire la crescita tumorale. Studi di combinazione non sono ancora stati effettuati per migliorare l'attività antiangiogenica/antitumorale di questo composto nel tumore del pancreas. Obiettivo dello studio. Lo scopo dello studio è dimostrare l'attività sinergica antiproliferativa e proapoptotica di irinotecano e axitinib in vitro e il miglioramento degli effetti in vivo sull’ angiogenesi e nel tumore al pancreas. Materiali e metodi. Gli esperimenti sulla proliferazione cellulare e il test sull’apoptosi sono stati eseguiti su cellule umane endoteliali del microcircolo del derma e su linee cellulari tumorali di pancreas (MIAPaCa-2, Capan-1) esposte a SN-38, il metabolita attivo di irinotecano, axitinib, o la loro combinazione simultanea per 72 ore. La fosforilazione di ERK1/2 e di Akt, e la concentrazione del fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF), del recettore 2 del VEGF, e della trombospondina-1 (TSP-1) sono stati misurati con test ELISA. L’espressione genica di ATP7A e ABCG2 è stata eseguita con real-time polymerase chain reaction e le concentrazioni intracellulari di SN-38 sono state misurate con l’analisi di cromatografia liquida ad alte prestazioni. Gli xenotrapianti di cellule Capan-1 in topi nudi sono stati trattati con irinotecano e axitinib da soli o in combinazione simultanea. Risultati. Un forte effetto sinergico sull’attività antiproliferativa e proapoptotica è stata riscontrata con la combinazione axitinib/SN-38 sulle cellule endoteliali e tumorali. La fosforilazione di ERK1/2 e di Akt è stata significativamente inibita da differenti concentrazioni dei farmaci in combinazione, in tutte le linee cellulari. Il trattamento con axitinib e SN-38 in combinazione ha determinato una forte inibizione dell'espressione genica di ATP7A e ABCG2 nelle cellule endoteliali e tumorali, aumentando la concentrazione di SN-38 intracellulare. Inoltre, la secrezione TSP-1 è aumentata nelle cellule trattate con entrambi i farmaci, mentre i livelli di VEGFR-2 sono significativamente diminuiti. Negli esperimenti in vivo la somministrazione simultanea dei due farmaci in combinazione ha determinato una regressione quasi completa dei tumori e della neovascolarizzazione tumorale. Conclusioni. I risultati in vitro mostrano le proprietà altamente sinergiche della combinazione simultanea di irinotecano e axitinib sulle cellule endoteliali e sulle cellule tumorali di pancreas, suggerendo una possibile traslazione di questo trattamento in clinica

Interactions between calliphoridae dipters and Helicodiceros muscivorus

This article reports on the experimental results of a research programme dealing with the reproductive strategies of Helicodiceros muscivorus (L. fil.) Engler(Araceae: Aroideae). In particular, the role played by the odorous mixture emanated by the vegetable species as olfactory information received by the insects, and the importance of that specific biological activity in governing the behavioural choices made by the pollinating insects is studied

A New Biometric Tool for Three-Dimensional Subcutaneous Tumor Scanning in Mice

To propose an innovative methodology for the monitoring of the evolution of induced subcutaneous tumors in mice. Materials and Methods: A new 3D scannerable to measure the tumor mass volume is presented. The scanner is based on the projection of a fringe pattern onto the sample surface (structured light). The lines are diffused by the sample and then collected by a digital camera. The obtained 2D-image is treated by the scanner’s software thatextracts the 3D information and evaluates the samplevolume. Results: The 3D scanner has been successfully used in the measurement of subcutaneous HT-29 colorectal cancer xenografts treated with 5-fluorouracil, bevacizumab and their combination. Comparison with simple caliper measurements revealed important and significant differences between the two measurement techniques. Conclusion: The proposedmethodology is more effective than the usual approach basedon caliper measurements.The efficacy of a new anticancer drug should be alwaysverified by means of the so-called experimental model of the disease, where the characteristics of the disease are recreated in cell cultures, grown in the laboratory (in vitromodels) orin laboratory animals (in vivo models) (1). Considering the latter case, tumors may be induced in mice by subcutaneous injection of human tumor cells. Subcutaneous human tumor xenograft models are widely used because they recapitulate many aspects of the biology of human tumors, including sensitivity to anticancer agents (2). Once cancer cells areinoculated, the researchers carry out treatment with the anticancer drug and follow the daily evolutions in the shape and in volume of the tumor. The tumor mass volume of treated and non-treated mice must be statistically compared in order to assess the reliability of the treatment. The testin gof human tumors in subcutaneous sites have provided relevant and predictive information to the clinic. In fact,every clinically-approved anticancer drug was tested usingthis model, and showed significant antitumor effects beforeentering early-phase clinical trials (2).Although some experimental devices are available for the measurement of tumor volume from 3-dimensional images(computed axial tomography, positron-emission tomography,and magnetic resonance imaging), these systems are primarily designed for biological, chemical, and functionalstudies of animal models (3). As well-stated by Girit and colleagues, these devices usually require many preparative efforts and expensive materials (radioactive sources, contrastagents, and fluorescent chemicals), thus their use is notpractical for animal testing facilities (4).On the basis of these considerations, in partnership withPOEMA (Progettazioni Opto-Elettroniche MetrologiaAvanzata; Cagliari, Italy; www.poemaonline.eu), we developed an innovative small non-contact device (3Dscanner) capable of rapid, highly reproducible measurements of subcutaneous tumor volumes in mice. We outline the prototype characteristics, describing hardware and software features, and give some practical examples of its use

Clinical, pharmacokinetic and pharmacodynamic evaluations of metronomic UFT and cyclophosphamide plus celecoxib in patients with advanced refractory gastrointestinal cancers

Aims. To evaluate UFT and cyclophosphamide (CTX) based metronomic chemotherapy plus celecoxib (CXB) for the treatment of patients with heavily pre-treated advanced gastrointestinal malignancies. Methods. Thirty-eight patients received 500 mg/mq2 CTX i.v bolus on day 1 and, from day 2, 50 mg/day CTX p.o. plus 100 mg/twice a day UFT p.o. and 200 mg/twice a day CXB p.o. Tegafur, 5-FU, 5-FUH2, GHB and uracil pharmacokinetics were assessed. Plasma vascular endothelial growth factor (VEGF), soluble VE-cadherin (sVE-C) and thrombospondin-1 (TSP-1) levels were detected by ELISA and real-time PCR of CD133 gene expression on peripheral blood mononuclear cell was also performed. Results Seventeen patients (45%) obtained stable disease (SD) with a median duration of 5.8 ms (range, 4.2–7.4). Median progression free survival (PFS) and overall survival (OS) were 2.7 ms (95% CI, 1.6–3.9 ms) and 7.1 ms (95% CI, 4.3–9.9 ms), respectively. No toxicities of grade >1 were observed. Pharmacokinetics of 27 patients (13/14, SD/progressive disease, PD) after the first treatment of UFT revealed that 5-FU AUC and Cmax values greater than 1.313 h x microg/ml and 0.501 microg/ml, respectively, were statistically correlated with stabilization of disease and prolonged PFS/OS. VEGF and sVE-C plasma levels were greater in the PD group when compared to SD group. CD133 expression increased only in the PD patients. Conclusion. Metronomic UFT and CTX with CXB in heavily pre-treated gastrointestinal patients were well tolerated and associated with interesting activity. Potential predictive pharmacokinetic parameters and pharmacodynamic biomarkers have been found

First-line metronomic chemotherapy in a metastatic model of spontaneous canine tumours: a pilot study

No abstract availabl

Irinotecan Synergistically Enhances the Antiproliferative and Proapoptotic Effects of Axitinib In Vitro and Improves Its Anticancer Activity In Vivo1

To demonstrate the synergistic antiproliferative and proapoptotic activity of irinotecan and axitinib in vitro and the improvement of the in vivo effects on angiogenesis and pancreatic cancer.Proliferation and apoptotic assays were performed on human dermal microvascular endothelial cells and pancreas cancer (MIAPaCa-2, Capan-1) cell lines exposed to SN-38, the active metabolite of irinotecan, axitinib, or their simultaneous combination for 72 hours. ERK1/2 and Akt phosphorylation, the vascular endothelial growth factor (VEGF), VEGF receptor-2, and thrombospondin-1 (TSP-1) concentration were measured by ELISAs. ATP7A and ABCG2 gene expression was performed with real-time polymerase chain reaction and SN-38 intracellular concentrations were measured by high-performance liquid chromatography. Capan-1 xenografts in nude mice were treated with irinotecan and axitinib alone or in simultaneous combination.A strong synergistic effect on antiproliferative and proapoptotic activity was found with the axitinib/SN-38 combination on endothelial and cancer cells. ERK1/2 and Akt phosphorylation were significantly inhibited by lower concentrations of the combined drugs in all the cell lines. Axitinib and SN-38 combined treatment greatly inhibited the expression of the ATP7A and ABCG2 genes in endothelial and cancer cells, increasing the SN-38 intracellular concentration. Moreover, TSP-1 secretion was increased in cells treated with both drugs, whereas VEGFR-2 levels significantly decreased. In vivo administration of the simultaneous combination determined an almost complete regression of tumors and tumor neovascularization.In vitro results show the highly synergistic properties of simultaneous combination of irinotecan and axitinib on endothelial and pancreas cancer cells, suggesting a possible translation of this schedule into the clinics

The rs2071559 AA VEGFR-2 Genotype Frequency Is Significantly Lower in Neovascular Age-Related Macular Degeneration Patients

In this prospective, case-control genetic study, 120 consecutive neovascular age-related macular degeneration (AMD) cases and 78 controls were enrolled. Two SNPs (rs2071559 and rs1870377) of VEGF-A receptor-2 (VEGFR-2) gene were analyzed with the technique of Real-Time PCR to investigate a genetic link between AMD and VEGFR-2 gene polymorphisms in Italian patients. The frequency of the VEGFR-2 genotype rs2071559 AA was significantly lower (18.33%) in patients with AMD than in the control subjects (34.62%; P=0.0095, chi-square test; Pcorr=0.038; OR=0.42, 95% CI 0.22 to 0.82). In conclusion, although with the limitations of a small sample size and the few SNPs studied, this study demonstrates a lower frequency of VEGFR-2 rs2071559 AA genotype in an AMD patient population, suggesting future studies on the role VEGFR-2 SNPs