Brucella neotomae Infection in Humans, Costa Rica

Several species of Brucella are known to be zoonotic, but B. neotomae infection has been thought to be limited to wood rats. In 2008 and 2011, however, B. neotomae was isolated from cerebrospinal fluid of 2 men with neurobrucellosis. The nonzoonotic status of B. neotomae should be reassessed

Estudiando el papel de los neutrófilos polimorfonucleares en la brucelosis

Las enfermedades infecciosas pueden clasificarse en dos grandes grupos: las agudas y las crónicas. Las bacterias que inducen cuadros crónicos, son en general parásitos intracelulares que tienen tiempos de incubación largos y que no causan síntomas aparentes al inicio de la enfermedad. Dentro de este segundo grupo se encuentran las brucelas, bacterias que se replican durante largo tiempo dentro de las células de su hospedero y que causan abortos en los animales y brucelosis en los seres humanos. El principal hallazgo de nuestras investigaciones fue descubrir que las brucelas se comportan como patógenos furtivos, capaces de pasar desapercibidos por el sistema inmune innato. En este sentido, se descubrió que varias de las estructuras de la superficie de las brucelas están modificadas. Lo anterior hace que estos microorganismos sean “invisibles” para las células del sistema inmune innato y por tanto no sean reconocidas. Esto les permite instalarse, replicarse, expandirse y dispersarse antes de que el sistema inmune adaptativo las reconozca. Como los neutrófilos son la primera la línea de defensa celular del organismo, estudiamos su papel durante la brucelosis. Uno de los hallazgos fundamentales, es que los neutrófilos no solo son incapaces de eliminar a las brucelas, sino que su intervención ocurre de manera inesperada en los momentos tardíos de la infección. Específicamente, descubrimos que los neutrófilos intervienen negativamente en la regulación del sistema inmune adaptativo y que las brucelas inducen la muerte prematura de estas células, mermando aún más la participación de la inmunidad innata en la brucelosis.Infectious diseases can be classified into two groups: acute and chronic. Bacteria causing chronic conditions are generally intracellular parasites with long incubation periods producing no apparent symptoms at the onset of infection. Within this second group are Brucella organisms. These bacteria replicate inside host cells and cause abortions in animals and brucellosis in humans. The main finding of our research was to discover that Brucellabehave as a stealth pathogen, able to go unnoticed by the innate immune system. In this regard, we discovered that a number of surface structures are modified in Brucella organisms. This makes Brucella «invisible» to the cells of the innate immune system and therefore not fully recognized. This allows Brucella to colonize, replicate, and disperse throughout the organism before the adaptive immune system recognize them. Since neutrophils are the first line of cellular defense, we studied their role during brucellosis infection. The main findings are that neutrophils are not only unable to kill Brucella, but surprisingly they participate later times of infection. Specifically, we found that neutrophils are negatively involved in regulating the adaptive immune system and that they induce premature death of these cells, weakening the participation of innate immunity in brucellosis.Escuela de Medicina Veterinari

The role of neutrophils in Brucellosis

Brucellosis is a bacterial disease of domestic animals and humans. The pathogenic ability of Brucella organisms relies on their stealthy strategy and their capacity to replicate within host cells and to induce long-lasting infections. Brucella organisms barely induce neutrophil activation and survive within these leukocytes by resisting microbicidal mechanisms. Very few Brucella-infected neutrophils are found in the target organs, except for the bone marrow, early in infection. Still, Brucella induces a mild reactive oxygen species formation and, through its lipopolysaccharide, promotes the premature death of neutrophils, which release chemokines and express “eat me” si nals. This effect drives the phagocytosis of infected neutrophils by mononuclear cells that become thoroughly susceptible to Brucella replication and vehicles for bacterial dispersion. The premature death of the infected neutrophils proceeds without NETosis, necrosis/oncosis, or classical apoptosis morphology. In the absence of neutrophils, the Th1 response exacerbates and promotes bacterial removal, indicating that Brucella-infected neutrophils dampen adaptive immunity. This modulatory effect opens a window for bacterial dispersion in host tissues before adaptive immunity becomes fully activated. However, the hyperactivation of immunity is not without a price, since neutropenic Brucella-infected animals develop cachexia in the early phases of the disease. The delay in the immunological response seems a sine qua non requirement for the development of long-lasting brucellosis. This property may be shared with other pathogenic alphaproteobacteria closely related to Brucella. We propose a model in which Brucella-infected polymorphonuclear neutrophils (PMNs) function as “Trojan horse” vehicles for bacterial dispersal and as modulators of the Th1 adaptive immunity in infection.La brucelosis es una enfermedad bacteriana de los animales domésticos y los humanos. La capacidad patógena de los organismos Brucella depende de su estrategia sigilosa y de su capacidad de replicarse dentro de las células huéspedes y de inducir infecciones de larga duración. Los organismos Brucella apenas inducen la activación de neutrófilos y sobreviven dentro de estos leucocitos resistiendo a los mecanismos microbicidas. Muy pocos neutrófilos infectados por Brucella se encuentran en los órganos diana, excepto en la médula ósea, al principio de la infección. Aún así, Brucella induce una leve formación de especies reactivas de oxígeno y, a través de su lipopolisacárido, promueve la muerte prematura de los neutrófilos, que liberan quimiocinas y expresan "cómeme" si nals. Este efecto impulsa la fagocitosis de los neutrófilos infectados por parte de las células mononucleares que se vuelven completamente susceptibles a la replicación de Brucella y vehículos para la dispersión bacteriana. La muerte prematura de los neutrófilos infectados procede sin NETosis, necrosis/oncosis, o morfología de apoptosis clásica. En ausencia de neutrófilos, la respuesta Th1 exacerba y promueve la eliminación de bacterias, lo que indica que los neutrófilos infectados por Brucella amortiguan la inmunidad adaptativa. Este efecto modulador abre una ventana para la dispersión bacteriana en los tejidos del huésped antes de que la inmunidad adaptativa se active completamente. Sin embargo, la hiperactivación de la inmunidad no está exenta de precio, ya que los animales neutropénicos infectados por Brucella desarrollan caquexia en las primeras fases de la enfermedad. El retraso en la respuesta inmunológica parece ser un requisito sine qua non para el desarrollo de la brucelosis de larga duración. Esta propiedad puede compartirse con otras alfaproteobacterias patógenas estrechamente relacionadas con la Brucella. Proponemos un modelo en el que los neutrófilos polimorfonucleares (PMN) infectados por Brucella funcionan como vehículos del "caballo de Troya" para la dispersión bacteriana y como moduladores de la inmunidad adaptativa Th1 en la infección.Universidad Nacional, Costa RicaEscuela de Medicina Veterinari

Determination of streptomycin and doxycycline using LC/MS towards an effective treatment against an experimental Brucella abortus infection in mice

The authors would like to thank the Costa Rican National Council of Provosts who partially funded this research (grant FEES-CONARE, 803- C2-651/SIA0492-21)(https://www.conare.ac.cr) and fellowship support for Eugenia Sancho from the Master’s Programme in Microbiology, University of Costa Rica.Herein we described a versatile liquid chromatographic method for detection and quantification of the total levels of two antimicrobials [i.e., streptomycin (STM) and doxycycline (DOX)], in mice plasma and selected tissues, with the aid of a single quadrupole as a detection method. The method included a few sample preparation steps, including freeze-drying and in situ triphasic solvent-assisted defatting, precipitation, and extraction, allowing easy and fast tissue sample processing and avoiding analyte loss. Using a murine model, we demonstrated that mass spectrometry detects simultaneously and with high specificity two of the most widespread antimicrobials used against Brucellosis. An accurate [recoveries varied from 75.23 (bone marrow) to 101.33% (liver)] and sensitive (LoD in the ng g− 1 range) method to assess STM and DOX in murine tissue, including subtherapeutic and therapeutic doses of the antimicrobials, was achieved. This validated method can be successfully used to monitor the depletion of STM and DOX in several mice tissues and plasma during metabolism after administration.Aquí describimos un método versátil de cromatografía líquida para la detección y cuantificación de los niveles totales de dos antimicrobianos [es decir, la estreptomicina (STM) y la doxiciclina (DOX)] en el plasma de los ratones y en una selección de ellos. de dos antimicrobianos [es decir, estreptomicina (STM) y doxiciclina (DOX)], en el plasma de ratones y en tejidos tejidos seleccionados, con la ayuda de un cuadrupolo único como método de detección. El método incluía unos pocos pasos de preparación de la muestra pasos de preparación de la muestra, incluida la liofilización y el desengrasado, la precipitación y la extracción in situ asistidos por disolventes, permitiendo un procesamiento fácil y rápido de las muestras de tejido y evitando la pérdida de analitos. Utilizando un modelo murino, demostramos que la espectrometría de masas detecta simultáneamente y con alta especificidad dos de los antimicrobianos más extendidos antimicrobianos utilizados contra la brucelosis. Un método preciso [las recuperaciones variaron entre el 75,23 (médula ósea) y el 101,33% (hígado)] y sensible (LoD en el rango de ng g- 1) para evaluar STM y DOX en tejido murino, incluyendo se lograron dosis subterráneas y terapéuticas de los antimicrobianos. Este método validado se puede utilizar con éxito para controlar el agotamiento de STM y DOX en varios tejidos de ratones y en el plasma durante el metabolismo después de la administración.FEES-CONAREUniversidad de Costa RicaUniversidad Nacional, Costa RicaEscuela de Medicina Veterinari

Salmonella contamination risk points in broiler carcasses during slaughter line processing

Salmonella is one of the foodborne pathogens most commonly associated with poultry products. The aim of this work was to identify and analyze key sampling points creating risk of Salmonella contamination in a chicken processing plant in Costa Rica and perform a salmonellosis risk analysis. Accordingly, the following examinations were performed: (i) qualitative testing (presence or absence of Salmonella), (ii) quantitative testing (Salmonella CFU counts), and (iii) salmonellosis risk analysis, assuming consumption of contaminated meat from the processing plant selected. Salmonella was isolated in 26% of the carcasses selected, indicating 60% positive in the flocks sampled. The highest Salmonella counts were observed after bleeding (6.1 log CFU per carcass), followed by a gradual decrease during the subsequent control steps. An increase in the percentage of contamination (10 to 40%) was observed during evisceration and spray washing (after evisceration), with Salmonella counts increasing from 3.9 to 5.1 log CFU per carcass. According to the prevalence of Salmonella-contaminated carcasses released to trade (20%), we estimated a risk of 272 cases of salmonellosis per year as a result of the consumption of contaminated chicken. Our study suggests that the processes of evisceration and spray washing represent a risk of Salmonella cross-contamination and/ or recontamination in broilers during slaughter line processing.La salmonela es uno de los patógenos de origen alimentario más comúnmente asociados a los productos avícolas. El objetivo de este trabajo fue identificar y analizar los puntos clave de muestreo que crean el riesgo de contaminación por Salmonella en una planta de procesamiento de pollos en Costa Rica y realizar un análisis de riesgo de salmonelosis. En consecuencia, se realizaron los siguientes exámenes: i) Prueba cualitativa (presencia o ausencia de Salmonella), ii) Prueba cuantitativa (recuento de Salmonella-CFU) y iii) Análisis de riesgo de salmonelosis, suponiendo el consumo de carne contaminada de la planta de procesamiento seleccionada. Se aisló la Salmonella en el 26% de las canales seleccionadas, lo que indica que el 60% de las manadas muestreadas son positivas. Los recuentos más altos de Salmonella se observaron después de la hemorragia (6,1 logCFU por canal), seguidos de una disminución gradual durante las etapas de control posteriores. Se observó un aumento del porcentaje de contaminación (10 a 40%) durante la evisceración y el lavado por aspersión (después de la evisceración), con un aumento de los recuentos de salmónidos de 3,9 a 5,1 log de UFC por canal. Según la prevalencia de canales contaminadas con Salmonella liberadas al comercio (20%), estimamos un riesgo de 272 casos de salmonelosis por año como resultado del consumo de pollos contaminados. Nuestro estudio sugiere que los procesos de evisceración y lavado por aspersión representan un riesgo de contaminación cruzada con Salmonella y/o recontaminación en pollos de engorde durante el procesamiento de la línea de sacrificio.Escuela de Medicina Veterinari

Effect of the use of probiotic Bacillus subtilis (QST 713) as a growth promoter in broilers: an alternative to bacitracin methylene disalicylate

The global poultry trend toward the more responsible use of antibiotics is becoming recurrent and has demanded the need to generate new natural alternatives. Probiotics have gained importance as an option to use as growth promoters. This study aimed to evaluate Bacillus subtillis QST713 as a substitute for an antibiotic growth promoter (BMD). A total of 150 male broilers were assigned to three dietary treatments: 1) control diet (CO), 2) control diet + 500 g/t of BMD (AGP), and 3) control diet + 100 g/t of B. subtilis QST713 (PB), respectively. Each treatment was monitored for 5 wk for the productive variables: body weight, accumulated feed consumption, food conversion, and European efficiency factor. At the end of each week, fresh fecal samples were cultured and quantified for E. coli, Enterococcus spp., and Lactobacillus spp. At the end of the trial, blood samples were analyzed for hemogram and intestinal samples (anterior portion) for histomorphometry. The data were statistically analyzed with an analysis of variance and subjected to a least significant difference test (Tukey). The zootechnical yields were similar in the AGP and PB groups (P ˃ 0.05); both superior to the control group. In the hematological profiles, no difference was observed between the experimental groups. E. coli and Enterococcus counts were significantly lower (P ˂ 0.05), and Lactobacillus counts were significantly (P ˂ 0.05) higher in the PB group, relative to CO and AGP groups. No differences (P ˃ 0.05) were found in bacterial counts between the CO and AGP groups. The intestinal mucosa and villi in the PB group were significantly (P ˂ 0.05) longer and with less deeper crypts than CO and AGP groups. We conclude that B. subtillis QST713, used at the suggested commercial dose (100 g/ton), is an effective growth-promoting alternative to BMD that modulates the microbiota and intestinal architecture, thus producing zootechnical yields consistent with BMD.La tendencia mundial de la avicultura hacia el uso más responsable de los antibióticos es cada vez más recurrente y ha exigido la necesidad de generar nuevas alternativas naturales. Los probióticos han ganado importancia como una opción para utilizar como promotores del crecimiento. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el Bacillus subtillis QST713 como sustituto de un antibiótico promotor del crecimiento (BMD). Un total de 150 pollos machos fueron asignados a tres tratamientos dietéticos: 1) dieta de control (CO), 2) dieta de control + 500 g/t de BMD (AGP), y 3) dieta de control + 100 g/t de B. subtilis QST713 (PB), respectivamente. Cada tratamiento fue monitorizado durante 5 semanas para las variables productivas: peso peso corporal, consumo acumulado de alimento, conversión alimenticia y factor de eficiencia europeo. Al final de cada semana, se cultivaron muestras fecales frescas y se cuantificaron para E. coli, Enterococcus spp. y Lactobacillus spp. Al final del ensayo, se analizaron muestras de sangre para el hemograma y muestras intestinales (porción anterior) para la histomorfometría. Los datos se analizaron estadísticamente estadísticamente con un análisis de la varianza y se sometieron a una prueba de mínima diferencia significativa (Tukey). Los rendimientos zootécnicos fueron similares en los grupos AGP y PB (P ˃ 0,05); ambos superiores al grupo de control. En los perfiles hematológicos, no se observaron diferencias entre los grupos experimentales. Los recuentos de E. coli y Enterococcus fueron significativamente menores (P ˂ 0,05), y Los recuentos de Lactobacillus fueron significativamente (P ˂ 0,05) más altos en el grupo PB, en relación con los grupos CO y AGP y AGP. No se encontraron diferencias (P ˃ 0,05) en los recuentos bacterianos entre los grupos CO y AGP. La mucosa intestinal y las vellosidades del grupo PB eran significativamente (P ˂ 0,05) más largas y con criptas menos profundas que los grupos CO y AGP. Concluimos que B. subtillis QST713, utilizado a la dosis comercial sugerida (100 g/tonelada), es una alternativa eficaz para promover el crecimiento de la DMO que modula la microbiota y la arquitectura intestinal, produciendo así rendimientos zootécnicos consistentes con la DMO.Escuela de Medicina Veterinari

Bacterial counts in spleen

Bacterial loads can be determined as colony forming units (CFU) at any point of the infection by culturing spleen homogenates on agar plates. This is a reliable method for comparing the kinetics of infection in various mouse strains, estimating the virulence of different bacterial mutants or isolates and for vaccine testing and vacine estandarization. Although this method has been designed to recover Brucella or Salmonella organisms from spleen, the procedure may be applicable for other bacteria such as Listeria and Mycobacterium as well as to count bacterial loads in other organs such as liver or lymph nodes.Las cargas bacterianas pueden determinarse como unidades formadoras de colonias (CFU) en cualquier punto de la infección por el cultivo de bazo homogeneizado en placas de agar. Este es un método fiable para comparar la cinética de la infección en varias cepas de ratones, estimando la virulencia de diferentes bacterias mutantes o aislados y para la prueba de vacunas y la estandarización de las mismas. Aunque este método tiene ha sido diseñado para recuperar los organismos Brucella o Salmonella del bazo, el procedimiento puede ser aplicable para otras bacterias como Listeria y Mycobacterium, así como para contar las bacterias cargas en otros órganos como el hígado o los ganglios linfáticosUniversidad Nacional, Costa RicaEscuela de Medicina Veterinari

Estandardização de um protocolo de caraterização molecular para a identificação de espécie de cepas terrestres do gênero brucella

La brucelosis es la enfermedad zoonótica más extendida en el mundo que afecta diversos animales, incluyendo especies domésticas y de vida silvestre. Es causada por una bacteria perteneciente al género Brucella, el cual incluye nueve especies distintas e infectantes de mamíferos terrestres y marinos. Cada especie de Brucella presenta variaciones en la secuencia de ADN que afectan a los nucleótidos en una posición específica del genoma. A estas variaciones se les llama polimorfismo. El polimorfismo de las especies de Brucella localizado en los genes que codifican para las proteínas glk, omp25ytrpE, se utilizó para desarrollar un ensayo múltiple basado en la extensión de cebadores, el cual permite identificar un aislamiento como miembro de una de las nueve especies reconocidas. Los métodos tradicionales para la identificación de Brucella a nivel de especie consumen mucho tiempo y ponen en riesgo al personal laboratorial. Es por ello que la finalidad de este trabajo es evitar la ambigüedad, agilizar el procedimiento, disminuir el tiempo de respuesta y generar una herramienta laboratorial más efectiva para mejorar la vigilancia epidemiológica, el diagnóstico y el abordaje de la brucelosis en Costa Rica. El siguiente trabajo presenta la estandarización del protocolo para la extracción de ADN de Brucella, así como de una serie de amplificaciones de fragmentos de genes de interés por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y la estandarización de la reacción de extensión de cebadores.Brucellosis is the most widespread zoonotic disease worldwide that affects various animals, including domestic species and wildlife. It is caused by bacteria belonging to the genus Brucella, which includes nine different species and infective terrestrial and marine mammals. Each species of Brucella has variations in DNA sequence involving nucleotides in a specific position in the genome. These variations are called polymorphisms The polymorphism of Brucella species located in the genes coding for proteins glk, omp25, and trpE was used to develop a multiplex assay based on primer extension, with which it can identify an isolate as a member of nine recognized species. Traditional methods for identification of Brucella at the species level, time consuming and endanger laboratory staff. That is why the aim of this work is to avoid ambiguity, to streamline the procedure, reduce the response time and generate a more effective laboratory tool for improving epidemiological surveillance, diagnosis and approach of brucellosis in Costa Rica. This paper presents the standardization of the protocol for DNA extraction of Brucella, the standardization of a series of amplifications of fragments of genes of interest through the chain reaction (PCR) and standardization of the extension reaction primers.Brucelose é a doença zoonótica mais distribuída por todo o mundo e que afeta várias espécies animais incluindo espécies domésticas e selvagens. É causada por uma bactéria pertencente ao género Brucella que inclui nove espécies diferentes e é infectante para mamíferos terrestres e marinhos. Cada espécie de Brucella tem variações na sequência de DNA envolvendo os nucleótidos de uma posição especifica do genoma. Estas variações são chamadas polimorfismos. O polimorfismo das espécies de Brucella localizado no código genético para proteínas glk, omp25 e trpE foi utilizado para desenvolver um ensaio múltiplo baseado na primeira extensão, com a qual se pode identificar e isolar como membro de uma das 9 espécies. Os métodos tradicionais para identificação de Brucella ao nível da espécie, consomem muito tempo e põe em risco o pessoal de laboratório. É por isso que o objectivo deste trabalho é evitar a ambiguidade, agilizar o procedimento, reduzir o tempo de resposta e gerar uma ferramenta laboratorial mais efectiva para melhorar a vigilância epidemiológica, diagnostico e aproximação à brucelose na Costa Rica. Este artigo, apresenta a estandardização do protocolo para extracção de DNA de Brucella, estandardização de uma série de amplificações de fragementos genéticos de interesse através da reacção de polimerase em cadeia (PCR) e estandardização da reacção dos primers de extensão.Universidad Nacional, Costa RicaEscuela de Medicina Veterinari

Role of Clostridium perfringens toxins in necrotic enteritis in poultry

Poultry products represent over 30% of animal protein consumption worldwide, and its demand is growing considerably. The current global annual production of poultry meat and eggs is more than 115 million tons and 70 million tons, respectively. Necrotic enteritis (NE) in poultry is a reemerging infectious disease caused by certain strains of Clostridium perfringens. This bacterium is found in limited quantities as a normal inhabitant of the birds’ gut; however, under certain circumstances, a pathogenic strain proliferates and secretes a variety of bacteriocins, mucins, and adhesins that favors bacteria colonization and establishment. Once bacterial population reaches a certain density, toxin production is triggered which induces mucosal damage. NE generates a dramatic reduction of production levels and a significant increase in mortality in flocks of broilers and laying hens, leading to annual economic losses for the poultry industry estimated to be over $6 billion. NE may manifest as an acute or chronic enterotoxemia. Acute infection is associated with higher rates of mortality and chronic infection, with loss of weight and productivity in sick animals. There is evidence that immunization with formalin-inactivated crude supernatants, native or modified toxins, or other proteins induces partial protection against NE. This review summarizes the findings concerning virulence factors associated with NE pathogenesis and the efforts oriented to develop rational strategies to prevent and control this diseaseLos productos avícolas representan más del 30% del consumo de proteína animal en todo el mundo, y su demanda está creciendo considerablemente. La actual producción mundial anual de carne y huevos de ave es de más de 115 millones de toneladas y 70 millones de toneladas, respectivamente. La enteritis necrótica (EN) en las aves de corral es una enfermedad infecciosa reemergente causada por ciertas cepas de Clostridium perfringens. Esta bacteria se encuentra en cantidades limitadas como habitante normal del intestino de las aves; sin embargo, en determinadas circunstancias, una cepa patógena prolifera y secreta una variedad de bacteriocinas, mucinas y adherencias que favorece la colonización y el establecimiento de la bacteria. Una vez que la población bacteriana alcanza una cierta densidad, se desencadena la producción de toxinas que induce el daño de la mucosa. El NE genera una reducción drástica de los niveles de producción y un aumento significativo de la mortalidad de los pollos de engorde y las gallinas ponedoras, lo que provoca pérdidas económicas anuales para la industria avícola que se estiman en más de 6.000 millones de dólares. La NE puede manifestarse como una enterotoxemia aguda o crónica. La infección aguda se asocia con tasas más altas de mortalidad e infección crónica, con pérdida de peso y productividad en los animales enfermos. Hay pruebas de que la inmunización con sobrenadantes crudos inactivados con formol, toxinas nativas o modificadas u otras proteínas induce una protección parcial contra el NE. Esta revisión resume los hallazgos relativos a los factores de virulencia asociados con la patogénesis de la enfermedad neurológica y los esfuerzos orientados a desarrollar estrategias racionales para prevenir y controlar esta enfermedad.CONICIT (FI-034B-14), FEES CONARE y la Vicerrectoría de Investigación de la Universidad de Costa Rica (becas 741-B5-504 y 741-B5-656).Escuela Medicina Veterinari

Human neutrophils are resistant to Clostridioides difficile toxin B

This research was partially supported by FEES-CONARE of Costa Rica (grant 803-C2-651) (www.conare.ac.cr).Objective: The main objective of this study was to evaluate the glucosyltransferase activity of C. difficile TcdB on the activity of human PMNs. Methods: To better understand the interaction between PMNs and TcdB, PMNs were treated with sublethal concentrations of TcdB. We evaluated: (i) the glucosylation of GTPases, (ii) the phagocytic and bactericidal activity, and (iii) PMNs activation (through quantification of TNF-a, IL-8, and expression of CD11b cell surface activation marker). Results: We found that TcdB did not glucosylate RhoA and Rac1 GTPases and did not affect the phagocytic or bactericidal capacity of PMNs. Moreover, TcdB did not increase the production of TNF-a, IL-8, or the expression of activation marker CD11b. The only significant effect of TcdB on PMNs was the partial inhibition of TNF-a and IL-8 production and the diminished expression of CD11b induced by E. coli-LPS. Conclusion: Our results show that human PMNs are resistant to TcdB GTPase glucosyltransferase activity against RhoA and Rac1.Objetivo: El objetivo principal de este estudio fue evaluar la actividad glucosiltransferasa de C. difficile TcdB en la actividad de los PMN humanos. Métodos: Para comprender mejor la interacción entre los PMN y la TcdB, los PMN fueron tratados con concentraciones subletales de TcdB. Se evaluó: (i) la glucosilación de las GTPasas, (ii) la actividad fagocítica y fagocítica y bactericida, y (iii) la activación de los PMN (mediante la cuantificación de TNF-a, IL-8, y la expresión de marcador de activación de la superficie celular CD11b). Resultados: Encontramos que TcdB no glucosila las GTPasas RhoA y Rac1 y no afecta a la capacidad fagocítica fagocítica o bactericida de los PMN. Además, TcdB no aumentó la producción de TNF-a, IL-8 o la expresión del marcador de activación CD11. expresión del marcador de activación CD11b. El único efecto significativo de TcdB sobre los PMN fue la inhibición parcial de la producción de TNF-a e IL-8 y la disminución de la expresión de CD11b inducida por E. coli-LPS. Conclusión: Nuestros resultados muestran que los PMN humanos son resistentes a la actividad GTPasa glucosiltransferasa de TcdB contra RhoA y Rac1.FEES-CONAREUniversidad Nacional, Costa RicaEscuela de Medicina Veterinari