Análisis de polimorfismos de nucleótido simple (SNPs) en genes asociados a la infección por el virus del papiloma humano (VPH) y la progresión neoplásica: un modelo poligénico de susceptibilidad al cáncer cervical

El cáncer de cuello uterino es el séptimo cáncer más frecuente en la población general y el segundo más común entre las mujeres de todo el mundo. Numerosos estudios epidemiológicos y moleculares han establecido al Virus del Papiloma Humano (VPH) como el principal factor etiológico del cáncer cervical. Sin embargo, dada la alta prevalencia de la infección por VPH en la población general respecto de la incidencia del carcinoma cervical, se presume que la sola infección por este virus sería insuficiente para provocar la transformación neoplásica. Las diferencias genéticas del hospedador que influyan en la respuesta contra la infección viral podrían determinar un mayor riesgo de desarrollo de lesiones cervicales y progresión hacia un carcinoma invasor. De esta manera, los polimorfismos genéticos presentes en genes relacionados a la infección viral, a la respuesta inmune, a los sistemas de reparación del ADN y aquellos genes supresores de tumores, podrían influenciar y determinar un riesgo aumentado de desarrollo de la neoplasia cervical. El objetivo del presente trabajo fue determinar el efecto del componente genético en relación a la susceptibilidad de desarrollo de cáncer cervical y la infección por el Virus del Papiloma Humano. Se analizaron un total de 512 muestras cervicales de mujeres de la ciudad de La Plata, las cuales fueron clasificadas histológicamente en: 200 muestras de mucosa cervical normal (PapI/II), 100 Lesiones Intraepiteliales de Bajo Grado (LGSIL), 72 Lesiones Intraepiteliales de Alto Grado (HGSIL) y 140 muestras correspondientes a Carcinomas Cervicales Escamosos (SCC). La presencia de ADN del VPH fue examinada mediante PCR anidada y la genotipificación del virus por PCR-SSCP y PCR-EIA. La genotipificación de los Polimorfismos de Nucleótido Simple (SNPs) presentes en los genes FASL (-844 T/C), IL10 (-1082 G/A), p53 (Arg72Pro), INFG (+ 874 T/A) y RNASEL (Arg462Gln) se llevó a cabo mediante la tecnología de Pirosecuenciación, mientras que el análisis de los SNPs Arg399Gln y Arg194Trp de XRCC1, -308 (G/A) y -238 (G/A) de TNF-α y -670 del gen FAS se realizó utilizando la técnica de PCR-RFLP. La prevalencia de la infección por VPH en el grupo control fue del 36,5%. El tipo viral más prevalente fue el VPH-16 (51,2%). Del total de los controles, el 29,3% correspondió a mujeres mayores a 30 años infectadas con VPH-16 y/o VPH-18. Los polimorfismos presentes en las regiones promotoras de los genes TNF-α (-308 (G/A) y -238 (G/A)), IL-10 (-1082 (G/A)) y FASL (-844 (T/C)), así como el SNP + 874 (T/A) del gen Interferon gamma, no presentaron diferencias entre casos y controles. De manera similar, no hubo asociación entre dichos polimorfismos y la presencia del ADN del VPH. Sin embargo, se registró un incremento significativo en el riesgo de desarrollo de cáncer cervical otorgado por los genotipos homocigota AA del gen FAS (OR=2,25; p=0,035), heterocigota CG del gen p53 (OR=2,43; p=0,004) y el genotipo TT+TC del gen XRCC1 codon 194 (OR=2,26; p=0,02). Por otra parte, los genotipos homocigota AA de RNASEL (OR=0,31; p=0,034) y heterocigota AG de XRCC1 codon 399 (OR=0, 48; p=0,023) otorgaron una menor susceptibilidad frente al desarrollo de la neoplasia cervical. En el caso del gen FAS, el genotipo homocigota AA (OR=2,53; p=0,035) se encontró asociado con un incremento en la susceptibilidad a la infección por VPH. En cuanto a las lesiones cervicales, se observó que tanto el alelo Gln (A) (OR=3,03; p=0,001) como el genotipo homocigota Gln/Gln (AA) (OR=5,34; p=0,000) de XRCCI Arg399Gln otorgaron un incremento significativo en el riesgo de desarrollo de lesiones de bajo grado (LSIL). Por el contrario, el genotipo heterocigota Gln/Arg (AG) de este mismo polimorfismo estuvo asociado con una disminución en el riesgo de desarrollo de este tipo de lesiones (OR=0, 25; p=0,009). Por último, el análisis de los polimorfismos a través del algoritmo MDR reveló que existe una interacción sinérgica entre ellos, presentando el modelo de cuatro-factores (cuatro-loci), conformado por FASL-P53-RNASEL-XRCC1399, una asociación significativa con la neoplasia cervical (TA=0,61; p<0,05). De acuerdo a los resultados obtenidos se observa que la asociación encontrada entre los Polimorfismos de Nucleótido Simple y el carcinoma cervical apoya el rol de la susceptibilidad genética del hospedador en la etiología de esta enfermedad. En base a esto se sugiere que la utilización de estos polimorfismos podría resultar muy conveniente en la identificación de aquellos individuos que se encuentran con mayor riesgo de desarrollo de lesiones cervicales y progresión hacia un carcinoma invasor.Facultad de Ciencias Médica

Regulación de la expresión génica

Los organismos procariotas poseen aproximadamente 4000 genes, de los cuales sólo se expresa una pequeña parte dependiendo del ambiente en el que está creciendo la bacteria. No todos los productos génicos se necesitan de forma simultánea, ni a los mismos niveles. Es por eso, que existe un sistema de regulación que va a permitir, o no, la transcripción y traducción de determinados genes en un momento dado. El control de la síntesis de las macromoléculas se denomina regulación de la expresión génica. Los procariotas deben utilizar parte de su dotación genética para poder adaptarse adecuadamente a su entorno, con el que están estrechamente relacionados y del que son muy dependientes y, de este modo, garantizar su supervivencia. Estos organismos tienen los procesos de transcripción y traducción acoplados, es decir, que se producen uno inmediatamente a continuación del otro. Además, numerosos genes se encuentran organizados en operones, los que están conformados por una unidad regulatoria seguida de varios genes estructurales que dan origen a proteínas, las cuales cumplen funciones relacionadas y presentan una regulación coordinada. Estos genes suelen transcribirse juntos en un solo ARNm, denominado ARNm policistrónico.Facultad de Ciencias Naturales y Muse

XRCC2 R188H (rs3218536), XRCC3 T241M (rs861539) and R243H (rs77381814) single nucleotide polymorphisms in cervical cancer risk

Human Papillomavirus (HPV) is the main cause of cervical cancer and its precursor lesions. Transformation may be induced by several mechanisms, including oncogene activation and genome instability. Individual differences in DNA damage recognition and repair have been hypothesized to influence cervical cancer risk. The aim of this study was to evaluate whether the double strand break gene polymorphisms XRCC2 R188H G>A (rs3218536), XRCC3 T241M C>T (rs861539) and R243H G>A (rs77381814) are associated to cervical cancer in Argentine women. A case control study consisting of 322 samples (205 cases and 117 controls) was carried out. HPV DNA detection was performed by PCR and genotyping of positive samples by EIA (enzyme immunoassay). XRCC2 and 3 polymorphisms were determined by pyrosequencing. The HPV-adjusted odds ratio (OR) of XRCC2 188 GG/AG genotypes was OR = 2.4 (CI = 1.1-4.9, p = 0.02) for cervical cancer. In contrast, there was no increased risk for cervical cancer with XRCC3 241 TT/CC genotypes (OR = 0.48; CI = 0.2-1; p = 0.1) or XRCC3 241 CT/CC (OR = 0.87; CI = 0.52-1.4; p = 0.6). Regarding XRCC3 R243H, the G allele was almost fixed in the population studied. In conclusion, although the sample size was modest, the present data indicate a statistical association between cervical cancer and XRCC2 R188H polymorphism. Future studies are needed to confirm these findings.Fil: Perez, Luis Orlando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; ArgentinaFil: Crivaro, Andrea Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; ArgentinaFil: Barbisan, Gisela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; ArgentinaFil: Poleri, Lucía Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; ArgentinaFil: Golijow, Carlos Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; Argentin

Experiencia del Laboratorio de Genética de Animales Domésticos en la implementación de un sistema de gestión de la calidad

La norma ISO/IEC 17025:2005 IRAM 301, de aplicación voluntaria, permite a los laboratorios de ensayo o calibración, demostrar la competencia de generar resultados técnicamente válidos. El Instituto de Genética Veterinaria tomó como estrategia expandir concepto de calidad. El objetivo fue Diseñar e Implementar un Sistema de Gestión de Calidad en el servicio del Laboratorio de Genética de Animales Domésticos utilizando como guía la Norma ISO/IEC 17025:2005 IRAM 301. Desde el 2012, comenzó la sensibilización del personal en el tema de calidad a través de capacitaciones. En seminarios entre el personal, se diseñó la documentación del SGC e implementó. Entre los logros se destaca: mejoría del entorno de trabajo con distribución de tareas y responsabilidades en las áreas además se acorto el tiempo de entrega de resultados al cliente. Consideramos una experiencia innovadora para un Instituto doble dependencia. La puesta en práctica de un SGC para asegurar los resultados del servicio, requiere además de inversión y capacitación, el compromiso de cada integrante.Trabajo publicado en La calidad en la producción y los servicios: promotora del desarrollo y la innovación. Buenos Aires: IRAM, 2017.Facultad de Ciencias Veterinarias (FCV

Experiencia del Laboratorio de Genética de Animales Domésticos en la implementación de un sistema de gestión de la calidad

La norma ISO/IEC 17025:2005 IRAM 301, de aplicación voluntaria, permite a los laboratorios de ensayo o calibración, demostrar la competencia de generar resultados técnicamente válidos. El Instituto de Genética Veterinaria tomó como estrategia expandir concepto de calidad. El objetivo fue Diseñar e Implementar un Sistema de Gestión de Calidad en el servicio del Laboratorio de Genética de Animales Domésticos utilizando como guía la Norma ISO/IEC 17025:2005 IRAM 301. Desde el 2012, comenzó la sensibilización del personal en el tema de calidad a través de capacitaciones. En seminarios entre el personal, se diseñó la documentación del SGC e implementó. Entre los logros se destaca: mejoría del entorno de trabajo con distribución de tareas y responsabilidades en las áreas además se acorto el tiempo de entrega de resultados al cliente. Consideramos una experiencia innovadora para un Instituto doble dependencia. La puesta en práctica de un SGC para asegurar los resultados del servicio, requiere además de inversión y capacitación, el compromiso de cada integrante.Trabajo publicado en La calidad en la producción y los servicios: promotora del desarrollo y la innovación. Buenos Aires: IRAM, 2017.Facultad de Ciencias Veterinarias (FCV

Experiencia del Laboratorio de Genética de Animales Domésticos en la implementación de un sistema de gestión de la calidad

La norma ISO/IEC 17025:2005 IRAM 301, de aplicación voluntaria, permite a los laboratorios de ensayo o calibración, demostrar la competencia de generar resultados técnicamente válidos. El Instituto de Genética Veterinaria tomó como estrategia expandir concepto de calidad. El objetivo fue Diseñar e Implementar un Sistema de Gestión de Calidad en el servicio del Laboratorio de Genética de Animales Domésticos utilizando como guía la Norma ISO/IEC 17025:2005 IRAM 301. Desde el 2012, comenzó la sensibilización del personal en el tema de calidad a través de capacitaciones. En seminarios entre el personal, se diseñó la documentación del SGC e implementó. Entre los logros se destaca: mejoría del entorno de trabajo con distribución de tareas y responsabilidades en las áreas además se acorto el tiempo de entrega de resultados al cliente. Consideramos una experiencia innovadora para un Instituto doble dependencia. La puesta en práctica de un SGC para asegurar los resultados del servicio, requiere además de inversión y capacitación, el compromiso de cada integrante.Trabajo publicado en La calidad en la producción y los servicios: promotora del desarrollo y la innovación. Buenos Aires: IRAM, 2017.Facultad de Ciencias Veterinarias (FCV

TNF-α and IL-10 promoter polymorphisms, HPV infection, and cervical cancer risk

Although the implication of genetic factors in cervical cancer development remains to be elucidated, accumulative epidemiological evidence suggests that polymorphisms of cytokine genes may be involved in the etiology of cervical carcinoma. Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interleukin-10 (IL-10) are two multifunctional cytokines implicated in inflammation, immunity, and cellular organization, and were proposed to play important roles in cancer biology. In order to determine whether IL-10 -1082 (G/A) and TNF-α -238 (G/A) and -308 (G/A) polymorphisms are associated with susceptibility to cervical cancer, a case-control study of 122 cancer patients and 176 healthy controls was conducted. Cervical samples were genotyped for both TNF-α polymorphisms by PCR-RFLP assay. SNP-1082 from IL-10 gene was genotyped using pyrosequencing technology. The association between cervical cancer risk and the studied SNPs was evaluated by logistic regression. Under univariate analysis, none of these polymorphisms appeared associated with susceptibility of cervical cancer development or HPV infection. However, individuals carrying heterozygous genotype for TNF-α -238 polymorphism seem to be at lower risk for cervical cancer development, with borderline significance (OR = 0.42, P = 0.069), as well as those carrying heterozygous genotypes for IL-10 and TNF-α -238 (OR = 0.40, P = 0.08). In conclusion, these results suggest a potential effect of TNF-α -238 G/A in the reduction of cervical cancer risk in Argentine women, but not TNF-α -308 or IL-10. Larger studies are needed to fully understand the genetic predisposition for the development of cervical cancer.Instituto de Genética Veterinari

TNF-α and IL-10 promoter polymorphisms, HPV infection, and cervical cancer risk

Although the implication of genetic factors in cervical cancer development remains to be elucidated, accumulative epidemiological evidence suggests that polymorphisms of cytokine genes may be involved in the etiology of cervical carcinoma. Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interleukin-10 (IL-10) are two multifunctional cytokines implicated in inflammation, immunity, and cellular organization, and were proposed to play important roles in cancer biology. In order to determine whether IL-10 -1082 (G/A) and TNF-α -238 (G/A) and -308 (G/A) polymorphisms are associated with susceptibility to cervical cancer, a case–control study of 122 cancer patients and 176 healthy controls was conducted. Cervical samples were genotyped for both TNF-α polymorphisms by PCR-RFLP assay. SNP-1082 from IL-10 gene was genotyped using pyrosequencing technology. The association between cervical cancer risk and the studied SNPs was evaluated by logistic regression. Under univariate analysis, none of these polymorphisms appeared associated with susceptibility of cervical cancer development or HPV infection. However, individuals carrying heterozygous genotype for TNF-α -238 polymorphism seem to be at lower risk for cervical cancer development, with borderline significance (OR = 0.42, P = 0.069), as well as those carrying heterozygous genotypes for IL-10 and TNF-α -238 (OR = 0.40, P = 0.08). In conclusion, these results suggest a potential effect of TNF-α -238 G/A in the reduction of cervical cancer risk in Argentine women, but not TNF-α -308 or IL-10. Larger studies are needed to fully understand the genetic predisposition for the development of cervical cancer.Fil: Barbisan, Gisela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ingeniero Fernando Noel Dulout"; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Perez, Luis Orlando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ingeniero Fernando Noel Dulout"; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Contreras, Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ingeniero Fernando Noel Dulout"; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Golijow, Carlos Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ingeniero Fernando Noel Dulout"; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Human papillomavirus DNA and oncogene alterations in colorectal tumors

The aim of the present study is to determine the presence and molecular integrity of high-risk HPV types in colorectal adenocarcinomas and to assess whether viral DNA is related to common proto-oncogene alterations, such as k-ras mutations and c-myc gene amplification, in colorectal cancer. Seventy-five colorectal adenocarcinomas were screened for HPV infection using nested-PCR (MY09/11-GP5+/6+). HPV typing was performed by type-specific PCR for HPV 16 and HPV 18 DNA. Unidentified samples were subsequently sequenced to determine the viral genotype. The physical status of HPV was determined by a nested PCR approach for type-specific E2 sequences. C-myc amplification was assessed by co-amplification with β-globin as control locus, and mutation in k-ras codons 12 and 13 by ARMS-PCR. Overall, HPV was detected in thirty-three colorectal specimens (44%). HPV 16 was the prevalent type (16/75), followed by HPV 18 (15/75), HPV 31 (1/75) and HPV 66 (1/75). E2 disruption was detected in 56.3% of HPV 16 and in 40% of HPV 18 positive tumors. C-myc amplification was detected in 29.4% of cases, while k-ras mutations in 30.7%. There was no significant trend for HPV infection in tumors harboring either k-ras or c-myc alterations. This study demonstrates HPV DNA and viral integration in colorectal tumors, suggesting a potential role of this virus in colorectal carcinogenesis. There was no concurrence, however, of k-ras and c-myc activation with viral infection.Fil: Perez, Luis Orlando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; ArgentinaFil: Barbisan, Gisela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; ArgentinaFil: Ottino, Anabel. Provincia de Buenos Aires. Hospital Interzonal General de Agudos Gral. San Martín; ArgentinaFil: Pianzola, Horacio. Provincia de Buenos Aires. Hospital Interzonal General de Agudos Gral. San Martín; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Médicas; ArgentinaFil: Golijow, Carlos Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; Argentin