Efeitos da ciclosporina-A na produção e atividade de metaloproteinases de matriz por fibroblastos gengivais

Orientador: Edgard GranerDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: A ciclosporina-A (CSA) é uma droga imunossupressora, seletiva para linfócitos T, muito usada atualmente na prevenção da rejeição de transplantes de órgãos e de medula óssea. Dentre os efeitos colaterais da CSA está o aumento gengival, caracterizado principalmente por um acúmulo excessivo de matriz extracelular. Como o mecanismo através do qual a CSA atua na regulação da síntese e degradação de matriz extracelular ainda não é conhecido, o objetivo do presente trabalho foi estudar seu efeito sobre a produção das metaloproteinases de matriz (MMPs) e do colágeno tipo I por fibroblastos gengivais, através de eletroforese em SDS - PAGE, zimografia e western blots. Para isto, ratos foram tratados diariamente com 10mg/kg de peso corporal de CSA por, via subcutânea durante 30 e 60 dias, sendo que todos os animais tratados desenvolveram aumento gengiva!. A atividade gelatinolítica dos meios de cultura condicionados com os fragmentos de tecido gengival foi menor nos animais tratados com CSA que nos grupos controle. A atividade enzimática também foi inibida no meio de cultura condicionado por fibroblastos tratados com CSA. A análise através de western blots demonstrou que a produção de colagenase de fibroblastos (MMP-1 ) e de estromelisina-1 (MMP-3) por 7 diferentes linhagens de fibroblastos gengivais humanos em cultura também foi significativamente reduzida pela ação da CSA. Com relação ao colágeno tipo I, foi detectada uma maior quantidade desta glicoproteína na matriz extracelular da gengiva dos ratos tratados com CSA, em comparação com os controles, assim como em culturas primárias de fibroblastos gengivais tratados com esta drogaAbstract: Cyclosporin A (CyA) is an immunossupressant drug used to prevent rejection of allograft transplants and in the management of various autoimmune diseases that acts blocking interleukin-2 synthesis by CD4+lymphocytes. The gingival overgrowth affecting the attached gingiva of 25-80% of the treated patients, is a frequent side effect of CyA treatment in the oral cavity. The aim of the present work was to evaluate the effect of CyA on matrix metalloproteinases (MMPs) synthesis and activity as well as type I collagen production by gingival fibroblasts. Wistar rats were treated daily with 10mg/kg of body weight of CyA during 30 and 60 days to induce gingival overgrowth. After these periods, the gingival tissue was removed and used to study MMPs activity in zymographic assays as well as type I collagen deposition by SDS-PAGE. Primary cultures of fibroblasts from rats and 7 different clinically healthy human gingiva were established and used to analyze secretion and activity of MMPs in the culture medium. The cells were treated with different concentrations of CyA and analised by zymographic assays and western blots. The gelatinolytic activity of MMP-2 was strongly reduced by CyA treatment, both "in vivo" and in cell culture. In addition, the relative amounts of MMP-1 and MMP-3 in the culture medium was significanty reduced by CyA treatment and the amount of type I collagen in the hyperplastic rat gingival tissue was higher than in control animais. Our data clearly showed that CyA strongly reduces the activity and production of MMPs by gingival fibroblasts, probably leading to the accumulation of type I collagen and other macromolecules in the gingival connective tissueMestradoMestre em Biologia e Patologia Buco-Denta

Comparação microscópica e proliferativa de fibroblastos gengivais de pacientes com gengiva normal e com fibromatose gengival hereditária

Hereditary gingival fibromatosis (HGF) is a rare oral condition, clinically manifested through a generalized and fibrotic enlargement of the gingiva, which may present as an isolated clinical finding or in association with other features, as part of a syndrome. The biological mechanisms involved in HGF are unknown, and the results of cell-culture studies are controversial. To elucidate the phenotypic and proliferative characteristics of HGF fibroblasts, we isolated 4 cell lines of gingival fibroblasts from members of the same family with HGF, and compared with gingival fibroblasts from 4 healthy patients (NG). HGF and NG fibroblasts, in subconfluent culture densities, showed typical morphological characteristics, such as spindle form with a central spherical nucleus and long cytoplasmatic prolongations, but in saturation density, HGF cells were shorter than control cells. The nucleus/cytoplasm relation was always smaller in all HGF cell lines, suggesting that the cellular reduction is derived from reduction or compaction of the cytoplasm and not of the nucleus. The proliferation rate was higher in fibroblasts from HGF than in the ones from NG. These results suggest that differences in the morphology and proliferation of HGF fibroblasts may be associated with the biological events involved in the pathogenesis of gingival overgrowth in HGF patients.Fibromatose gengival hereditária (FGH) é uma condição bucal rara clinicamente manifestada por um aumento gengival generalizado e fibrótico, podendo apresentar-se de forma isolada ou associada a outras alterações, como parte de síndromes. Os mecanismos biológicos envolvidos na FGH são desconhecidos, e os resultados de estudos de cultura celulares são controversos. Para elucidar as características fenotípicas dos fibroblastos de FGH, nós isolamos quatro linhagens celulares de fibroblastos de FGH de indivíduos de uma mesma família e comparamos as características morfológicas e proliferativas com fibroblastos provenientes de pacientes com gengiva clinicamente normal (GN). Fibroblastos de GN e FGH em condições de subconfluência celular apresentaram típicas características morfológicas, como formato fusiforme, núcleo central e longos prolongamentos citoplasmáticos, mas em condições de saturação da densidade celular, os fibroblastos de FGH apresentaram dimensões menores que as células controle. A relação núcleo/citoplasma foi sempre menor para todas as linhagens celulares de fibroblastos de FGH, sugerindo que a redução celular, é proveniente de uma redução ou compactação citoplasmática e não nuclear. A capacidade proliferativa de fibroblastos de FGH foi maior que a de fibroblastos de GN. Estes resultados sugerem que diferenças morfológicas e proliferativas dos fibroblastos de FGH podem estar associadas aos eventos biológicos envolvidos na etiopatogenia do aumento gengival observado em pacientes com FGH

Main conclusions of the joint FAPESP programs BIOTA-BIOEN-climate change workshop: science and policy for a greener economy in the context of RIO+20

Este Ponto de Vista resume as conclusões de um Workshop conjunto, organizado pelos três Programas da FAPESP na Área Ambiental - BIOTA (O Instituto Virtual da Biodiversidade) - BIOEN (Pesquisa em Bioenergia) - Mudanças Climáticas, para discutir a contribuição da comunidade científica para a RIO+20, a Conferência das Nações Unidas para o Desenvolvimento Sustentável. O grupo de pesquisadores brasileiros reunidos pela FAPESP no início de março de 2012 levantou as seguintes preocupações: a) o número reduzido de oportunidades para a comunidade científica interagir com Conferências como a RIO+20; b) as graves deficiências do ZeroDraft, documento produzido pela Divisão das Nações Unidas para o Desenvolvimento Sustentável para a RIO +20; c) o fato do foco de pesquisa dos três Programas de Pesquisa Ambiental da FAPESP - biodiversidade, bioenergia e mudanças climáticas - não estarem na pauta das discussões da RIO+20; d) que pouca ênfase é dada aos oceanos na Agenda da Conferência; e) em relação aos mecanismos de mercado associados com a transição para uma economia mais verde, a necessidade de enfatizar a redução de subsídios perversos e a promoção de incentivos econômicos para atividades ou processos de mitigação e/ou seqüestro de carbono; f) a necessidade de estimular o desenvolvimento e a consolidação da pesquisa na área de avaliação e valoração de serviços ambientais, no Brasil. Os participantes do Workshop reconheceram a necessidade de aprofundar o conhecimento sobre as convenções, tratados e acordos internacionais assinados e ratificados pelo Brasil, bem como as instituições internacionais, programas e iniciativas que promovem a participação da comunidade científica no debate de políticas ambientais globais. Finalmente, do ponto de vista dos três programas da FAPESP dois pontos foram destacados: a) que é imperativo aprofundar o conhecimento científico em cada uma das três áreas focais - biodiversidade, bioenergia e mudanças climáticas - porque é necessário aumentar a massa crítica de pesquisadores e do conhecimento para participar das discussões internacionais nessas áreas estratégicas; b) também é imperativo apoiar e promover projetos de pesquisa que integrem as áreas focais dos três programas, estimulando a constituição de equipes inter e transdisciplinares. Esta é uma tendência mundial na área das mudanças ambientais globais, e os participantes dos três programas sentem que podem dar uma contribuição significativa para o avanço do conhecimento, para o debate internacional e para a efetiva solução dos problemas