Nuevas herramientas para la clasificación taxonómica de los insectos vectores de leishmaniosis: utilidad de los genes mitocondriales

The controversial taxonomic position of phlebotomine sandflies based upon morphological evidence indicates the need to examine alternative sources of phylogenetic information. New taxonomic tools could lead to a more consistent classification within phlebotomine sandflies according to evolution patterns and, to distinguish morphologically similar species. With the molecular biology techniques now available, the study of insect vector genomes has become an important step to help to resolve many taxonomic problems. The majority of the genes chosen for such studies are mitochondrial because they are easier to isolate and manipulate, and evolve quickly. Recently, mitochondrial gene polymorphisms have begun to be used to infer phylogenetic relationships among species of genera Lutzomyia and Phlebotomus. This article presents an updated review about the main studied phlebotomine groups, selected mitochondrial genes, and its contribution to the classification of leishmaniasis vectors.La controversia en torno a la posición taxonómica de los flebotomineos, debida en parte a dificultades morfológicas, ha evidenciado la necesidad de buscar nuevas herramientas que permitan no sólo establecer una clasificación más acorde con los procesos evolutivos que han experimentado estos insectos, sino también diferenciar los taxones que conforman los complejos de especies. Con la aparición de las técnicas de biología molecular, el estudio del genoma en insectos vectores de enfermedades se ha convertido en un paso importante en la resolución de muchos conflictos taxonómicos. Las caracteristicas del ADN mitocondrial, entre las que se destacan su rápida evolución y la facilidad con la que se puede aislar y manipular, han favorecido su elección como marcador molecular para estudios de taxonomía. Recientemente, el polimorfisrno de algunos genes mitocondriales comenzó a utilizarse para explorar las relaciones filogenéticas y evolutivas en especies de los géneros Lutzomyia y Phlebotomus. La presente revisión recopila la literatura disponible sobre los principales grupos de flebotomíneos estudiados, los genes mitocondriales más utilizados y su contribución a la clasificación de los vectores de leishmaniosis

Canis familiaris, UN NUEVO HOSPEDERO DE Ornithodoros (A.) puertoricensis FOX, 1947 (ACARI: IXODIDA) EN COLOMBIA

<p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">RESUMEN </span></span></p> <p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">Las garrapatas revisten gran importancia en el campo biomédico por sus hábitos hematófagos y asociación con la transmisión de agentes patógenos a humanos y animales. El objetivo de esta investigación fue establecer las especies de garrapatas que parasitan perros en tres poblaciones del área rural del Caribe colombiano. Durante los meses de agosto y diciembre del año 2006 se realizó búsqueda activa de garrapatas sobre caninos domésticos de las localidades de El Campín, Sabanas del Potrero y Escobar Arriba, departamento de Sucre. Las garrapatas recolectadas fueron almacenadas en viales con etanol al 70% e identificadas empleando claves morfológicas de referencia para cada familia. Para la determinación de especie en la familia Argasidae se realizaron estimaciones morfométricas de estructuras externas. Se recolectaron 420 garrapatas a partir de 50 caninos infestados, de un total de 134 perros examinados, que corresponde a una tasa de infestación del 37,3%. Las garrapatas fueron identificadas como <em>Rhipicephalus sanguineus</em>, <em>Rhipicephalus </em>(<em>Boophilus</em>) <em>microplus </em>y <em>Amblyomma ovale </em>pertenecientes a la familia Ixodidae, y <em>Ornithodoros </em>(<em>Alectorobius</em>) <em>puertoricensis </em>de la familia Argasidae. La especie predominante fue <em>R. sanguineus </em>(92,1%) en los estados de larva, ninfa y adulto, seguida por larvas de <em>O. puertoricensis</em>, que fueron halladas en menor número sobre caninos de las tres localidades. Se registra, por primera vez en América, el parasitismo de <em>O. puertoricensis </em>sobre caninos domésticos y se confirma su presencia en Colombia. </span></span></p> <p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">Palabras clave: garrapatas, perros, <em>Ornithodoros puertoricensis</em>, Ixodida, Colombia. </span></span></p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;"> </span></span><hr size="1" /><p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">ABSTRACT </span></span></p> <p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">Ticks are very important from the biomedical point of view, by their hematophagic activity and their role in the transmission of pathogenic microorganisms to man and animals. The main goal of this work was to establish the tick species parasiting dogs in three rural localities of the Colombian Caribbean. From August to December 2006, an active search of ticks on dogs was carried out in the localities of El Campín, Sabanas del Potrero and Escobar Arriba, department of Sucre. The collected ticks were preserved into eppendorf tubes with 70% ethanol, and identified using standard morphological keys for each family. Argasid species were determined by measuring external morphological characters. Of 134 examined dogs in the three localities, 50 were found infested by ticks, representing a infestation rate of 37,3%. A total of 420 ticks were collected from dogs and identified as <em>Rhipicephalus sanguineus</em>, <em>Rhipicephalus </em>(<em>Boophilus</em>) <em>microplus</em>, and <em>Amblyomma ovale </em>of the Ixodidae family, and <em>Ornithodoros puertoricensis </em>of the Argasidae family. <em>R. sanguineus </em>was the predominant species (92,1%) in the stages of larva, nymph and adult, following by <em>O. puertoricensis </em>larvae recorded in low numbers in the three regions sampled. The tick <em>O. puertoricensis </em>is recorded for the first time as ectoparasite of domestic dogs in America. Additionally, the presence of this tick species is confirmed in Colombia. </span></span></p> <p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">Key words: Ticks, dogs, <em>Ornithodoros puertoricensis</em>, Ixodida, Colombia </span></span></p&gt

Sistemática molecular de algunas especies de Lutzomyia spp del grupo verrucarum (Theodor 1965). Búsqueda de marcadores moleculares para la caracterización de especies

<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">En el nuevo mundo la Leishmaniosis es transmitida por dípteros del género Lutzomyia frança. Este género presenta una amplia diversidad morfológica por lo que ha sido dividida en subgéneros, grupos y series de especies. Se ha propuesto que la reciente especiación de algunos grupos fue debida a cambios climáticos en el pasado, especialmente en el pleistoceno (hace 1.8 millones de años), los cuales sirvieron para aislar poblaciones coespecíficas en diferentes refugios durante períodos secos. El grupo verrucarum es uno de los agrupamientos subgenéricos en el que se incluyen 28 especies. Con base en la morfología de la genitalia de machos se ha subdividido este grupo en las series serrana, verrucarum y towsendi. De estas especies L. evansi se ha incriminado como vector alternativo de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi en un foco de Leishmaniosis visceral al norte de Colombia. Otras especies se han incriminado en la transmisión de Leishmania (Viannia), agente causante de Leishmaniosis cutánea.</span></p> <p class="MsoNormal"><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial"> </span></p> <p class="MsoNormal"><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">Debido a la gran controversia sobre la ubicación sistemática de muchos insectos de importancia médica, surgió un macroproyecto del cual hace parte este estudio y que tiene como propósito aportar al conocimiento sobre las relaciones filogenéticas entre especies del género Lutzomyia. Las especies del grupo verrucarum tienen un interés particular debido a las frecuentes dificultades en su determinación taxonómica basada en caracteres morfológicos. Este estudio tiene como objetivo particular realizar un análisis cladístico entre algunas especies alopátricas (distanciadas geográficamente) presentes en Colombia, usando secuencias del gen que codifica para la unidad cuatro de la NADH deshidrogenasa mitocondrial, proteína que participa en la fosforilación oxidativa. Estas especies son: L. evansi (Nuñez-Tovar), L. ovallesi (Ortiz), L. spinicrassa (Osorno & Hoyos), L. nuneztovari (Ortiz) y L. columbiana (Ristorcelli & Van Ty). El estudio incluye en el análisis secuencias previamente reportadas de L. longipalpis (del subgénero Lutzomyia franca, serie longipalpis) y de insectos de otro género, Phlebotomus papatasi. Adicionalmente pretende buscar a través de análisis de polimorfismos en longitud de fragmentos de restricción (RFLP) marcadores moleculares propios de especie, los cuales pueden ayudar en su determinación.</span></p> <p class="MsoNormal"><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial"> </span></p> <p class="MsoNormal"><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">En una primera etapa se estandarizaron las técnicas de preservación de especímenes, extracción de ADN, amplificación, purificación y digestión de la región 5’del gen ND4. A través de ellas se ha obtenido un fragmento de aproximadamente 680 pb para individuos de las especies de estudio y adicionalmente para L. longipalpis y Phlebotomus papatasi. Algunos de los productos amplificados se han secuenciado y dichas secuencias se han editado, alineado y sometido a un análisis filogenético usando el Software phillip 3.5 en el que se logró obtener un cladograma preliminar. Los ensayos de RFLP con las enzimas de restricción Dra I y Vsp I han revelado fragmentos que pueden ser marcadores moleculares diagnósticos de especies al tiempo que revelan polimorfismo intraespecífico para L. evansi y L. ovallesi. Sin embargo las conclusiones sobre su utilidad para estudiar estructura de poblaciones debe ser confirmada aumentando el número de muestras. El estudio se encuentra en la etapa de análisis de los datos y procesamiento de más especímenes para obtener un mayor número de secuencias y RFLP.</span></p&gt

FLEBOTOMÍNEOS (DIPTERA: PSYCHODIDAE) EN LA RESERVA NATURAL DEL CAÑÓN DEL RÍO CLARO (ANTIOQUIA), COLOMBIA PHLEBOTOMINAE SAND FLIES (DIPTERA: PSYCHODIDAE) IN THE NATURE RESERVE AREA OF RÍO CLARO (ANTIOQUIA), COLOMBIA

Por la endemicidad de la leishmaniasis en el departamento de Antioquia (Colombia), es importante conocer la distribución actualizada de las diferentes especies de flebotomíneos, aspecto de interés para establecer su papel en la epidemiología de la enfermedad. En este trabajo se actualiza la composición de flebotomíneos de los géneros Lutzomyia y Brumptomyia en la reserva Natural del Cañón del Río Claro (Antioquia), con base en muestreos entomológicos realizados en los meses de mayo, junio y agosto de 2008. Los insectos fueron recolectados empleando trampas de luz tipo CDC y Shannon. También se realizó una búsqueda activa con aspiradores bucales en huecos y raíces tabulares de árboles. Se registra, por primera vez en la zona, la presencia de las especies Lutzomyia ayrozai, L. camposi, L. carrerai thula, L. dasymera, L. isovespertilionis, L. micropyga, L. olmeca bicolor, L. cayennensis cayennensis, L. pilosa y L. shannoni. Así mismo, se informa el primer hallazgo de las especies Brumptomyia hamata y B. mesai en este departamento y se resalta la presencia de L. gomezi, L. hartmanni, L. panamensis, L. trapidoi y L. yuilli, vectores potenciales de leishmaniasis cutánea en Colombia. Se destaca la permanencia de L. longipalpis (Lutz y Neiva), vector de Leishmania infantum, agente causal de leishmaniasis visceral, luego de su registro inicial en la zona más de diez años atrás.<br>Considering the endemicity of leishmaniasis in the Antioquia region, Colombia, it is important to have an updated distribution of different phlebotomine sand fly species, as their distribution is a relevant factor for establishing the role of such species in the disease epidemiology. This study evaluated the current composition of phlebotomine sand flies of the genera Lutzomyia and Brumptomyia in the natural reserve of the Río Claro Canyon (Antioquia), following entomological surveys in May, June, and August of 2008. Insects were collected using light traps such as CDC and Shannon, and through active searches using mouth aspirators as collecting devices on substrates such as tree holes and buttresses. We provide the first record of Lutzomyia ayrozai, L. camposi, L. carrerai thula, L. dasymera, L. isovespertilionis, L. micropyga, L. olmeca bicolor, L. cayennensis cayennensis, L. pilosa, and L. shannoni in the reserve of Río Claro. We also report the first finding of Brumptomyia hamata and B. mesai in the Antioquia region, highlighting the occurrence of L. gomezi, L. hartmanni, L. panamensis, L. trapidoi, and L. yuilli because these species are known as potential vectors of cutaneous leishmaniasis in Colombia. Documenting the presence of L. longipalpis (Lutz and Neiva) ten years after its previous record in the area is noteworthy, given that this species is the vector of Leishmania infantum, the aetiological agent of visceral leishmaniasi

Variabilidad genética en Lutzomyia ( verrucarum) evansi (Núñez-Tovar, 1924), vector de Leishmaniosis visceral americana

&lt;p&gt;Lutzomyia evansi (Núñez-Tovar, 1924), Lutzomyia longipalpis&lt;br /&gt;(Lutz y Neiva, 1912) y Lutzomyia cruzi (Mangabeira, 1938), son los&lt;br /&gt;vectores de Leishmania infantum Nicolle, 1908, en el neotrópico. Lu. evansi ha sido incriminada como vector en zonas rurales de la Costa Caribe Colombiana, y algunas zonas de Venezuela y Nicaragua. A pesar de que esta especie reviste gran importancia en Salud Pública, no existen a la fecha estudios sobre su variabilidad genética, desconociéndose si existe o no flujo genético entre las poblaciones rurales y urbanas, endémicas y no endémicas de leishmaniosis visceral (LV). Con base en los genes mitocondriales Citocromo b, RNA de transferencia para Serina, subunidades uno y cuatro de la NADH deshidrogenasa, se estudió la variabilidad genética entre las distintas poblaciones de Lu. evansi en la Costa Caribe, incluyendo la población&lt;br /&gt;geográficamente aislada de Isla Fuerte, y una población de Venezuela.&lt;/p&gt;&lt;p&gt; &lt;/p&gt

Study on natural breeding sites of sand flies (Diptera: Phlebotominae) in areas of Leishmania transmission in Colombia

Abstract Background The location of the microhabitats where immature phlebotomine sand flies of the genus Lutzomyia develop is one of the least-known aspects of this group of medically important insects. For this reason strategies of source reduction approach for their control have not been possible in contrast to other insect vectors (such as mosquitoes), because their juvenile stages in terrestrial microhabitats is difficult to detect. Methods Direct examination of soil samples, incubation of substrates and the use of emergence traps were the methods used to identify juvenile stages in 160 soil samples from urban and forest habitats within the foci of Leishmania transmission in Colombia. Immatures collected were identified subsequent from the rearing and emergence of adults using taxonomic keys or the analysis of the mitochondrial marker cytochrome oxidase I. Plant species associated with the natural breeding sites were identified and physicochemical properties of the soils were analyzed. Results A total of 38 (23.7%) sampling sites were identified as breeding sites, 142 phlebotomine sand flies were identified, belonging to 13 species of the genus Lutzomyia and two of Brumptomyia. The greatest numbers of immature were found within the tabular roots (51 immature sand flies from eight positive sites) and bases of trees (35 immature sand flies from 11 sites). The characterization and presence of the tree species (mainly Ceiba pentadra, Anacardium excelsum, Pseudosamanea guachapale) and the physicochemical properties (relative humidity and carbon/nitrogen ratio) of the soils associated with these breeding sites are significant factors in explaining the diversity and abundance of phlebotomine sand flies. Conclusions Immature phlebotomine sand flies of the genus Lutzomyia in Colombia can be found in a wide variety of breeding sites rich in organic matter, high relative humidity and are associated with a typical vegetation of each locality. These results provide new perspectives for the study of the ecology of the genus Lutzomyia in Colombia and the development of vector control strategies