Effet du butyrate sur la réponse inflammatoire des cellules épithéliales intestinales et analyse fonctionnelle du facteur de transcription C/EBP[delta]

Le butyrate, un acide gras à chaîne courte, est un produit de fermentation de la microflore intestinale et est capable de moduler la réponse inflammatoire des cellules épithéliales intestinales. Ainsi, en plus d'être une source importante d'énergie pour les colonocytes, le butyrate est connu pour ses effets anti-inflammatoires. Nous nous sommes donc intéressés aux effets et mécanismes d'actions du butyrate sur la réponse inflammatoire des cellules intestinales. C/EBP[delta] est un facteur de transcription impliqué dans plusieurs processus cellulaires dont la réponse inflammatoire intestinale. Il est induit dans plusieurs tissus lors de la phase aiguë de l'inflammation, dont l'intestin, et est capable de régulariser l'expression de gènes de réponse inflammatoire comme l'haptoglobine et l'[alpha]-glycoprotéine acide. Les fonctions des différentes régions de cette protéine n'ont pas encore été très bien définies. En utilisant différents mutants de C/EBP[delta], nous avons identifié des régions importantes pour ses fonctions dans la cellule

Effet du butyrate sur la réponse inflammatoire des cellules épithéliales intestinales et analyse fonctionnelle du facteur de transcription C/EBP[delta]

Le butyrate, un acide gras à chaîne courte, est un produit de fermentation de la microflore intestinale et est capable de moduler la réponse inflammatoire des cellules épithéliales intestinales. Ainsi, en plus d'être une source importante d'énergie pour les colonocytes, le butyrate est connu pour ses effets anti-inflammatoires. Nous nous sommes donc intéressés aux effets et mécanismes d'actions du butyrate sur la réponse inflammatoire des cellules intestinales. C/EBP[delta] est un facteur de transcription impliqué dans plusieurs processus cellulaires dont la réponse inflammatoire intestinale. Il est induit dans plusieurs tissus lors de la phase aiguë de l'inflammation, dont l'intestin, et est capable de régulariser l'expression de gènes de réponse inflammatoire comme l'haptoglobine et l'[alpha]-glycoprotéine acide. Les fonctions des différentes régions de cette protéine n'ont pas encore été très bien définies. En utilisant différents mutants de C/EBP[delta], nous avons identifié des régions importantes pour ses fonctions dans la cellule

Stability of mutant serpin/furin complexes: Dependence on pH and regulation at the deacylation step

Furin proteolytically cleaves a wide variety of proprotein substrates mainly within the trans-Golgi network (TGN) but also at the cell membrane and in endosomal compartments where pH is more acidic. Incorporation of furin recognition sequences within the reactive site loop (RSL) of α1-antitrypsin (AT) leads to the production of furin inhibitors. In an attempt to design more stable, potent, and specific serpin-based inhibitors, we constructed a series of AT and α1-antichymotrypsin (ACT) mutants by modifying the P7–P1 region of their RSLs. The biochemical properties of these variants were assessed by evaluating their propensity to establish SDS-resistant complexes with furin in a variety of conditions (pH 6.0–9.0) and by measuring their association rate constants. The effect of pH during the initial steps of complex formation was minimal, suggesting that the acylation step is not rate-limiting. The decrease in stoichiometry of inhibition (SI) values observed in AT variants at high pHs was a result of the reduced pH-dependent deacylation rate, which is rate-limiting in this mechanism and which suggests increased complex stability. Conversely, the SI values for ACT mutants had a tendency to be lower at acidic pH. Transiently transfecting HEK293 cells with these mutants abolished processing of the pro-von Willebrand factor precursor but, interestingly, only the ACT variants were secreted in the media as uncleaved forms. Our results suggest that reengineering the reactive site loops of serpins to accommodate and target furin or other serine proteases must take into account the intrinsic physicochemical properties of the serpin

Identification of TMPRSS6 isoforms interacting partners.

A) BioVenn overlap of TMPRSS6 isoforms 2, 3 and 4 interacting partners (fold change vs mock ≥ 3) identified by mass spectrometry analysis of TMPRSS6 V5-tagged immunoprecipitation from transfected Hep3B cell membrane preparations. B) STRING interactome of 49 common protein partners.</p

TMPRSS6 isoforms 3 and 4 reduce isoform 2 activity.

A) TMPRSS6 isoforms representation adapted from our previous publication [1] licensed under CC BY 3.0. B) Expression of TMPRSS6 V5-tagged isoforms 2, 3 and 4 in transfected HEK293 cells assessed by western blotting against V5. C) Proteolytic activity was measured in the cell medium of HEK293 cells transfected with one or two TMPRSS6 V5-tagged isoforms. Boc-QAR-AMC (200 μM) fluorogenic substrate cleavage was monitored. Results are presented as relative activity over TMPRSS6 isoform 2 (TMPRSS6-2) activity. Statistical significance was assessed using one sample T test, *p < 0.0002 (n = 5).</p

TMPRSS6 isoforms engage in homo- and hetero-interactions.

HEK293 cells were co-transfected with V5- and HA-tagged TMPRSS6 isoforms. Homo- and hetero-interaction of TMPRSS6 isoforms were assessed by immunoprecipitation (IP) of cell lysate (CL) using an anti-V5 antibody. Isoform immunoprecipitation was detected using anti-V5 and anti-HA antibodies. Equal amount of CL was loaded on SDS-polyacrylamide gels and cell GAPDH was used as a loading control (n = 3).</p

TMPRSS6 cleaves TfR1.

A) TfR1-HA was transfected with one or two TMPRSS6-V5 tagged isoforms. Expression was detected in the cell lysate (CL) and cell media (CM) (n = 3). B) TfR1 cleavage quantification. Results are presented as TFR1 cleavage (%) relative to TFR1 cleavage by TMPRSS6 isoform 2. Statistical significance was assessed using one sample T test, *p < 0.02. The means ± SD are presented (n = 3).</p

Interacting protein list.

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