Prevalence of intestinal parasitoses in children at the Xingu Indian Reservation

OBJECTIVE: To evaluate the prevalence of intestinal parasitoses in Native Brazilian children from 2 to 9 years old. METHODS: A search for ova and parasites was conducted in the stools of children between 2 to 9 years old living in six indigenous villages located in the Middle and Lower Xingu River, to wit: Pavuru, Moygu, Tuiararé, Diauarum, Capivara, and Ngojwere. The study utilized the Paratest kit® (Diagnostek, Brazil) to preserve collected stools. Fecal samples were shipped to the Laboratory of the Pediatric Gastroenterology Division of the UNIFESP/EPM, in São Paulo, for analysis. The search for ova and parasites was performed utilizing the Hoffman method, and later through optical microscopic evaluation. Fecal samples were collected one year apart from each other. RESULTS: There were no significant statistical differences between the mean ages of the children from the six indigenous villages studied. The search for ova and parasites found positive results for the stools of 97.5% (198/202) and 96.1% (98/102) of children in the first and second collections, respectively. There was no statistical association with the children's age. The search performed one year later found no differences in the proportion of parasites identified in the first collection for protozoa (93.3% in 2007 versus 93.3% in 2008, McNemar = 0.01, p = 0.1) or for helminths (37.1% in 2007 versus 38.2% in 2008, McNemar = 0.03, p = 0.85). There were significant differences in prevalence of Entamoeba coli between 2007 (43.8%) and 2008 (61.8%) (McNemar Chi 6.1; p = 0.0135). There were no significant differences for other parasites when comparing the results of the two studies. CONCLUSION: The high prevalence of intestinal parasitosis matched the elevated rates of environmental contamination in this indigenous community.OBJETIVO: Avaliar a prevalência da parasitose intestinal em crianças indígenas de 2 a 9 anos. MÉTODOS: Para a realização do exame protoparasitológico, foram convidadas todas as crianças de 2 a 9 anos, de seis aldeias localizadas no Médio e Baixo Xingu: Pavuru, Moygu, Tuiararé, Diauarum, Capivara e Ngojwere. Para a conservação das amostras de fezes, foi utilizado o kit coletor Paratest® (Diagnostek, Brasil). As amostras foram transportadas para São Paulo. A pesquisa de helmintos e protozoários foi feita através do método de Hoffman, com posterior pesquisa de ovos e cistos por microscopia óptica. Foram feitas duas coletas com intervalo de 1 ano. RESULTADOS: Não houve diferença significativa entre as idades médias das crianças provenientes das seis aldeias. Resultaram positivas para a presença de parasitas, 97,5% (198/202) e 96,1% (98/102) na primeira e segunda coletas, respectivamente, sem associação estatística entre a idade. Realizaram o exame parasitológico de fezes nos 2 anos, 89/102 (87,3%). Após 1 ano, não houve diferença na proporção de pacientes infestados por protozoários (93,3% em 2007 contra 93,3% em 2008, McNemar = 0,01, p = 0, 1) ou por helmintos (37,1% em 2007 contra 38,2% em 2008, McNemar = 0,03, p = 0,85). Houve diferença significativa quanto à prevalência de Entamoeba coli em 2007 (43,8%) e 2008 (61,8%) (McNemar's Chi 6,1; p = 0,0135). Não houve diferenças significativas quanto aos outros parasitas após comparação dos dois resultados. CONCLUSÃO: A alta prevalência de parasitose intestinal foi compatível com o alto índice de contaminação ambiental dessa comunidade.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Escola Paulista de Medicina Departamento de PediatriaUNIFESP-EPM Projeto XinguUNIFESPUNIFESP, EPM, Depto. de PediatriaUNIFESP, EPM Projeto XinguUNIFESPSciEL

Analysis of antimicrobial susceptibility and virulence factors in Helicobacter pylori clinical isolates

BACKGROUND: In this study, we evaluated the prevalence of primary resistance of Brazilian H. pylori isolates to metronidazole, clarithromycin, amoxicillin, tetracycline, and furazolidone. In addition, the vacA, iceA, cagA and cagE genotypes of strains isolated from Brazilian patients were determined and associated with clinical data in an effort to correlate these four virulence markers and antibiotic resistance. METHODS: H. pylori was cultured in 155 H. pylori-positive patients and MICs for metronidazole, clarithromycin, amoxicillin, tetracycline, and furazolidone were determined by the agar dilution method. Genomic DNA was extracted, and allelic variants of vacA, iceA, cagA and cagE were identified by the polymerase chain reaction. RESULTS: There was a strong association between the vacA s1/cagA -positive genotype and peptic ulcer disease (OR = 5.42, 95% CI 2.6–11.3, p = 0.0006). Additionally, infection by more virulent strains may protect against GERD, since logistic regression showed a negative association between the more virulent strain, vacA s1/cagA-positive genotype and GERD (OR = 0.26, 95% CI 0.08–0.8, p = 0.03). Resistance to metronidazole was detected in 75 patients (55%), to amoxicillin in 54 individuals (38%), to clarithromycin in 23 patients (16%), to tetracycline in 13 patients (9%), and to furazolidone in 19 individuals (13%). No significant correlation between pathogenicity and resistance or susceptibility was detected when MIC values for each antibiotic were compared with different vacA, iceA, cagA and cagE genotypes. CONCLUSION: The analysis of virulence genes revealed a specific association between H. pylori strains and clinical outcome, furthermore, no significant association was detected among pathogenicity and resistance or susceptibility

Resistance molecular mechanism analyse of Helicobacter pylori to amoxicilin

Orientador: Jose Pedrazzoli JuniorTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: A maioria dos isolados de H. pylori é sempre susceptíveis à amoxicilina, um antibiótico comumente usado na terapia de erradicação do H. pylori. Entretanto, a resistência à amoxicilina é emergente nos isolados clínicos, especialmente em paises onde esse antibiótico pode ser obtido sem prescrição. Assim, o mecanismo molecular de resistência a amoxicilina tem sido apenas identificada em poucas H. pylori AmoxR e tolerantes. Este trabalho analisou os genes que atualmente apresentam maior probabilidade de estarem envolvidos no mecanismo de resistência e também a expressão gênica diferencial de uma linhagem resistente à amoxicilina crescida em presença e ausência da droga. Depois de realizada a transformação com o DNA genômico, foi feito também a transformação natural, da linhagem susceptível 26695 com os genes, previamente amplificados por PCR, pbp1A, pbp2, ftsI (pbp3), pbp4, hcpA, lytB, rodA1, mreC, mreB, e llm, dos isolados clínicos resistentes. Apenas a transformação realizada com o gene pbp1A resultou em colônias amoxR de todos os sete isolados clínicos estudados. A resistência foi mediada por várias alterações mutacionais no segundo e terceiro motif conservado de PBP1A e suas adjacências. Todos os 8 transformantes AmoxR analisados continham uma substituição T555R e N542Y, sete dos transformantes AmoxR apresentavam a substituição S402G, E406A, e S417T, enquanto que um transformante tinha apenas a substituição S414R. Entretanto não podemos excluir a relação de outros genes a essa resistência. Para avaliar se a resistência da linhagem Hardenberg apresenta uma expressão gênica diferencial quando entra em contato com a amoxicilina, foi realizada a técnica de RAP ¿ PCR. Foram usados 5 diferentes pares de primers arbitrários que geraram 101 bandas com expressão diferencial. Nossos resultados mostraram que a amoxicilina altera a expressão de genes envolvidos na adaptação da bactéria a nova situação. Neste sentido, os resultados que foram obtidos com este trabalho poderão contribuir para a caracterização molecular dos mecanismos de resistência das linhagens brasileiras de H. pylori à amoxicilina, droga essa usada na terapia de erradicaçãoAbstract: Amoxicillin-based therapies are highly effective for the treatment of Helicobacter pylori infections, but the efficacy may decrease as the incidence of amoxicillin resistance is increasing. The extensive use and limited choice of the antibiotics have resulted in the development of antibiotic resistance in H. pylori. So far, the molecular mechanism underlying stable amoxicillin resistance has only been identified for a few naturally occurring amoxicillin-resistant (AmxR) In this study, we evaluated genes were selected as potential candidates for to be responsible to amoxicillin resistance and we evaluated the gene expression pattern in response to amoxicillin. No changes of genes ftsI, hcpA, llm, lytB, mreB, mreC, pbp2, pbp4, and rodA1, encoding putative PBPs or involved in cell wall synthesis were found among the transformed resistant H. pylori. Amoxicillin resistance was mediated by various mutational changes in or adjacent to the second and third PBP-motifs of the pbp1A gene. All eight AmxR transformants analyzed contained a T555S and N561Y substitution, seven of the AmxR transformants contained a S402G, E406A, and S417T substitution, while one transformant only contained a S414R substitution. Although we cannot exclude the role of other genes in amoxicillin resistance. For to evaluate the gene expression was using RNA arbitrarily primed PCR (RAP-PCR). In the experiments, c. 101 differentially expressed RAP-PCR products were identified using five arbitrary primers. The differential expression of the isolated cDNAs was confirmed by real-time PCR. The results showed that amoxicillin alters the expression of cDNAs. Further analysis of these cDNAs will allow a better comprehension of both the molecular mechanism(s) of amoxicillin resistance and the adaptative mechanism (s) used by H. pylori in the presence of this antibioticDoutoradoDoutor em Farmacologi

Estudo da associação entre a resistencia primaria aos antimicrobianos amoxicilina. claritromicina. furozolidona, metronidazol e tetraciclina com os fatores de virulencia vacA, iceA, cagA e cagE do Helicobacter pylori

Orientador : Jose Pedrazzoli JuniorDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: A infecção causada pelo Helicobacter pylori na mucosa gástrica é considerada uma das infecções crônicas bacterianas mais comuns em seres humanos, e está intimamente associada à úlcera péptica, adenocarcinoma e linfoma gástrico, além de ser, reconhecidamente, um agente carcinogênico tipo I. Em 1997, foi recomendado dois esquemas terapêuticos para a erradicação da bactéria: terapia tripla com omeprazol, claritromicina e amoxicilina ou subcitrato de bismuto, tetraciclina e furazolidona. As terapias não apresentaram a eficiência desejada. A principal razão deste fracasso das terapias para erradicação do H. pylori deve-se a resistência observada a alguns antimicrobianos. Algumas linhagens de H. pylori podem ser intrinsecamente mais propensas ao tratamento com antibióticos do que outras. Os objetivos deste estudo foram: determinar os genótipos de vacA, iceA, cagA e cagE do Helicobacter pylori e estabelecer uma relação entre as diferentes manifestações clínicas; verificar a suscetibilidade do Helicobacter pylori frente aos antimicrobianos amoxicilina, claritromicina, furazolidona, metronidazol e tetraciclina e avaliar a possível relação dos genes cagA, cagE, vacA, iceA do Helicobacter pylori com a suscetibilidade da bactéria à esses antimicrobianos. Foram cultivadas 155 linhagens de H. pylori, dentre elas 17 (11%) apresentaram genótipo multiplo sendo assim, excluídas de nossa análise estatística. Foi observado uma relação entre o genótipo vacA s1m1 e úlcerações duodenais. A presença da linhagem menos virulenta vacA s2m2 foi relacionada com o desenvolvimento de doença do refluxo gastroesofágico, suportando a hipótise de que linhagens mais virulentas podem conferir um tipo de proteção esofágica. A resistência ao metronidazol foi observada em 75 pacientes (55%), à amoxicilina, 54 (38%), à claritromicina, 23 (16%), à tetraciclina, 13 (9%) e à furazolidona, 19 (13%). Não houve associação entre as diferentes manifestações clínicas dos pacientes e a resistência da bactéria aos antimicrobianos. Nenhuma relação entre os fatores de patogenicidade e a resistência bacteriana aos medicamentos usados na terapia de erradicação, foi detectadaAbstract: More than 50% of the world's population is supposedly infected by Helicobacter pylori, the most common chronic bacterial infection in humans. There is still no ideal therapy for curing H. pylori infection and, when treatment fails, the underlying reasons frequently remain unclear, although antibiotic resistance is generally considered to be the primary factor. In this study, we evaluated the prevalence of primary resistance of H. pylori isolates in Brazil to metronidazole, clarithromycin, amoxicillin, tetracycline, and furazolidone. Furthermore, this study aimed to determine vacA, iceA, cagA and cagE genotypes of strains isolated from Brazilian patients and to correlated then with clinical data; to evaluate the possible association between these four virulence markers and antibiotic resistance. H. pylori was cultured in 155 H. pylori-positive patients. The MICs for metronidazole, clarithromycin, amoxicillin, tetracycline, and furazolidone were determined by agar dilution method. Genomic DNA was extracted, and allelic variants of vacA, iceA, cagA and cagE were identified by the polymerase chain reaction. More than one H. pylori strain was detected in 17 (11%) patients, and these were excluded from subsequent statistical analysis. There was a strong association between the genotype vacA s1m1 and peptic ulcer disease. The presence of the less virulent strain vacA s2 was related to gastroesophageal reflux disease, supporting the hypothesis that virulent strains may protect against the development of gastroesophageal reflux disease. Resistance to metronidazole was detected in 75 patients (55%), to amoxicillin in 54 individuals (38%), to clarithromycin in 23 patients (16%), to tetracycline in 13 patients (9%), and to furazolidone in 19 individuals (13%). No significant correlation between pathogenicity and resistance or susceptibility was detected when the MIC values for metronidazole, amoxicillin, clarithromycin, tetracycline, and furazolidone were compared with different vacA, iceA, cagA and cagE genotypes. It seems that these different virulence markers and the resistance to these antibiotics are not interrelatedMestradoMestre em Farmacologi

Prevalência da infecção por Helicobacter pylori e de parasitoses intestinais em crianças do Parque Indígena do Xingu

OBJETIVO: Avaliar a prevalência da infecção por Helicobacter pylori e sua associação com parasitoses intestinais em crianças da comunidade indígena do Parque Indígena do Xingu. MÉTODOS: Foram incluídas 245 crianças indígenas entre 2 e 9 anos, de seis aldeias da região do rio Xingu, afluente do Amazonas. H. pylori foi detectado pelo teste respiratório com ureia-13C. Foram coletadas amostras de ar expirado, em jejum e 30 minutos após a ingestão de 50 mg de ureia-13C diluída em 100 mL de água aromatizada com suco de maracujá. Foram coletadas amostras de fezes de 202/245 (82,4%) crianças para exame protoparasitológico. RESULTADOS: A prevalência do H. pylori foi de 73,5%. Foi observada associação significativa do H. pylori com maior idade entre as diferentes aldeias e etnias. Resultaram positivas para a presença de parasitas 97,5% (198/202) das amostras de fezes, sem associação com a infecção por H. pylori. Encontrou-se, na análise multivariada, uma relação entre a infecção por giárdia e o H. pylori. As etnias Kisêjê [odds ratio (OR) = 3,36] e Kaibi (OR = 4,00), e as aldeias Tuiararé (OR = 8,10), Ngojwere (OR = 4,10), Capivara (OR = 4,88), Diauarum (OR = 1,85) e Pavuru (OR = 1,40) foram fatores de risco para a infecção por H. pylori. CONCLUSÕES: Foi encontrada alta prevalência de H. pylori e de parasitose intestinal em crianças nas comunidades presentemente investigadas. No entanto, houve diferença significativa na prevalência do H. pylori entre as diversas aldeias estudadas. Verificou-se associação entre a presença de giárdia e a infecção por H. pylori