5 research outputs found
Inline-tandem purification of viruses from cell lysate by agarose-based chromatography
An efficient chromatography-based virus purification method has been developed and validated for the nonpathogenic infectious virus PRD1. Compared to the conventional method that consists of relatively time-consuming and labour-intensive precipitation and density gradient ultracentrifugation steps, the method developed here is performed in a single flow using tandem-coupled anion exchange and size exclusion chromatography (AIEX-SEC) columns. This inline approach helps to minimize the loss of virus in the process and streamlines time consumption, since no physical transfer of the sample is required between purification steps. In the development process, sample feed composition, dynamic binding capacity and elution conditions for the AIEX resin as well as different exclusion limits for SEC resins were optimized to achieve maximal yield of pure infectious viruses. Utilizing this new approach, a high-quality virus sample was produced from a lysate feed in 320 min with a total yield of 13 mg purified particles per litre of cell lysate, constituting a 3.5-fold yield increase as compared to the conventional method, without compromising the high specific infectivity of the product (6 x 1012 to 7 x 10(12) pfu/mg of protein). The yield of infectious viruses of the lysate feed was 54%. The easy scalability of chromatography-based methods provide a direct route to industrial usage without any significant changes needed to be made to the purification regime. This is especially interesting as the method has high potential to be used for purification of various viruses and nanoparticles, including adenovirus.Peer reviewe
Promoter regulation : designing cells for biotechnological applications
The filamentous cyanobacteria Nostoc punctiforme ATCC 29133 is a model species fordevelopment of sustainable production methods of numerous compounds. One of its uniquefeatures is the anaerobic environment of the strains nitrogen fixing heterocyst cells. To be ableto properly utilize this environment, more knowledge regarding what regulates cell specificexpression is required. In this study, three motifs of the NsiR I promoter of Anabaena sp.PCC 7120 was studied in this system utilizing YFP-fluorescence as a reporter to determinetheir impact on spatial expression pattern. Investigations were performed on immobilizedcells with the use of confocal microscopy and results point towards sigma factor regulation
Odlingsmedium : Att ersÀtta fetalt kalvserum med ett kemiskt definierat substitut
SammanfattningProjektgrupp 14-X5 avser med denna rapport att ge avdelningen Bioreagens pĂ„ Thermo Fisher Scientific ett underlag för att pĂ„ sikt kunna byta ut fetalt kalvserum (FCS) mot ett kemiskt definierat suplement vid odling av mushybridomceller för produktion av monoklonala antikroppar. Thermo Fisher Scientific Ă€r ett vĂ€rldsomspĂ€nnande bioteknikföretag som utvecklar blodtestsystem som stöd för klinisk diagnos och uppföljning av allergier, astma och autoimmuna sjukdomar. Fetalt kalvserum Ă€r en tillsats i mĂ„nga odlingsmedier som ofta Ă€r nödvĂ€ndig för att cellerna ska vĂ€xa. Det finns dock mĂ„nga problem med FCS. Det Ă€r en biprodukt av köttindustrin och produceras pĂ„ ett etiskt tveksamt sĂ€tt, variation mellan olika batcher förekommer och dĂ„ det Ă€r en animalisk produkt finns en risk för kontamination av bland annat bakterier, virus och prioner. Av dessa anledningar vill man byta ut FCS mot ett kemiskt definierat, serumfritt supplement. Vi har utrett vilka Ă€mnen eller grupper av Ă€mnen som har störst potential att vara bra substitut för FCS, samt rangordnat dessa. Genom vĂ„ra artikelstudier har vi kommit fram till att man kan dela in alternativen i tre grupper: lipider, tillvĂ€xtfaktorer och smĂ„ biomolekyler. Bland lipiderna Ă€r det linol- och oljesyra som i flera artiklar har visats ha god effekt pĂ„ bĂ„de celltillvĂ€xt och antikroppsproduktion. Kolesterol har Ă€ven visats ha positiva effekter. TillvĂ€xtfaktorerna som har valts Ă€r epidermal growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF), interleukin-2 (IL-2) och interleukin-6 (IL-6). Dessa har frĂ€mst en positiv effekt pĂ„ cellernas antikroppsproduktion. Bland de smĂ„ biomolekyler som har valts ut finns en mĂ€ngd olika Ă€mnen som pĂ„ olika sĂ€tt kan bidra till att skapa en bra miljö för hybridomceller i ett serumfritt medium. För att fĂ„ en klarare bild av de olika förslagen har de jĂ€mförts. Vi menar att de Ă€mnen som Ă€r komponenter i det basala mediet Ham F-12 bör prioriteras dĂ„ det anvĂ€nds som standard vid odling av en bred grupp av celltyper. Denna grupp inkluderar linolsyra, putrescin, tymidin, hypoxantin samt liponsyra. DĂ€refter anser vi att Ă„terstĂ„ende lipider (oljesyra och kolesterol) ska prioriteras dĂ„ de har visats kunna öka bĂ„de hybridomcellers tillvĂ€xt och antikroppsproduktion i ett serumfritt medium. TillvĂ€xtfaktorer, som frĂ€mst ökar antikroppsproduktionen hos cellerna och i vissa fall Ă€ven deras livslĂ€ngd placerar vi pĂ„ tredje plats i vĂ„r rangordning. Ăvriga Ă€mnen i gruppen âSmĂ„ biomolekylerâ (paraaminobensoesyra och glutation) prioriterar vi sist dĂ„ de inte Ă€r komponenter i Ham F-12 och de inte explicit visats pĂ„verka celltillvĂ€xten ellerantikroppsproduktionen, men har identifierats i det serumfria mediet IBL media III
Odlingsmedium : Att ersÀtta fetalt kalvserum med ett kemiskt definierat substitut
SammanfattningProjektgrupp 14-X5 avser med denna rapport att ge avdelningen Bioreagens pĂ„ Thermo Fisher Scientific ett underlag för att pĂ„ sikt kunna byta ut fetalt kalvserum (FCS) mot ett kemiskt definierat suplement vid odling av mushybridomceller för produktion av monoklonala antikroppar. Thermo Fisher Scientific Ă€r ett vĂ€rldsomspĂ€nnande bioteknikföretag som utvecklar blodtestsystem som stöd för klinisk diagnos och uppföljning av allergier, astma och autoimmuna sjukdomar. Fetalt kalvserum Ă€r en tillsats i mĂ„nga odlingsmedier som ofta Ă€r nödvĂ€ndig för att cellerna ska vĂ€xa. Det finns dock mĂ„nga problem med FCS. Det Ă€r en biprodukt av köttindustrin och produceras pĂ„ ett etiskt tveksamt sĂ€tt, variation mellan olika batcher förekommer och dĂ„ det Ă€r en animalisk produkt finns en risk för kontamination av bland annat bakterier, virus och prioner. Av dessa anledningar vill man byta ut FCS mot ett kemiskt definierat, serumfritt supplement. Vi har utrett vilka Ă€mnen eller grupper av Ă€mnen som har störst potential att vara bra substitut för FCS, samt rangordnat dessa. Genom vĂ„ra artikelstudier har vi kommit fram till att man kan dela in alternativen i tre grupper: lipider, tillvĂ€xtfaktorer och smĂ„ biomolekyler. Bland lipiderna Ă€r det linol- och oljesyra som i flera artiklar har visats ha god effekt pĂ„ bĂ„de celltillvĂ€xt och antikroppsproduktion. Kolesterol har Ă€ven visats ha positiva effekter. TillvĂ€xtfaktorerna som har valts Ă€r epidermal growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF), interleukin-2 (IL-2) och interleukin-6 (IL-6). Dessa har frĂ€mst en positiv effekt pĂ„ cellernas antikroppsproduktion. Bland de smĂ„ biomolekyler som har valts ut finns en mĂ€ngd olika Ă€mnen som pĂ„ olika sĂ€tt kan bidra till att skapa en bra miljö för hybridomceller i ett serumfritt medium. För att fĂ„ en klarare bild av de olika förslagen har de jĂ€mförts. Vi menar att de Ă€mnen som Ă€r komponenter i det basala mediet Ham F-12 bör prioriteras dĂ„ det anvĂ€nds som standard vid odling av en bred grupp av celltyper. Denna grupp inkluderar linolsyra, putrescin, tymidin, hypoxantin samt liponsyra. DĂ€refter anser vi att Ă„terstĂ„ende lipider (oljesyra och kolesterol) ska prioriteras dĂ„ de har visats kunna öka bĂ„de hybridomcellers tillvĂ€xt och antikroppsproduktion i ett serumfritt medium. TillvĂ€xtfaktorer, som frĂ€mst ökar antikroppsproduktionen hos cellerna och i vissa fall Ă€ven deras livslĂ€ngd placerar vi pĂ„ tredje plats i vĂ„r rangordning. Ăvriga Ă€mnen i gruppen âSmĂ„ biomolekylerâ (paraaminobensoesyra och glutation) prioriterar vi sist dĂ„ de inte Ă€r komponenter i Ham F-12 och de inte explicit visats pĂ„verka celltillvĂ€xten ellerantikroppsproduktionen, men har identifierats i det serumfria mediet IBL media III
Odlingsmedium : Att ersÀtta fetalt kalvserum med ett kemiskt definierat substitut
SammanfattningProjektgrupp 14-X5 avser med denna rapport att ge avdelningen Bioreagens pĂ„ Thermo Fisher Scientific ett underlag för att pĂ„ sikt kunna byta ut fetalt kalvserum (FCS) mot ett kemiskt definierat suplement vid odling av mushybridomceller för produktion av monoklonala antikroppar. Thermo Fisher Scientific Ă€r ett vĂ€rldsomspĂ€nnande bioteknikföretag som utvecklar blodtestsystem som stöd för klinisk diagnos och uppföljning av allergier, astma och autoimmuna sjukdomar. Fetalt kalvserum Ă€r en tillsats i mĂ„nga odlingsmedier som ofta Ă€r nödvĂ€ndig för att cellerna ska vĂ€xa. Det finns dock mĂ„nga problem med FCS. Det Ă€r en biprodukt av köttindustrin och produceras pĂ„ ett etiskt tveksamt sĂ€tt, variation mellan olika batcher förekommer och dĂ„ det Ă€r en animalisk produkt finns en risk för kontamination av bland annat bakterier, virus och prioner. Av dessa anledningar vill man byta ut FCS mot ett kemiskt definierat, serumfritt supplement. Vi har utrett vilka Ă€mnen eller grupper av Ă€mnen som har störst potential att vara bra substitut för FCS, samt rangordnat dessa. Genom vĂ„ra artikelstudier har vi kommit fram till att man kan dela in alternativen i tre grupper: lipider, tillvĂ€xtfaktorer och smĂ„ biomolekyler. Bland lipiderna Ă€r det linol- och oljesyra som i flera artiklar har visats ha god effekt pĂ„ bĂ„de celltillvĂ€xt och antikroppsproduktion. Kolesterol har Ă€ven visats ha positiva effekter. TillvĂ€xtfaktorerna som har valts Ă€r epidermal growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF), interleukin-2 (IL-2) och interleukin-6 (IL-6). Dessa har frĂ€mst en positiv effekt pĂ„ cellernas antikroppsproduktion. Bland de smĂ„ biomolekyler som har valts ut finns en mĂ€ngd olika Ă€mnen som pĂ„ olika sĂ€tt kan bidra till att skapa en bra miljö för hybridomceller i ett serumfritt medium. För att fĂ„ en klarare bild av de olika förslagen har de jĂ€mförts. Vi menar att de Ă€mnen som Ă€r komponenter i det basala mediet Ham F-12 bör prioriteras dĂ„ det anvĂ€nds som standard vid odling av en bred grupp av celltyper. Denna grupp inkluderar linolsyra, putrescin, tymidin, hypoxantin samt liponsyra. DĂ€refter anser vi att Ă„terstĂ„ende lipider (oljesyra och kolesterol) ska prioriteras dĂ„ de har visats kunna öka bĂ„de hybridomcellers tillvĂ€xt och antikroppsproduktion i ett serumfritt medium. TillvĂ€xtfaktorer, som frĂ€mst ökar antikroppsproduktionen hos cellerna och i vissa fall Ă€ven deras livslĂ€ngd placerar vi pĂ„ tredje plats i vĂ„r rangordning. Ăvriga Ă€mnen i gruppen âSmĂ„ biomolekylerâ (paraaminobensoesyra och glutation) prioriterar vi sist dĂ„ de inte Ă€r komponenter i Ham F-12 och de inte explicit visats pĂ„verka celltillvĂ€xten ellerantikroppsproduktionen, men har identifierats i det serumfria mediet IBL media III