Inline-tandem purification of viruses from cell lysate by agarose-based chromatography

An efficient chromatography-based virus purification method has been developed and validated for the nonpathogenic infectious virus PRD1. Compared to the conventional method that consists of relatively time-consuming and labour-intensive precipitation and density gradient ultracentrifugation steps, the method developed here is performed in a single flow using tandem-coupled anion exchange and size exclusion chromatography (AIEX-SEC) columns. This inline approach helps to minimize the loss of virus in the process and streamlines time consumption, since no physical transfer of the sample is required between purification steps. In the development process, sample feed composition, dynamic binding capacity and elution conditions for the AIEX resin as well as different exclusion limits for SEC resins were optimized to achieve maximal yield of pure infectious viruses. Utilizing this new approach, a high-quality virus sample was produced from a lysate feed in 320 min with a total yield of 13 mg purified particles per litre of cell lysate, constituting a 3.5-fold yield increase as compared to the conventional method, without compromising the high specific infectivity of the product (6 x 1012 to 7 x 10(12) pfu/mg of protein). The yield of infectious viruses of the lysate feed was 54%. The easy scalability of chromatography-based methods provide a direct route to industrial usage without any significant changes needed to be made to the purification regime. This is especially interesting as the method has high potential to be used for purification of various viruses and nanoparticles, including adenovirus.Peer reviewe

Promoter regulation : designing cells for biotechnological applications

The filamentous cyanobacteria Nostoc punctiforme ATCC 29133 is a model species fordevelopment of sustainable production methods of numerous compounds. One of its uniquefeatures is the anaerobic environment of the strains nitrogen fixing heterocyst cells. To be ableto properly utilize this environment, more knowledge regarding what regulates cell specificexpression is required. In this study, three motifs of the NsiR I promoter of Anabaena sp.PCC 7120 was studied in this system utilizing YFP-fluorescence as a reporter to determinetheir impact on spatial expression pattern. Investigations were performed on immobilizedcells with the use of confocal microscopy and results point towards sigma factor regulation

Odlingsmedium : Att ersätta fetalt kalvserum med ett kemiskt definierat substitut

SammanfattningProjektgrupp 14-X5 avser med denna rapport att ge avdelningen Bioreagens på Thermo Fisher Scientific ett underlag för att på sikt kunna byta ut fetalt kalvserum (FCS) mot ett kemiskt definierat suplement vid odling av mushybridomceller för produktion av monoklonala antikroppar. Thermo Fisher Scientific är ett världsomspännande bioteknikföretag som utvecklar blodtestsystem som stöd för klinisk diagnos och uppföljning av allergier, astma och autoimmuna sjukdomar. Fetalt kalvserum är en tillsats i många odlingsmedier som ofta är nödvändig för att cellerna ska växa. Det finns dock många problem med FCS. Det är en biprodukt av köttindustrin och produceras på ett etiskt tveksamt sätt, variation mellan olika batcher förekommer och då det är en animalisk produkt finns en risk för kontamination av bland annat bakterier, virus och prioner. Av dessa anledningar vill man byta ut FCS mot ett kemiskt definierat, serumfritt supplement. Vi har utrett vilka ämnen eller grupper av ämnen som har störst potential att vara bra substitut för FCS, samt rangordnat dessa. Genom våra artikelstudier har vi kommit fram till att man kan dela in alternativen i tre grupper: lipider, tillväxtfaktorer och små biomolekyler. Bland lipiderna är det linol- och oljesyra som i flera artiklar har visats ha god effekt på både celltillväxt och antikroppsproduktion. Kolesterol har även visats ha positiva effekter. Tillväxtfaktorerna som har valts är epidermal growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF), interleukin-2 (IL-2) och interleukin-6 (IL-6). Dessa har främst en positiv effekt på cellernas antikroppsproduktion. Bland de små biomolekyler som har valts ut finns en mängd olika ämnen som på olika sätt kan bidra till att skapa en bra miljö för hybridomceller i ett serumfritt medium. För att få en klarare bild av de olika förslagen har de jämförts. Vi menar att de ämnen som är komponenter i det basala mediet Ham F-12 bör prioriteras då det används som standard vid odling av en bred grupp av celltyper. Denna grupp inkluderar linolsyra, putrescin, tymidin, hypoxantin samt liponsyra. Därefter anser vi att återstående lipider (oljesyra och kolesterol) ska prioriteras då de har visats kunna öka både hybridomcellers tillväxt och antikroppsproduktion i ett serumfritt medium. Tillväxtfaktorer, som främst ökar antikroppsproduktionen hos cellerna  och i vissa fall även deras livslängd placerar vi på tredje plats i vår rangordning. Övriga ämnen i gruppen “Små biomolekyler” (paraaminobensoesyra och glutation) prioriterar vi sist då de inte är komponenter i Ham F-12 och de inte explicit visats påverka celltillväxten ellerantikroppsproduktionen, men har identifierats i det serumfria mediet IBL media III

Odlingsmedium : Att ersätta fetalt kalvserum med ett kemiskt definierat substitut

SammanfattningProjektgrupp 14-X5 avser med denna rapport att ge avdelningen Bioreagens på Thermo Fisher Scientific ett underlag för att på sikt kunna byta ut fetalt kalvserum (FCS) mot ett kemiskt definierat suplement vid odling av mushybridomceller för produktion av monoklonala antikroppar. Thermo Fisher Scientific är ett världsomspännande bioteknikföretag som utvecklar blodtestsystem som stöd för klinisk diagnos och uppföljning av allergier, astma och autoimmuna sjukdomar. Fetalt kalvserum är en tillsats i många odlingsmedier som ofta är nödvändig för att cellerna ska växa. Det finns dock många problem med FCS. Det är en biprodukt av köttindustrin och produceras på ett etiskt tveksamt sätt, variation mellan olika batcher förekommer och då det är en animalisk produkt finns en risk för kontamination av bland annat bakterier, virus och prioner. Av dessa anledningar vill man byta ut FCS mot ett kemiskt definierat, serumfritt supplement. Vi har utrett vilka ämnen eller grupper av ämnen som har störst potential att vara bra substitut för FCS, samt rangordnat dessa. Genom våra artikelstudier har vi kommit fram till att man kan dela in alternativen i tre grupper: lipider, tillväxtfaktorer och små biomolekyler. Bland lipiderna är det linol- och oljesyra som i flera artiklar har visats ha god effekt på både celltillväxt och antikroppsproduktion. Kolesterol har även visats ha positiva effekter. Tillväxtfaktorerna som har valts är epidermal growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF), interleukin-2 (IL-2) och interleukin-6 (IL-6). Dessa har främst en positiv effekt på cellernas antikroppsproduktion. Bland de små biomolekyler som har valts ut finns en mängd olika ämnen som på olika sätt kan bidra till att skapa en bra miljö för hybridomceller i ett serumfritt medium. För att få en klarare bild av de olika förslagen har de jämförts. Vi menar att de ämnen som är komponenter i det basala mediet Ham F-12 bör prioriteras då det används som standard vid odling av en bred grupp av celltyper. Denna grupp inkluderar linolsyra, putrescin, tymidin, hypoxantin samt liponsyra. Därefter anser vi att återstående lipider (oljesyra och kolesterol) ska prioriteras då de har visats kunna öka både hybridomcellers tillväxt och antikroppsproduktion i ett serumfritt medium. Tillväxtfaktorer, som främst ökar antikroppsproduktionen hos cellerna  och i vissa fall även deras livslängd placerar vi på tredje plats i vår rangordning. Övriga ämnen i gruppen “Små biomolekyler” (paraaminobensoesyra och glutation) prioriterar vi sist då de inte är komponenter i Ham F-12 och de inte explicit visats påverka celltillväxten ellerantikroppsproduktionen, men har identifierats i det serumfria mediet IBL media III

Odlingsmedium : Att ersätta fetalt kalvserum med ett kemiskt definierat substitut

SammanfattningProjektgrupp 14-X5 avser med denna rapport att ge avdelningen Bioreagens på Thermo Fisher Scientific ett underlag för att på sikt kunna byta ut fetalt kalvserum (FCS) mot ett kemiskt definierat suplement vid odling av mushybridomceller för produktion av monoklonala antikroppar. Thermo Fisher Scientific är ett världsomspännande bioteknikföretag som utvecklar blodtestsystem som stöd för klinisk diagnos och uppföljning av allergier, astma och autoimmuna sjukdomar. Fetalt kalvserum är en tillsats i många odlingsmedier som ofta är nödvändig för att cellerna ska växa. Det finns dock många problem med FCS. Det är en biprodukt av köttindustrin och produceras på ett etiskt tveksamt sätt, variation mellan olika batcher förekommer och då det är en animalisk produkt finns en risk för kontamination av bland annat bakterier, virus och prioner. Av dessa anledningar vill man byta ut FCS mot ett kemiskt definierat, serumfritt supplement. Vi har utrett vilka ämnen eller grupper av ämnen som har störst potential att vara bra substitut för FCS, samt rangordnat dessa. Genom våra artikelstudier har vi kommit fram till att man kan dela in alternativen i tre grupper: lipider, tillväxtfaktorer och små biomolekyler. Bland lipiderna är det linol- och oljesyra som i flera artiklar har visats ha god effekt på både celltillväxt och antikroppsproduktion. Kolesterol har även visats ha positiva effekter. Tillväxtfaktorerna som har valts är epidermal growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF), interleukin-2 (IL-2) och interleukin-6 (IL-6). Dessa har främst en positiv effekt på cellernas antikroppsproduktion. Bland de små biomolekyler som har valts ut finns en mängd olika ämnen som på olika sätt kan bidra till att skapa en bra miljö för hybridomceller i ett serumfritt medium. För att få en klarare bild av de olika förslagen har de jämförts. Vi menar att de ämnen som är komponenter i det basala mediet Ham F-12 bör prioriteras då det används som standard vid odling av en bred grupp av celltyper. Denna grupp inkluderar linolsyra, putrescin, tymidin, hypoxantin samt liponsyra. Därefter anser vi att återstående lipider (oljesyra och kolesterol) ska prioriteras då de har visats kunna öka både hybridomcellers tillväxt och antikroppsproduktion i ett serumfritt medium. Tillväxtfaktorer, som främst ökar antikroppsproduktionen hos cellerna  och i vissa fall även deras livslängd placerar vi på tredje plats i vår rangordning. Övriga ämnen i gruppen “Små biomolekyler” (paraaminobensoesyra och glutation) prioriterar vi sist då de inte är komponenter i Ham F-12 och de inte explicit visats påverka celltillväxten ellerantikroppsproduktionen, men har identifierats i det serumfria mediet IBL media III