Clonación y expresión de la proteína MOMP de Chlamydia abortus en el sistema de Escherichia coli BL21: Clonagem e expressão da proteína MOMP de Chlamydia abortus no sistema Escherichia coli BL21

La bacteria Clamydophila abortus, ocasiona el aborto y la muerte temprana de crías débiles en el ganado caprino y ovino. Su detección es compleja y puede llevar a falsos negativos cuando ocurren reacciones cruzadas en algunas de las técnicas utilizadas. Por esta razón, el objetivo de este trabajo fue clonar y expresar la proteína MOMP de Chlamydophila abortus, para usarse como antígeno en el diagnóstico de la enfermedad ocasionada por esta bacteria. La proteína recombinante MOMP se produjo en E. coli BL21 y la confirmación de su expresión se hizo con un anticuerpo dirigido hacia la etiqueta de histidinas. La detección inmunogénica se realizó usando un suero positivo de referencia. Estos resultados permiten inferir que la proteína recombinante MOMP puede ser un buen candidato para el desarrollo de pruebas inmunológicas que permitan realizar un diagnóstico sensible y específico de la clamidiosis en México

Expresión de la proteína B8Y674 Candidatus Liberibacter asiaticus mediante electroforesis en geles de poliacrilamida (page) y dot blot: Expressão da proteína B8Y674 Candidatus Liberibacter asiaticus por eletroforese em gel de poliacrilamida (page) e dot blot

El Huanglongbing (HLB), es una de las enfermedades más devastadoras de los cítricos a nivel mundial y representa una seria amenaza para la citricultura mexicana. El agente causal es una bacteria incultivable que pertenece al género Candidatus Liberibacter spp. y afecta a todas las especies de cítricos, especialmente los cítricos agrios. Para su detección, se emplean técnicas moleculares como es la reacción en cadena de la polimerasa (QT-PCR), técnicas serológicas y espectrofotométricas. El objetivo de este trabajo fue expresar la proteína recombinante BY8743 de Candidatus Liberibacter mediante electroforesis en geles de poliacrilamida al 12 % (PAGE) y Dot Blot. Para obtener la secuencia se acudió a la base de datos del National Center Biotechnology Information (NCBI). Una vez obtenida la secuencia, se revisó y modificó el marco de lectura abierto, por sus siglas en ingles Open Reading Frame (ORF) mediante el programa CLC Main Workbench 7 y se procedió a sintetizar el vector pET22b+, también se verificó el codón de inicio y de termino acoplado al vector. Para la transformación se usaron células comerciales One Shot® TOP10 Chemically Competent (InvitrogenTM), posteriormente fueron subclonadas en células de E. coli BL21. Se realizaron minipreparaciones usando un método de lisis alcalina y además se realizó una cinética de crecimiento, observando que en tres horas se alcanza la fase estacionaria. Se aplicaron concentraciones de 0.5, 0.8 y 1 mM del inductor metabólico isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) y la mejor concentración fue 1 mM, ya que a las cuatro horas después de su aplicación se pudo visualizar una proteína sobreexpresada de 38 kDa. Cuando se realizó el Dot Blot se obtuvieron resultados sobresalientes de inmunoexpresión en las tres concentraciones del inductor utilizado a diferencia del control y de las células sin transfectar

Detección molecular de Candidatus Liberibacter asiaticus en naranjo agrio (Citrus aurantium L.) en el norte de Tamaulipas, México: Detecção molecular de Candidatus Liberibacter asiaticus em laranja azeveda (Citrus aurantium L.) no norte de Tamaulipas, México

El Huanglongbing (HLB), es una de las enfermedades más devastadoras de los cítricos a nivel mundial, el agente causal es una bacteria del género Candidatus Liberibacter spp., y afecta a todas las especies de cítricos, especialmente los cítricos agrios. Actualmente se han confirmado tres especies de la bacteria: Ca. L. asiáticus, Ca. L. americanus y Ca. L. africanus. Esta bacteria es transmitida por dos insectos vectores: Diaphorina citri (América y Asia) y Trioza erytrae (África), lo que favorece su rápida y eficaz diseminación, ocasionando cuantiosas pérdidas económicas, así como problemas sociales y ambientales. En este trabajo se realizó la optimización de la Reacción en Cadena de la Polimerasa punto final y Tiempo Real (PCR punto final y PCR-TR) para la detección de HLB en naranjo agrio en la zona norte del estado de Tamaulipas, México. Se procesaron 178 muestras (168 fueron de nervadura central de la hoja, ocho de raíz y dos muestras del vector). Mediante PCR punto final se detectó a la bacteria a partir del DNA extraído de hoja, pero no se detectó en el DNA extraído a partir de raíz y del vector. Mediante la PCR-TR se detectó a la bacteria a partir del ADN extraído de hoja y raíz de naranjo agrio y del insecto vector. Estos resultados demuestran que la PCR-TR es más eficiente que la PCR punto final para la detección de la bacteria en diferentes tejidos de la planta de naranjo agrio y en el insecto vector

Purificación y evaluación de la proteína p25 como antígeno recombinate en la dectección del virus de la artritis encefalitis caprina (AEC): Purificação e avaliação da proteína p25 do vírus da artrite encefalite caprina (CAE)

Para emplearse como antígeno en inmunoensayo indirecto, se purificó la proteína p25 recombinante del virus de la artritis encefalitis caprina mediante cromatografía de afinidad a iones metálicos inmovilizados. Se desarrollaron y estandarizaron las mejores condiciones que permitieron su fiabilidad, para después ser validada con un total de 46 muestras positivas y negativas de referencia. Se estableció la concentración de 4 µg/ml como óptima para la sensibilización de las microplacas. La robustez del ELISA se demostró utilizando como diseño el modelo de Youden y Stainer, y aplicando el criterio del comité de Secretaría de Salud. La concordancia respecto a un estuche comercial fue del 71.73 %, en cuanto a la sensibilidad y especificidad fue del 59.37 % y 100 %, respectivamente. Además, no se presentaron reacciones cruzadas para 3 antígenos probados previamente. Por lo tanto, se concluye que el método de ELISA recombinante implementado en este trabajo, es un método excelente, sencillo, barato y específico para el diagnóstico y tamizaje de la artritis encefalitis caprina, ya que disminuye las reacciones cruzadas

Selección de genotipos de papa con tolerancia al pardeamiento asociado con punta morada en campo y Bactericera cockerelli en invernadero

Para seleccionar genotipos de papa tolerantes al pardeamiento del tubérculo bajo condiciones de invernadero, durante el verano del 2012, se evaluaron 296 genotipos contra Bactericera cockerelli. Estos resultados se compararon con los obtenidos previamente con los mismos genotipos infectados con la punta morada de la papa en campo. En general se sembraron cuatro individuos de cada genotipo en macetas dentro de jaulas. Después de 30 días, se introdujeron en las mismas plantas de chile “Mixquic” infestadas con diferentes estadios del insecto. Se cuantificaron los adultos con trampas amarillas a los 30 días, y las ninfas, a los 45 días, con inspección visual al microscopio del número de individuos en cinco foliolos. Se realizaron análisis moleculares de los insectos con iniciadores específicos para el diagnóstico de fitoplasma y la bacteria Ca. Liberibacter solanacearum involucrados. Se registró el peso y el pardeamiento de los tubérculos por genotipo, los cuales fueron criterios de selección. Se compararon los datos de invernadero con los previamente obtenidos en campo para establecer alguna posible correlación. La población de adultos de B. cockerelli registrada por cuadrante (4-225) y de ninfas por planta (11-507), aseguró la colonización del insecto sobre cada genotipo probado. La colonia del psílido, resultó positiva a Ca. Liberibacter solanacearum. De los 296 genotipos evaluados, se seleccionaron 21 con rendimientos mayores a 80 gr/planta y tolerantes al pardeamiento con lecturas que fluctuaron de muy leve a leve. En el 61% de los genotipos evaluados los datos de rendimiento y pardeamiento, en invernadero y campo, fueron similares

Antagonism of two ascomycetes against Phytophthora capsici Leonian, causing wilt of pepper (Capsicum annuum L.)

"En esta investigación se evaluó la actividad antagónica y protección de plántulas in vitro del ascomiceto Xylaria poitei, y la actividad antagónica de éste en combinación con un ascomiceto desconocido (AD) contra P. capsici, causante de la marchitez del chile. Xylaria poitei protegió plántulas de chile y permitió la sobrevivencia de un 58.3% de las plántulas, mientras que el oomiceto causó 100% de mortandad; además este hongo inhibió el crecimiento micelial de P. capsici hasta un 49.6% en uno de los experimentos donde se establecieron confrontaciones duales. En confrontaciones triples ambos ascomicetos incrementan ligeramente su inhibición a los 12 días de establecida la confrontación contra P. capsici; y aún mantienen la inhibición del oomiceto cuatro días después. Ambos ascomicetos estimulan o inhiben su crecimiento en alguna fecha de evaluación durante la confrontación entre ellos. El medio líquido papa dextrosa expuesto al crecimiento de X. poitei (filtrado) tiene baja actividad contra el crecimiento micelial de P. capsici. Los resultados anteriores indican que la actividad antagónica de ambos ascomicetos contra P. capsici se incrementa cuando ambos crecen en forma combinada respecto a las confrontaciones duales, y sugieren que la actividad antagónica de X. poitei es estimulada por la presencia del oomicete.""In this study we evaluated the antagonistic activity and protection of seedlings in vitro of the ascomycete Xylaria poitei, and its antagonistic activity in combination with an unknown ascomycete (AD) against P. capsici, the cause of wilt in pepper. Xylariapoitei protected pepper seedlings and allowed 58.3% survival of seedlings, while the oomycete caused 100% mortality, besides this fungus inhibited the mycelial growth of P. capsici up to 49.6% in one of the experiments where they settled dual confrontations. In triple confrontations both ascomycetes increase slightly their inhibition at 12 days of confortation against P. capsici, and still maintain the inhibition of the oomycete four days later. It was observed that both ascomycetes stimulare or inhibit each other growth at some time during the evaluation of confortation. The potato dextrose liquid medium exposed to the growth of X. poitei (filtrate) has low activity against the mycelial growth of P. capsici. The above results indicate that the antagonistic activity of both ascomycetes againstbP. capsici increases when they grow in combination with respect to the dual confrontations, and suggest that the antagonistic activity of X. poitei is stimulated by the presence of the oomycete.

Antagonismo de dos ascomicetos contra phytophthora capsici leonian, causante de la marchitez del chile (capsicum annuum l.)

En esta investigación se evaluó la actividad antagónica y protección de plántulas in vitro del ascomiceto Xylaria poitei, y la actividad antagónica de éste en combinación con un ascomiceto desconocido (AD) contra P. capsici, causante de la marchitez del chile. Xylaria poitei protegió plántulas de chile y permitió la sobrevivencia de un 58.3% de las plántulas, mientras que el oomiceto causó 100% de mortandad; además este hongo inhibió el crecimiento micelial de P. capsici hasta un 49.6% en uno de los experimentos donde se establecieron confrontaciones duales. En confrontaciones triples ambos ascomicetos incrementan ligeramente su inhibición a los 12 días de establecida la confrontación contra P. capsici; y aún mantienen la inhibición del oomiceto cuatro días después. Ambos ascomicetos estimulan o inhiben su crecimiento en alguna fecha de evaluación durante la confrontación entre ellos. El medio líquido papa dextrosa expuesto al crecimiento de X. poitei (filtrado) tiene baja actividad contra el crecimiento micelial de P. capsici. Los resultados anteriores indican que la actividad antagónica de ambos ascomicetos contra P. capsici se incrementa cuando ambos crecen en forma combinada respecto a las confrontaciones duales, y sugieren que la actividad antagónica de X. poitei es estimulada por la presencia del oomicete