Yeast Double Transporter Gene Deletion Library for Identification of Xenobiotic Carriers in Low or High Throughput.

The routes of uptake and efflux should be considered when developing new drugs so that they can effectively address their intracellular targets. As a general rule, drugs appear to enter cells via protein carriers that normally carry nutrients or metabolites. A previously developed pipeline that searched for drug transporters using Saccharomyces cerevisiae mutants carrying single-gene deletions identified import routes for most compounds tested. However, due to the redundancy of transporter functions, we propose that this methodology can be improved by utilizing double mutant strains in both low- and high-throughput screens. We constructed a library of over 14,000 strains harboring double deletions of genes encoding 122 nonessential plasma membrane transporters and performed low- and high-throughput screens identifying possible drug import routes for 23 compounds. In addition, the high-throughput assay enabled the identification of putative efflux routes for 21 compounds. Focusing on azole antifungals, we were able to identify the involvement of the myo-inositol transporter, Itr1p, in the uptake of these molecules and to confirm the role of Pdr5p in their export. IMPORTANCE Our library of double transporter deletion strains is a powerful tool for rapid identification of potential drug import and export routes, which can aid in determining the chemical groups necessary for transport via specific carriers. This information may be translated into a better design of drugs for optimal absorption by target tissues and the development of drugs whose utility is less likely to be compromised by the selection of resistant mutants.Bill & Melinda Gates Foundation FAPES

Violacein-Induced Chaperone System Collapse Underlies Multistage Antiplasmodial Activity

Antimalarial drugs with novel modes of action and wide therapeutic potential are needed to pave the way for malaria eradication. Violacein is a natural compound known for its biological activity against cancer cells and several pathogens, including the malaria parasite, Plasmodium falciparum (Pf). Herein, using chemical genomic profiling (CGP), we found that violacein affects protein homeostasis. Mechanistically, violacein binds Pf chaperones, PfHsp90 and PfHsp70-1, compromising the latter's ATPase and chaperone activities. Additionally, violacein-treated parasites exhibited increased protein unfolding and proteasomal degradation. The uncoupling of the parasite stress response reflects the multistage growth inhibitory effect promoted by violacein. Despite evidence of proteotoxic stress, violacein did not inhibit global protein synthesis via UPR activation - a process that is highly dependent on chaperones, in agreement with the notion of a violacein-induced proteostasis collapse. Our data highlight the importance of a functioning chaperone-proteasome system for parasite development and differentiation. Thus, a violacein-like small molecule might provide a good scaffold for development of a novel probe for examining the molecular chaperone network and/or antiplasmodial drug design.publishersversionpublishe

Síndrome de Ehrlers-Danlos: Ehrlers-Danlos Syndrome

INTRODUÇÃO: A Síndrome de Ehlers-Danlos (SED) refere-se a distúrbios hereditários do tecido conjuntivo e da função do colágeno provocando como manifestações principais a hiperextensibilidade da pele, a hipermobilidade articular e a fragilidade de tecidos. De acordo com a Classificação Internacional de 2017, são reconhecidos 13 diferentes subtipos que caracterizam a sua extensa variabilidade clínica, por conseguinte, seu difícil diagnóstico. Embora apresente rara incidência, possui alta complexidade no tratamento multidisciplinar de suas complicações clínicas, o que motiva maior produção de literatura científica, ainda escassa, principalmente em território nacional. APRESENTAÇÃO DO CASO: M.M.V.R., 30 anos, sexo feminino, raça branca, G2P2, com história familiar positiva para hipermobilidade articular com queixa de dor crônica que piorou há cerca de 15 anos, associado a sintomas gastrointestinais, dermatológicos e vasculares. DISCUSSÃO: Realizou-se o diagnóstico de SED, com base na história clínica e no exame físico, utilizando-se os critérios de Beighton, a paciente foi encaminhada para acompanhamento multidisciplinar, com adesão ao tratamento observou-se melhora na qualidade de vida da paciente. CONCLUSÃO: É de se notar, portanto, que a SED é extremamente complexa desde o diagnóstico ao manejo, porém, este relato evidenciou que o diagnóstico precoce associado a um projeto terapêutico multidisciplinar pode trazer resultados impactantes

Laceração esplênica: AAST grau IV: Splenic laceration: AAST grade IV

Introdução: Em vítimas de trauma abdominal fechado, cerca de 13% das lesões são esplênicas. Devido a importância dessas lesões, algumas mudanças quanto ao tratamento foram realizadas ao longo dos anos. Foi criada uma escala de pontuação que reflete lesões por ordem de gravidade, impactando na conduta terapêutica de escolha, restringindo atuações cirúrgicas apenas a quadros mais severos. Apresentação do caso: Sexo masculino, 29 anos, com relato de trauma contuso em hipocôndrio esquerdo, orientado, verbalizando, palidez cutaneo-mucosa, hipotensão, taquipneia, abdome globoso, rígido e sinal de Kehr positivo. Observada lesão esplênica grau IV em laparotomia exploradora, evoluindo para esplenectomia total e lavagem da cavidade abdominal. Discussão: As lesões esplênicas mais frequentes são as de classificação grau IV. Atualmente o padrão-ouro para trauma esplênico é o tratamento não-operatório, devendo ser realizado junto à angioembolização da artéria esplênica em lesões graves e paciente hemodinamicamente estável. Mas em casos de instabilidade hemodinâmica, adota-se a laparotomia imediata e a esplenectomia. Conclusão: O baço é um órgão com importância significativa no sistema imune e hematopoiético, e por isso foi criada uma escala de pontuação pela Associação Americana de Cirurgia do Trauma (AAST) com a finalidade de determinar a gravidade das lesões esplênicas e evitar condutas cirúrgicas desnecessárias

Transcriptional regulation and molecular basis of Moniliophthora perniciosa homothallic sexual development

Orientador: Gonçalo Amarante Guimarães PereiraDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: O ciclo sexual de basidiomicetos é controlado pelo sistema mating type. Este é formado por dois loci multigênicos não ligados A e B, o locus A codifica duas proteínas homeodomínio HD1 e HD2, capazes de heterodimerização, enquanto o locus B apresenta genes para receptores de feromônio e feromônios. Em fungos heterotálicos, o desenvolvimento sexual depende da especificidade entre os quatro alelos, sistema este chamado tetrapolar, e é ativado apenas por interações específicas entre alelos parentais necessariamente diferentes, assegurando que hifas geneticamente iguais sejam incompatíveis. Em contrapartida, a condição na qual hifas geneticamente iguais são compatíveis é denominada homotalismo. Fungos basidiomicetos são tipicamente heterotálicos, no entanto, apesar de pertencer a este filo, o fitopatógeno Moniliophthora perniciosa, causador da doença Vassoura de Bruxa no cacaueiro, é classificado como homotálico primário. Curiosamente, apesar desta classificação, M. perniciosa contém um sistema genético tetrapolar, sendo o primeiro fungo descrito com essa característica. Neste trabalho, foi realizada a caracterização dos loci mating type em M. perniciosa e verificamos o perfil transcricional destes genes com o objetivo de entender os mecanismos moleculares que atuam no seu comportamento homotálico. Primeiramente, foram identificados no genoma um locus A e um locus B, além de genes atuantes no processamento e sinalização em resposta aos feromônios. O estudo do perfil transcricional destes genes revelou que um receptor tem um perfil de expressão condizente com a fase do ciclo de vida do fungo na qual ocorre o processo de dicariotização. A análise funcional dos receptores foi realizada em um sistema expressão heteróloga, promissor para o estudo de GPCRs (G coupled proteins receptors), porém não permitiu confirmar a presença de alelos compatíveis de receptores e precursores de feromônios no genoma de M. perniciosa como uma possível explicação ao comportamento homotálico. Tendo em vista o locus A, este é formado por um par MpHD1 e MpHD2, o que difere de outros basidiomicetos devido a inserção de uma sequência (11,958kb) interrompendo seus promotores. A hipótese neste cenário é que o transposon encontrado no locus A poderia ter permitido um crossover desigual que trariam genes compatíveis para o mesmo alelo, sendo responsável pelo homotalismo na espécie. Contrariando essa hipótese, os dados obtidos neste projeto indicam que uma possível transição prévia ao homotalismo resultou em uma pressão seletiva relaxada sobre os loci mating type, cuja consequência foi a degeneração nos genes destes loci. Neste contexto, os genes do mating type poderiam não estar mais envolvidos na dicariotização. Este trabalho, portanto, fornece importantes dados para o entendimento da biologia sexual deste fungo, o que futuramente poderá ser correlacionado a sua fitopatogenicidadeAbstract: The basidiomycetes¿ sexual cycle is controlled by the mating type system. The structure of this system comprises two unlinked multigenic loci, A and B. The A locus codes for homeodomain proteins, HD1 e HD2 which form a heterodimer, and B locus presents pheromone receptors and pheromones. In outcrossing (heterothallic) fungi, sexual development depends on the compatibility of four genes in two different allelic versions in a so-called tetrapolar system, and is strictly activated by specific interactions between different parental alleles, ensuring that genetically identical hyphae are incompatible. The phytopathogen Moniliophthora perniciosa causes Witches¿ broom disease in cacao plants, and it is a typical basidiomycete fungi. However, it completes its sexual development through the crossing of genetically identical hyphae, and is the first described homothallic fungi with a complete tetrapolar genetic system. Here we show the characterization of the mating type loci of M. perniciosa and the transcriptional profile of these genes, to uncover the mechanisms underpinning its homothallic behavior. First, we identified an A locus, a B locus and a set of genes that participates in pheromone processing and signalization. Considering the transcriptional profile of these genes, one receptor shows an expression profile consistent with an involvement in dikaryotization. The functional evaluation of the receptors was performed in a heterologous expression system, a promising tool for GPCR (G coupled proteins receptors) proteins study. This system did not allow the confirmation if M. perniciosa contains compatible alleles for receptors and pheromones, one possible explanation for homothallism. Considering A locus, it codes for a pair MpHD1 and MpHD2, which has a sequence insertion (11,958kb) interrupting their promoters, differing from others basidiomycetes. The hypothesis in this scenario is that the insertion of a transposon could have allowed an unequal crossover that brought together compatible genes in the same allele, causing the homothallism in this species. Interestingly, in an opposite direction, our data indicates that a previous transition for homothallism could have resulted in a relaxed selective pressure on mating type loci, with consequences such as the presence of degenerated genes on these loci. In this context, the mating type genes could not necessarily play a role in dikaryotization process. This work provides valuable data for understanding the sexual biology of M. perniciosa, which hereafter could be correlated with its phytopathogenicityMestradoGenetica de MicroorganismosMestra em Genética e Biologia Molecula

ATLANTIC ANTS: a data set of ants in Atlantic Forests of South America

International audienc

NEOTROPICAL CARNIVORES: a data set on carnivore distribution in the Neotropics

Mammalian carnivores are considered a key group in maintaining ecological health and can indicate potential ecological integrity in landscapes where they occur. Carnivores also hold high conservation value and their habitat requirements can guide management and conservation plans. The order Carnivora has 84 species from 8 families in the Neotropical region: Canidae; Felidae; Mephitidae; Mustelidae; Otariidae; Phocidae; Procyonidae; and Ursidae. Herein, we include published and unpublished data on native terrestrial Neotropical carnivores (Canidae; Felidae; Mephitidae; Mustelidae; Procyonidae; and Ursidae). NEOTROPICAL CARNIVORES is a publicly available data set that includes 99,605 data entries from 35,511 unique georeferenced coordinates. Detection/non-detection and quantitative data were obtained from 1818 to 2018 by researchers, governmental agencies, non-governmental organizations, and private consultants. Data were collected using several methods including camera trapping, museum collections, roadkill, line transect, and opportunistic records. Literature (peer-reviewed and grey literature) from Portuguese, Spanish and English were incorporated in this compilation. Most of the data set consists of detection data entries (n = 79,343; 79.7%) but also includes non-detection data (n = 20,262; 20.3%). Of those, 43.3% also include count data (n = 43,151). The information available in NEOTROPICAL CARNIVORES will contribute to macroecological, ecological, and conservation questions in multiple spatio-temporal perspectives. As carnivores play key roles in trophic interactions, a better understanding of their distribution and habitat requirements are essential to establish conservation management plans and safeguard the future ecological health of Neotropical ecosystems. Our data paper, combined with other large-scale data sets, has great potential to clarify species distribution and related ecological processes within the Neotropics. There are no copyright restrictions and no restriction for using data from this data paper, as long as the data paper is cited as the source of the information used. We also request that users inform us of how they intend to use the data