Dégradabilité de l’azote de tourteaux gras de colza obtenus par pressage à chaud et à froid : études in sacco et in vitro

Suite à l’autorisation d’utiliser de l’huile végétale comme carburant agricole, des éleveurs se sont équipés de presses pour extraire l’huile des graines de colza. Contrairement aux process industriels, cette méthode est réalisée sans chauffage. Le coproduit de cette extraction est un tourteau dit fermier ou gras car l’extraction de l’huile est incomplète. Ces tourteaux fermiers peuvent être utilisés en alimentation des ruminants comme source protéique ; leur valorisation nécessite la connaissance de la dégradabilité ruminale de l'azote (DTN). L'objectif de cette étude était de déterminer cette DTN par la méthode de référence in sacco, de préciser si cette DTN pouvait être déterminée in vitro par la méthode de dégradation enzymatique (DE1) avec les mêmes équations que pour les tourteaux de colza industriels, et de comparer la DTN des tourteaux fermiers à celle de tourteaux industriels expeller obtenus par cuisson et pressage. La DTN des tourteaux fermiers de colza est élevée, ce qui a comme conséquence une faible valeur PDIE et est donc une limite à leur valorisation, sauf en quantité limitée sur des rations très déficitaires en azote dégradable, type ensilage de maïs. Cette DTN peut être déterminée in vitro en appliquant les équations de correction proposées pour les tourteaux de colza. La DTN des tourteaux industriels expeller est beaucoup plus faible que celle des tourteaux fermiers, bien que supérieure à celle des tourteaux déshuilés, et est surestimée par la méthode enzymatique

Mutations in the aryl hydrocarbon receptor interacting protein gene are not highly prevalent among subjects with sporadic pituitary adenomas.

CONTEXT: Limited screening suggests that three germline mutations in the aryl hydrocarbon receptor interacting protein (AIP) gene are not involved in sporadic pituitary tumorigenesis. Multiple novel mutations of this gene have since been identified in familial isolated pituitary adenoma cohorts. OBJECTIVE: The objective of the study was to undertake full AIP coding sequence screening to assess for the presence of germline and somatic mutations in European Union subjects with sporadic pituitary tumors. DESIGN: The study design was the analysis of DNA from peripheral blood lymphocytes and analysis of exons 1-6 and paraexonic intron sequences of AIP. Multiplex ligation-dependent probe amplification was used to screen separate sporadic pituitary tumor tissue samples for discrete and extensive deletions or mutations of the AIP gene. Setting: The study was conducted in university tertiary referral Clinical Genetics, Molecular Biology, and Endocrinology Departments. RESULTS: In 107 patients [prolactinomas (n =49), nonfunctioning tumors (n = 29), somatotropinomas (n = 26), ACTH-secreting tumors (n = 2), TSH-secreting tumors (n = 1)], no germline mutations of AIP were demonstrated. Among a group of 41 tumor samples from other subjects, a novel AIP mutation (R22X) was found in one sample in which the corresponding allele was deleted; follow-up screening of the patient demonstrated a germline R22X AIP mutation. CONCLUSIONS: AIP mutations do not appear to play a prominent role in sporadic pituitary tumorigenesis in this population of European subjects

Identifying the Deleterious Effect of Rare LHX4 Allelic Variants, a Challenging Issue

International audienceLHX4 is a LIM homeodomain transcription factor involved in the early steps of pituitary ontogenesis. To date, 8 heterozygous LHX4 mutations have been reported as responsible of combined pituitary hormone deficiency (CPHD) in Humans. We identified 4 new LHX4 heterozygous allelic variants in patients with congenital hypopituitarism: W204X, delK242, N271S and Q346R. Our objective was to determine the role of LHX4 variants in patients' phenotypes. Heterologous HEK293T cells were transfected with plasmids encoding for wild-type or mutant LHX4. Protein expression was analysed by Western Blot, and DNA binding by electro-mobility shift assay experiments. Target promoters of LHX4 were cotransfected with wild type or mutant LHX4 to test the transactivating abilities of each variant. Our results show that the W204X mutation was associated with early GH and TSH deficiencies and later onset ACTH deficiency. It led to a truncated protein unable to bind to alpha-Gsu promoter binding consensus sequence. W204X was not able to activate target promoters in vitro. Cotransfection experiments did not favour a dominant negative effect. In contrast, all other mutants were able to bind the promoters and led to an activation similar as that observed with wild type LHX4, suggesting that they were likely polymorphisms. To conclude, our study underlines the need for functional in vitro studies to ascertain the role of rare allelic variants of LHX4 in disease phenotypes. It supports the causative role of the W204X mutation in CPHD and adds up childhood onset ACTH deficiency to the clinical spectrum of the various phenotypes related to LHX4 mutations

La cascade des MAPkinases ERK [extracellular regulated kinase]-1/2 (un point de convergence entre les voies de signalisation impliquées dans la régulation somatolactotrope)

La fonction hypophysaire est régulée par de nombreux signaux activant différents types de récepteurs, en particulier les récepteurs couplés aux protéines G hétérotrimériques (comme les récepteurs du VIP, du PACAP et du TRH) et les récepteurs à activité tyrosine kinase (comme les récepteurs de l EGF et de l IGF-1). Dans les cellules ante-hypophysaires, le rôle de la cascade des MAPK ERK-1/2 (cascade ERK) a été envisagé dans la régulation de la réponse biologique par ces différents récepteurs (expression génique, sécrétion hormonale). Les précédents travaux du groupe ont montré une activation des kinases ERK-1/2 par la voie de l AMPc induite par le récepteur VPAC2 (récepteur du VIP et du PACAP) et leur implication dans l expression du gène PRL dépendante de l AMPc dans la lignée somatolactotrope GH4C1. Dans un premier temps, nous avons étudié le mécanisme d activation de la cascade ERK par le VIP/PACAP, le TRH et l EGF dans les cellules GH4C1 : nous avons montré un recrutement différentiel des protéines G monomériques Ras et Rap1 par ces différents agonistes. Ras est préférentiellement activée par le TRH et l EGF et médie l activation de la cascade ERK par ces deux messagers extracellulaires ; en revanche, bien que Rap1 soit plus activée que Ras par la voie de l AMPc (induite par les neuropeptides VIP/PACAP), les deux GTPases participent conjointement à l activation de la cascade ERK par cette voie. Par ailleurs, étant donné que la cascade ERK est impliquée dans l activation du promoteur proximal du gène prolactine (PRL) par ces agonistes, nous avons montré le rôle différentiel de Ras et Rap1 dans la régulation de l activité transcriptionnelle de ce promoteur. De manière analogue aux effets observés sur la cascade ERK, Ras médie principalement l activation du promoteur par le TRH et l EGF ; en revanche, Ras et Rap1 ont des effets opposés sur la régulation du promoteur par la voie de l AMPc : le signal Rap1 est positif pour l activation du promoteur par l AMPc alors que le signal Ras est négatif. Ces travaux montrent donc que les protéines Ras et Rap1 jouent un rôle différentiel sur l activation de la cascade ERK et l induction d une réponse somatolactotrope en fonction du type de récepteur mis en jeu. La voie PI3K/Akt joue aussi un rôle important dans la régulation de la synthèse et de la sécrétion des hormones hypophysaires. Nous nous sommes donc intéressés aux interactions entre la voie PI3K/Akt et la cascade ERK dans les cellules GH4C1. Nous avons montré que l activation basale des kinases ERK-1/2 est bloquée par la voie PI3K/Akt. Cet effet se retrouve spécifiquement sur les maillons Raf-1 et Rap1. De même, la sécrétion constitutive de PRL par les cellules GH4C1 régulée par la cascade ERK est aussi bloquée par la voie PI3K/Akt. Paradoxalement, l activation du module Rap1/Raf-1/ERK et de la sécrétion de PRL par l IGF-1 nécessite une voie PI3K/Akt intacte. Ces résultats montrent que la voie PI3K/Akt exerce un double effet sur la cascade ERK et sur une fonction somatolactotrope spécifique régulée par la cascade ERK, la sécrétion de PRL : un rôle négatif dans les cellules non-stimulées et un rôle positif dans les cellules stimulées par l IGF-1. Enfin, des anomalies de transduction peuvent être à l origine de pathologies : en particulier, 40% des adénomes somatotropes expriment un mutant constitutivement actif de la protéine Gas, l oncogène gsp. Etant donné que la protéine sauvage Gas a été retrouvée surexprimée dans les adénomes n arborant pas l oncogène gsp, nous avons étudié les conséquences de l expression de l oncogène gsp et de la surexpression de la protéine Gas sauvage dans des modèles cellulaires GH4C1 inductibles. Nous avons montré que l induction de l expression de l oncogène gsp et de la surexpression de la protéine Gas provoque une augmentation de l activité Adénylate Cyclase et du taux intracellulaire d AMPc. De manière particulièrement intéressante, nous avons aussi observé une augmentation de l activation basale des MAPK ERK-1/2 et de l activité des promoteurs hormonaux (PRL et GH) soutenue tout au long de l induction. De plus, la cascade ERK est impliquée dans l activation chronique des promoteurs hormonaux, suggérant que les effets induits par les protéines transgéniques sur l activité transcriptionnelle des promoteurs est la conséquence du même effet sur la cascade ERK. L ensemble de nos travaux montre que la cascade ERK joue un rôle nodal dans la transmission de signaux extracellulaires physiologiques et est aussi impliquée dans signalisation anormale conduisant à la physiopathologie somatolactotrope. La cascade des MAPK ERK-1/2 constitue donc un point de convergence majeur des signaux visant à réguler la fonction somatolactotrope.AIX-MARSEILLE2-BU Méd/Odontol. (130552103) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Différenciation des cellules du lignage antéhypophysaire somatolactotrope (un r^ole pour les facteurs de transcription Pitx1 et Pitx2)

AIX-MARSEILLE2-BU Sci.Luminy (130552106) / SudocSudocFranceF

ACTIVATION DES CASCADES TYROSINE KINASES PAR LES RECEPTEURS HYPOPHYSAIRES A SEPT PASSAGES TRANSMEMBRANAIRES

ORSAY-PARIS 11-BU Sciences (914712101) / SudocSudocFranceF

Physiopathology of somatolactotroph cells: from transduction mechanisms to cotargeting therapy.

International audienceIn pituitary somatolactotroph cells, G protein-coupled receptors and receptor tyrosine kinases binding their specific ligands trigger an enzymatic cascade that converges to MAP kinase activation in the subcellular compartment. Different signaling pathways, such as AC/cAMP/PKA and PI3K/Akt pathways, interact with MAP kinase to regulate key physiological functions, such as hormonal secretion and cell proliferation. Abnormalities affecting these signaling pathways have been identified as preponderant factors of pituitary tumorigenesis. In addition to trans-sphenoidal surgery, somatostatin analogs are used to control hormonal hypersecretion in GH-secreting adenomas. However, a subset of these tumors remains uncontrolled with these treatFments, calling for new therapeutic approaches. In these cases, novel multivalent somatostatin analogs or new somatostatin-dopamine chimeric molecules could be of interest. Another attractive therapeutic approach may be to use one or several inhibitors acting downstream in the signaling pathway, such as mammalian target of rapamycin inhibitor. Cotargeting therapy and gene therapy are promising tools for these problematic pituitary tumors

A novel paraptosis pathway involving LEI/L-DNaseII for EGF-induced cell death in somato-lactotrope pituitary cells.

We have recently reported that EGF triggers an original form of cell death in pituitary cell line (GH4C1) with a phenotype sharing some characteristics of both apoptosis (internucleosomal DNA fragmentation) and paraptosis (caspase-independence and cytoplasmic vacuolization). However, the endonuclease involved in EGF-induced DNA fragmentation has not been assessed so far. In the present work we therefore further explored the putative paraptosis involvement in EGF-induced cell death and asked whether L-DNaseII might be involved. Indeed, this endonuclease is known to mediate internucleosomal DNA fragmentation in caspase independent manner. Our Western blot, immunocytochemistry and enzymatic measurement assays show that EGF triggers a cleavage of Leukocyte Elastase Inhibitor (LEI) precursor into L-DNaseII, its subsequent enzymatic activation and nuclear translocation thus pointing to the involvement of this endonuclease pathway in caspase-independent DNA fragmentation. In addition, EGF-induced cell death can be blocked by paraptosis inhibitor AIP-1/Alix, but not with its anti-apoptotic C-terminal fragment (Alix-CT). Altogether these data suggest that EGF-induced cell death defines a novel, L-DNaseII-mediated form of paraptosis

Case report of GNAS epigenetic defect revealed by a congenital hypothyroidism.

International audiencePseudohypoparathyroidism (PHP) is a group of disorders characterized by end-organ resistance to the parathyroid hormone (PTH). PHP type 1A includes multihormone resistance syndrome, Albright's hereditary osteodystrophy, and obesity and is caused by mutations in GNAS exon 1 through 13. PHP type 1B (PHP1B), caused by epigenetic changes in the GNAS locus, was initially described as an isolated resistance to PTH. Epigenetic changes in GNAS have also been reported in patients who display mild Albright's hereditary osteodystrophy or mild thyroid-stimulating hormone (TSH) resistance without mutation of GNAS. Here we report a case of PHP caused by epigenetic changes in GNAS in a patient with congenital hypothyroidism. The patient was referred for a positive newborn screening for hypothyroidism (TSH 50 mIU/L). She exhibited severe clinical features of congenital hypothyroidism. The thyroid was in place, and etiologic explorations were negative. TSH was normalized under L-thyroxin, and the symptoms disappeared, except for a macroglossia. In childhood, PHP was suspected in addition to elevated PTH, obesity, brachydactyly, and a rounded face. Sequencing, methylation analysis, and large deletion research were performed in GNAS. No genetic mutations were found. Methylation analysis revealed a broad epigenetic defect without deletion in GNAS consistent with sporadic PHP1B. The multilocus methylation analysis were negative. This finding expands the known onsets of PHP1B and emphasizes the need for a new PHP classification system. This case report has important consequences for the etiologic diagnosis of congenital hypothyroidism because it adds a new cause of the disease