维吾尔族肺腺癌患者的EGFR基因突变分析

背景与目的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是一种跨细胞膜糖蛋白,属于受体型酪氨酸激酶家族。以吉非替尼为代表的EGFR酪氨酸激酶抑制剂对于EGFR突变的肺癌患者显示出良好的治疗效果,然而EGFR的突变率在不同民族和不同种族的人群中表现出较大差异。本研究旨在分析维吾尔族中肺腺癌患者肿瘤组织的EGFR基因突变情况,同时比较维吾尔族与汉族肺腺癌患者肿瘤组织EGFR基因突变率的差异性。方法收集临床肺腺癌患者石蜡包埋组织标本138例,包括68例维吾尔族和70例汉族肺腺癌的样本,采用ARMS(amplification refractory mutation system,ARMS)PCR扩增方法检测EGFR基因外显子18、19、20及21的突变,χ2分析对比维吾尔族和汉族肺腺癌EGFR基因突变差异。结果 138例肺腺癌患者中有43例EGFR基因突变,总突变率为31.2%,其中维吾尔族突变11例,突变率为16.2%,汉族突变32例,突变率为45.7%,维吾尔族肺腺癌EGFR突变率与汉族肺腺癌EGFR突变率比较有明显差异(P<0.001),突变以外显子19-del和L858R为主要突变点。结论维吾尔族中肺腺癌EGFR基因突变率为16.2%,汉族中EGFR基因突变率为45.7%,维吾尔族肺腺癌EGFR突变率明显低于我国汉族EGFR基因突变

单管实时PCR快速检验ABO基因型

目的建立快捷特异的ABO基因分型检测方法。方法根据ABO基因结构特点,设计特异性引物和四色双链探针,采用单管实时PCR方法检测ABO基因,结果与传统免疫学方法相对比。结果该方法可检出常见的3个等位基因,区分常见的6种基因型,全部检测过程可在100min内完成。110例中国人的随机个体定型结果与传统免疫学方法一致。结论实时PCR法进行ABO基因分型,简便快捷,灵敏度高,可以有效地为侦查破案服务

Scanning of c-kit mutations in acute myeloid leukemia using probe melting curve method

目的用改良的杂交探针结合溶解曲线新方法检测急性髓性白血病C-kIT基因17号外显子上基因突变。方法利用PrIMEr PrEMIErV5.00、TM uTIlITyV1.3等软件设计引物探针,两个阶段探针分别针对d816、n820和n822等突变热点。取患者dnA样品5μl进行PCr扩增及熔解曲线分析,PCr扩增产物进行测序分析并与熔解曲线分析方法进行比较。结果阳性质粒灵敏度试验的结果显示,n820g的灵敏度为10%,其余突变灵敏度均能达到5%。12例Cbf-AMl标本中,5例检测为阳性,突变率为41.7%,测序结果与测序检测结果相符。结论新方法具有方便快速、灵敏度高、特异性好等特点,可用于Cbf-AMl患者的个体化诊断和治疗。Objective To detect c-kit gene mutations of acute myeloid leukemia in the hotspot exon 17 of the c-kit gene using a modified hybridization probe combining with melting curve.Methods Primer Premier v5.00 and Tm Utility v1.3 software were used to design the primers and probe,the probe contained two parts,the first segment of the probe could detect mutations around D816 and the second segment could detect mutations at N820 and N822.5 μl DNA samples from patients were used for PCR amplification and melting curve analysis.PCR products were sent to be sequenced,these results were compared with those of the mutation-positive plasmids.Results The detection sensitivity on positive control plasmids was 10% for N820G and 5% for the other mutations.c-kit mutations were identified in 5 of 12 patients with CBF-AML(41.7%),the result was confirmed by sequencing analysis.Conclusion The new method is simple,rapid,and specific with high sensitivity and could be used in individual diagnosis and treatment of CBF-AML patients

介质环境对辣根过氧化物酶催化荧光反应体系的影响

探讨了缓冲溶液、溶剂和表面活性剂对对羟基苯丙酸-过氧化氢-辣根过氧化物酶反应体系反应平衡及产物荧光性质的影响,表明二聚体荧光产物在溶液中存在酸碱平衡,用荧光滴定法求得其酸离解常数pK_a≈8.3.碱式产物的荧光强于酸式.碱性环境使酶活性降低,反应平衡时间延长.阳离子胶束溴化十六烷基三甲铵(CTMAB)和氯化十六烷基三甲铵(CTMAC)对该体系兼有催化和增敏作用,据此提出一种更为灵敏的测定辣根过氧化物酶的方法

介质环境对辣根过氧化物酶催化荧光反应体系影响

辣根过氧化酶(HRP)催化荧光反应由HRP,H_2O_2以及能被氧化生成荧光物质(或由荧光物质生成非荧光物质)的供氢体(HD)组成,该体系广泛用于环境中H_2O_2以及数目庞大的生化物质测定。对位取代酚类HD以其灵敏、稳定等优点,应用最广。但该类反应存在一个pH不匹配问题,即HRP的最适pH为中性,产物则在碱性介质中表现强烈荧光。为弄清介质环境对该反应体系的影响,探求解决pH不匹配问题及进一步提高分析灵敏度的途径,研究了缓冲溶液(包括类型、酸度、浓度),有机溶剂及多种

胶束增敏酶联免疫吸附法荧光测定人IgG及与均相法测定比较

在荧光免疫分析中,胶束的加入常引起荧光强度增大、光谱位移、荧光寿命和荧光偏振的变化,利用这些变化可以改进自由抗原(Ag)和抗体(Ab)结合抗原的识别,提高分析灵敏度,扩大荧光免疫分析的范围。我们曾详细研究了环境介质对酶联免疫吸附测定(ELISA)荧光指示反应体系的影响,观察到长链烷烃季铵盐胶束对反应兼有催化和增敏作用。本文报导了将胶束增敏作用引入ELISA荧光测定体系,探求解决该体系酶促反应与荧光检测独立进行问题及提高灵敏度的途径,并与作者新近报导的一种均相荧光酶免疫分析法进行了比较

胶束增敏的辣根过氧化物酶催化荧光反应测定葡萄糖的研究

以H_2O_2为底物,辣根过氧化物酶(HRP)可以催化众多供氢体的氧化,广泛应用于环境中H_2O_2及众多临床生化物质的测定。我们曾详细研究了环境介质对对位取代酚类供氢体的酶催化氧化生荧反应,观察到长链烷烃季铵盐胶束对反应具有催化和增敏作用(另文),本文报导胶束增敏体系用于葡萄糖(GS)的测定

暴露测年样品中26Al和10Be分离及其加速器质谱测定

在已有实验流程基础上,建立并优化了石英样品中Be和Al提取、纯化等实验流程,设计的流程条件实验包括实验试剂、器皿和离子交换柱选择、离子交换树脂分离Be和Al时酸浓度选择等。结果表明,选择钢铁研究总院研制的~9Be标准溶液作为~(10)Be样品制备的载体;使用一次性实验器皿;选用4 cm规格的离子交换柱;用0.05 mol/L草酸和0.75 mol/L盐酸混合溶液洗脱吸附于阴离子树脂上的Al,可有效提取、纯化样品中的Be和Al。加速器质谱(AMS)测量结果显示,13组化学空白的~(10)Be/~9Be和~(26)Al/~(27)Al比值平均值分别为7.48×10~(-15)和1.96×10~(-15),与国内已有宇宙成因核素实验室的结果(5×10~(-15)~8×10~(-15))具有可比性。电感耦合等离子体发射光谱(ICP-AES)的测量结果表明,Be、Al回收率分别达90%和60%。基于新建立的实验流程分析了祁连山北侧金佛寺的一个岩石样品,获得了~(10)Be和~(26)Al的暴露年代分别为(10.7±1.0)ka和(10.0±1.2)ka,与前人研究结果一致