Optimization of Gene Engineering Bacteria Fermentation Conditions for Expression of Nucleoside Phosphorylase

目的优化核苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)基因工程菌的发酵表达条件。方法通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度d值,考马斯亮蓝(brAdfOrd)法测定蛋白,SdS-PAgE电泳和凝胶成像扫描分析表达量,优化表达条件;通过正交试验优化50 l发酵罐发酵条件。结果摇瓶培养起始PH为7.0~7.2,于30℃培养4 H,加入终浓度为0.4 MMOl/l的异丙基硫代半乳糖苷(IPTg)诱导8 H后收获菌体,可得到较高的生物量和重组酶蛋白表达量。50 l发酵罐的最佳条件为起始PH为7.0~7.2,于32℃培养4 H,加入终浓度为0.4 MMOl/l的IPTg诱导9 H后收获菌体,每升发酵液可得2 g以上的酶蛋白。结论基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶产量较高,可工业化生产,为酶法合成核苷酸类似物的研究奠定了基础。Objective To optimize the fermentation conditions of gene engineering bacteria for expression of nucleoside phosphorylase( including PNPase and PyNPase).Methods By adopting the engineering bacteria shaking culture,the absorbance D value was determined,the protein was measured by the Bradford method,the expression quantity was detected by the SDS-PAGE electrophoresis and the gel-imaging scanning,so the expression conditions were optimized; the orthogonal experiment was adopted to optimize the fermentation condition of the 50 L fermentor.Results The initial pH was 7.0-7.2 in the shaking culture and the incubation was performed for 4 h under 30 ℃,then isopropyl thiogalactoside( IPTG) with a concentration of 0.4 mmol / L was added for 8 h induction and the bacteria were finally harvested,which could obtain higher biomass and recombinant enzyme protein expression quantity.The experimental results revealed that the optimal conditions of the 50 L fermentor were as follows: with the initial pH value of 7.0-7.2,the incubation lasted for 4 h under 32 ℃, the bacteria were harvested after adding 0.4 mmol / L IPTG for 9 h induction.Each liter of fermentation broth could obtain at least 2 g apoenzyme.Conclusion The expression of gene engineering bacteria can obtain the higher output of nucleoside phosphorylase,which can be used for the industrial production and establishes the basis of synthesizing the nucleotide analogues by the enzymatic method

表皮生长因子受体抑制剂对外源锌离子致大鼠急性呼吸道炎症的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂对外源锌离子致大鼠呼吸道急性炎症的影响。方法:将100μmol/L硫酸锌溶液经气管灌注大鼠肺部复制动物炎症模型,于灌注后4h、8h和24h处死大鼠,以PBS为对照,分别测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数、总蛋白、白细胞介素8(IL-8)以及乳酸脱氢酶(LDH)的含量,以选择炎症最明显的时间点。进一步用二甲基亚砜(DMSO)和EGFR抑制剂PD153035预灌注大鼠,观察其对硫酸锌溶液所致呼吸道炎症的影响。结果:不同灌注液作用后大鼠白细胞计数(F=12.149,P=0.002)和IL-8(F=48.680,P<0.001)等炎症反应指标不同,不同时间点白细胞计数(F=29.569,P<0.001)和IL-8(F=59.778,P<0.001)等炎症反应指标也不同,硫酸锌灌注后8h为炎症反应最强的时间。不同预灌注液作用后大鼠白细胞计数(F=37.872,P<0.001)和IL-8(F=24.347,P<0.001)等炎症反应指标不同,PD153035能抑制炎症反应的强度。结论:EGFR抑制剂能有效抑制外源锌离子所致大鼠呼吸道急性炎症

可视化电生理诊断与治疗技术早期干预前列腺剜除术后尿失禁

目的总结可视化电生理诊断与治疗技术在经尿道前列腺剜除术（TUERP）后早期干预对术后尿失禁的作用。方法选取2020年12月至2022年6月在东莞市人民医院普济院区接受TUERP的良性前列腺增生症（BPH）患者86例作为治疗组，术后第6天拔除尿管当天接受可视化电生理诊断及治疗；选取同期接受TUERP的BPH患者79例作为对照组，术后第6天拔除尿管不进行电生理技术干预。比较两组患者术后6天、1个月及3个月的尿失禁比率。结果两组术前基数资料组间比较差异无统计学意义，术后第6天拔除尿管出现尿失禁的比率分别为：治疗组13例（15.1%），对照组12例（15.2%），两组间差异无统计学意义（P&gt;0.05），两组总体术后尿失禁发生率15.2%（25/165）。随访至术后1月时，治疗组尿失禁患者为4例（4.65%），对照组尿失禁患者为13例（16.5%），两组间差异有统计学意义（P=0.019）。随访至术后3月时，治疗组无尿失禁患者，对照组仍有7例（8.86%）尿失禁患者，差异具有统计学意义（P=0.005）。结论可视化电生理诊断与治疗技术早期干预可以有效防治TUERP术后尿失禁的发生，具有良好的临床应用价值

中国1990和2000基准年湿地变化遥感

分别收集1990年前后和2000年前后的美国陆地卫星资料,完成了相应时期的中国全国湿地分布遥感制图.两期制图结果相比较显示,除水稻田人工湿地之外,中国的其他湿地总面积从1990基准年的355208km2下降到2000基准年的304849km2.10年间中国湿地丧失面积约为50360km2,丧失了14%.其中内陆湿地面积由318326km2减少到257922km2,减少19%;滨海湿地由14335km2减少到12015km2,减少16%;而除水稻田以外的人工湿地增加了55%,达到34911km2.湿地丧失的主要省区为黑龙江省、内蒙古自治区和吉林省.三省区天然湿地损失逾57000余平方公里.大部分丧失的天然湿地被转化为农牧用地.新增12000余平方公里的人工湿地,以渔业养殖和水库为主.在新疆、西藏和青海新增近13000余平方公里的湿地,可能由气候变暖造成冰川积雪融化所致.中国湿地减少主要是人为因素所致