反相高效液相色谱分离分析蛋白质研究

反相高效液相色谱已广泛应用于有机物分析,在无机物分析方面也有不少应用。在反相色谱中C_(18)柱应用最多。如能研究扩大C_(18)的应用范围,则一台HPlC仪配用一支C_(18)柱,便可分析各式各样样品中的各种成分,最大限度发挥仪器的使用效率。国家自然科学基金课

单克隆抗体与血卟啉衍生物交联物的制备及其对胃癌靶细胞的杀伤作用

以碳二亚胺(EDCI)为连接剂,将血卟啉衍生物(HPD)与抗胃癌单克隆抗体18M(McAb18M)共价交联。经ELISA法测定及溶血试验表明,该交联物保留了McAb的反应特性及HPD的光故活性。体外试验表明,交联物对靶细胞的光动力杀伤效率提高了11.2倍,对非靶细胞的杀伤作用微弱,表明HPD—McAb具有特异杀伤作用。对游离HPD及交联HPD的吸收光谱,荧光激发光谱及发射光谱的分析比较表明,二者均有一定的差异

人胃粘膜活检标本测氨法诊断幽门螺杆菌感染

目的；探讨人胃粘膜Hp感染的检测法。方法：以纳氏测氨法为基础建立了纳氏试剂快速显色检测人胃粘膜中幽门螺杆菌（Hp）感染的方法，临床检测485例因上消化道症状而行胃镜检查的患者。并以细菌培养、粘膜涂片镜检及血清抗Hp－IgGELISA检测结果为对照。结果：该法的敏感性、特异性、阳性及阴性预测值和诊断效率分别为970％，983％，99．4％，91．3％及95．3％。结论；该法检测Hp感染的原理及特点初步分析表明其与传统尿素酶试验有较大的差别，有一定的实用价值

Establishment of laboratory animal model of cagA(+) coccoid Helicobacter pylori

目的　建立Hp圆球体动物模型。 方法　通过去营养法来培养cagA(+)Hp圆球体 ,定期用MTT和SCC方法来检测细菌的代谢活性 ,用吉姆萨染色和电镜负染色来观察细菌在不同时期的形态和变化。在圆球体培养的第 7周 ,进行幽门螺杆菌及其圆球体经口感染裸鼠的实验。结果　通过细菌学、尿素酶实验、16SRNA、cagA(+)PCR检测和电镜负染色等方法确定从已喂服幽门螺杆菌及其圆球体的裸鼠胃里分离到的细菌克隆 ,经证实为cagA(+)Hp。 结论　首次在裸鼠上证实了Hp圆球体是Hp“粪—口”传播链上不可缺少的一环。Aim To establish animal model infected with coccoid Hp Methods cagA(+) coccoid Hp was cultured and formed through nutrition deprivation,its metabolism was studied regularly with the methods of SCC and MTT the forms of different time was observed by Giemsa staining and TEM Experiment of infecting nude mice was done with cagA(+) coccoid Hp cultured as mentioned above for 7 weeks and with nomal cagA(+)Hp Result Bacteria isolated from nude mice infected by Hp or its coccoid form were comfirmed to contain cagA(+)Hp with assays of PCR,TEM and Urease Conclusion The results indicate that the coccoid form is a necessary link of Hp's "stool-mouth" infection in nude mic

重组人瘦素的基因构建、表达及活性鉴定

根据NCBI中公布的人瘦素cDNA序列,设计并合成了6个89bp左右的DNA小片段,经重叠延伸PCR扩增获得464bp的rhLep的完整基因片段。构建pET22b(+)/rhLep表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%以上。表达产物用Ni2+亲和层析柱纯化,SDS-PAGE结果表明,含6×His标签的目的蛋白的相对分子量约16kD。MTT比色法实验显示,当低剂量(10~30ng/mL)时,rhLep具有促进内皮细胞生长的作用;在高剂量(50~225ng/mL)时,rhLep具有杀伤人内皮细胞的活性。其最大杀伤率达到98.8%。吖啶橙荧光染色观察到高剂量rhLep对人内皮细胞有明显的凋亡作用。以上工作为进一步了解瘦素的体内体外生物活性奠定了基础

功能聚间苯二胺膜用于免疫传感器分析

以电化学聚合法在石墨电极上获得聚间苯二胺膜（ＰＭＰＤ），并建立了快速、灵敏的膜质量检验方法：辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＰＭＰＤ膜－邻苯二胺（ＯＰＤ）反应法，对聚合、活化等条件作了研究；进一步制成了检测乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和检测鼠免疫蛋白（ＭＩｇＧ）的免疫电极，对血清样品作了检测．结果表明：２．５Ｖ电池电压下，于含０．１２ｍｏｌ／ＬＭＰＤ的１．２ｍｏｌ／ＬＨ２ＳＯ４中聚合２０ｍｉｎ，再以３０ｇ／Ｌ浓度的戊二醛活化４ｈ，所得ＨＲＰ标记电极及免疫电极重现性好；检测ＨＢ－ｓＡｇ和ＭＩｇＧ的线性范围分别为０．１～３．２ｍｇ／Ｌ及０．１～１０ｍｇ／

抗人DR4、DR5单克隆抗体诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨抗死亡受体DR4、DR5单克隆抗体(mAb)FMU1·4、FMU1·5对3株神经胶质瘤细胞株U343(敏感株)、U138(部分敏感株)、U373(耐受株)的杀伤作用及机制。方法:采用流式细胞术、RT-PCR、免疫细胞化学法、MTT比色法、电泳、DNA倍体分析和Westernblot等方法。结果:DR5在U343高表达;DR4在U373低表达,U343对FMU1·5敏感并呈剂量依赖性、对FMU1·4部分敏感;U138对FMU1·5部分敏感,对FMU1·4耐受;U373对两种抗体耐受。结论:FMU1·4、FMU1·5能不同程度地诱导三株细胞凋亡,其机制与DR4、DR5、细胞色素C和FLIP的表达有关

狂犬病抗体免疫金标检测试纸的研制

目的应用酶联免疫原理和胶体金层析技术,研制狂犬病抗体免疫金标检测试纸。方法采用特殊的生产工艺,在玻璃纤维膜包被胶体金标记狂犬病抗原,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被狂犬病抗原和兔抗狂犬病抗体,制成狂犬病抗体免疫金标检测试纸(人用)。结果当待检样品阳性时,在检测线处形成抗原抗体的免疫复合物而凝聚显色;当待检样品阴性时,检测线处不形成抗原抗体免疫复合物不显色。整个试验过程只需15 m in。试纸与ELISA试剂比较,两者都具有微量、特异、准确的优点,且金标试纸独具操作方便、快速和结果直观、容易判定的优点。结论应用胶体金免疫层析技术建立的"狂犬病抗体免疫金标检测试纸",可以准确地检测出被检样品是否带有狂犬病抗体,同时还可以通过检测线颜色的深浅判定抗体的含量高低

HBVDNA/补体双特异性免疫复合物的检测

以羊抗人C1Q和b因子Igg为捕捉抗体，分别用以捕捉通过经典和旁路途径激活补体的dAnE颗粒抗原抗体免疫复合物中的C1Q和b因子，再利用引物的特异性和PCr的强大扩增能力对捕捉物中的HbVdnA进行检测，成功地建立了检测HbVdnA/补体双特异性循环...国家自然科学基

纳氏测氨法半定量诊断HP感染的方法及其应用

对纳氏测氨法尿素酶试验（ＮＵＴ法）进行半定量标准化后，进一步建立了纳氏测氨半定量诊断人胃粘膜中幽门螺杆幽（ＨＰ）感染程度的方法，使ＮＵＴ法可同时用于定性及半定量诊断ＨＰ感染及感染程度．对经过半定量检测的３５０例患者作分析，显示轻、中、重度感染比率分别为５４．６％、３４．０％及１１．４％，另对其中１８２例慢性浅表性胃炎进行病变程度与ＨＰ感染程度的相关性分析，表明慢性浅表性胃炎的病变程度与ＨＰ的感染程度呈明确的正相关性（ｐ＜０．０５），提示胃部疾病的恶性演变尚与感染程度有关