Expression and Localization of hnRNP A2/B1 during Differentiation of Human Osteosarcoma MG-63 Cells Induced by HMBA

背景与目的:核基质蛋白的差异表达与细胞癌变和增殖分化调控关系密切。本研究观察了hnRNP A2/B1在诱导分化处理前后人成骨肉瘤MG-63细胞核基质中的存在和分布,及其与Actin、Prohibitin的共定位关系。方法:选择性抽提经环六亚甲基双乙酰胺(hexamethylene bisacetamide,HMBA)诱导处理前后的MG-63细胞核基质,并运用双向电泳、质谱分析、蛋白质印记杂交、免疫荧光、激光共聚焦等技术检测hnRNP A2/B1在核基质中的表达与定位变化,及其与相关蛋白的共定位关系。结果:双向电泳及蛋白质印迹杂交结果证实了hnRNP A2/B1存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在HMBA处理后细胞核基质中表达下调;免疫荧光显微镜观察显示hnRNP A2/B1定位在核基质上,经HMBA处理后hnRNP A2/B1表达减弱。激光共聚焦显微镜观察结果显示,hnRNP A2/B1与细胞核基质蛋白组分Actin、细胞增殖相关调控因子Prohibitin具有共定位关系,但在诱导处理后细胞内的共定位关系减弱。结论:hnRNP A2/B1在MG-63细胞诱导分化过程中的表达分布,及其与Actin、Prohibitin的共定位关系的改变对MG-63细胞分化具有重要影响,值得进一步探索和研究。BACKGROUND & OBJECTIVE: The differentially expressed nuclear matrix proteins have great effects on canceration and regulation of cell differentiation. This study was to explore the existence and distribution of ribonucleoprotein hnRNP A2/B1 in nuclear matrix and its co-localization with Actin and Prohibitin in human osteosarcoma MG-63 cells before and after hexamethylene bisacetamide (HMBA) treatment. METHODS: The nuclear matrix of MG-63 cells before and after treatment of HMBA were selectively extracted. The expression and localization of hnRNP A2/B1 in nuclear matrix were detected by 2-D PAGE, MALDI-TOF-MS, Western blot, and immunofluorescent staining. The co-localization of hnRNP A2/B1 with Actin and Prohibitin was observed under laser scanning confocal microscope (LSCM). RESULTS: hnRNP A2/B1 was detected in the component of nuclear matrix proteins of MG-63 cells by Western blot and immunogold staining and its expression was decreased after treatment of HMBA. hnRNP A2/B1 was located in the nuclear matrix, and its expression was weakened after HMBA treatment. hnRNP A2/B1 was co-localized with Actin or Prohibitin in MG-63 cells, while the co-localization relationship was weakened during differentiation of MG-63 cells. CONCLUSIONS: hnRNP A2/B1 is a kind of nuclear matrix protein, and localizes in the nuclear matrix. The distribution and expression of hnRNP A2/B1 and its co-localization with Actin and Prohibitin play important roles during the differentiation of MG-63 cells.国家自然科学基金项目(No.30470877)~

抗菌药物诱导大肠杆菌内毒素释放的研究

目的: 探讨不同类型的抗菌药物释放细菌内毒素潜能和速率的不同。方法: 选择 5 种不同类型抗菌药物单独或 联合作用于大肠杆菌,比较 4 h 期间游离内毒素, 同时作菌落计数和细菌形态学检查。结果: 亚胺培南-西司他丁杀菌作用和 释放内毒素最快,但释放内毒素量较少; 头孢他啶释放内毒素较快,量较多; 环丙沙星释放缓慢, 量中等; 阿米卡星释放缓慢, 量最小; 头孢曲松致细菌丝状体形成, 杀菌并释放内毒素最慢但量最大; 阿米卡星和头孢曲松联合用药有协同抗菌作用, 且明 显减少头孢曲松释放内毒素的量,与单独使用阿米卡星释放内毒素的量近似。结论: 不同类型抗菌药物诱导细菌内毒素释放 的量和速率不同

肺癌患者肺泡巨噬细胞表现 HLA-DR 的表达

【目的】了解肺癌患者肺泡巨噬细胞表面人白细胞抗原-DR(HLA-DR)的表达。【方法】经支气管肺泡灌洗获肺泡巨 噬细胞,贴壁分离及培养, 免疫组化方法检测 HLA-DR 表达的阳性细胞百分率。【结果】① 肺癌及良性肺病患者,其肺泡巨噬 细胞未经刺激,均已有部分表达 HLA-DR,但前者明显高于后者; ② 干扰素-α ( IFN-α )或脂多糖( LPS)刺激后,HLA-DR 的表达均 增加,且两者联合刺激优于单独刺激;③ 无论刺激与否, 肺癌组荷瘤侧肺与非荷瘤侧肺比较, 肺泡巨噬细胞表达 HLA-DR 的阳 性细胞率明显增高。【结论】肺癌患者,尤其是肿瘤局部, 肺泡巨噬细胞可能通过表达 HLA-DR 提高抗原递呈功能。IFN-α 、LPS 均能明显增强肺癌患者肺泡巨噬细胞的抗原提呈功能, 且两者有协同作用

内毒素在大肠杆菌和白色念珠菌混合感染小鼠中的作用

【目的】探讨内毒素对大肠杆菌和白色念珠菌混合感染病情的影响。【方法】建立小鼠大肠杆菌、白色念珠菌单 独及混合感染模型, 对比大肠杆菌内毒素代替大肠杆菌, 多粘菌素B 拮抗内毒素活性, 观察各组小鼠生存期、血浆内毒素水平 及肺组织中的菌落数。【结果】大肠杆菌或大肠杆菌内毒素和白色念珠菌同时感染组, 小鼠生存期明显短于各自单独感染组 (P <0.05);大肠杆菌和白色念珠菌同时感染组24 h 后, 血浆内毒素水平高于大肠杆菌单独感染组(P <0.01);大肠杆菌和 白色念珠菌同时感染组24 h 和48 h 后, 白色念珠菌和大肠杆菌菌落数高于各自单独感染组(P <0.05);内毒素和白色念珠 菌同时感染组24 h 和48 h 后, 白色念珠菌菌落数高于白色念珠菌单独感染组(P <0.05)。【结论】内毒素可造成大肠杆菌和 白色念珠菌混合感染加重, 缩短生存期

MRSA PBP2a表达的影响因素及 MecA 基因的检测价值

【目的】探讨温度、pH、盐浓度对甲氧西林耐药金葡菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA)青霉素结 合蛋白2a( penicillin-binding protein,PBP)表达的影响, 以及 PBP2a编码基因 MecA 的检测价值。【方法】采用聚合酶链式反应 ( PCR)检测 M RSA 特异性 MecA 基因和美国临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的琼脂板稀释法( 32℃,pH7. 2,40 g/L NaCl 苯唑西林 MIC≥4 mg/L)筛选 MRSA。检测 20株 MRSA 在不同温度、pH、盐浓度时对苯唑西林、头孢唑林和头孢他啶的体外 药物敏感性,测定 M IC 范围,MIC50和 MIC90 ; SDS-PAGE 分析 10 株 MRSA 膜青霉素结合蛋白( PBP2a)在不同培养条件时表达 数量的差异,并进行配对差值的 t 检验。【结果】180 株金葡菌检测出 MecA 基因阳性 MRSA 56 株 ,按琼脂板稀释法检出 52 株M RSA, 4株未被检出(苯唑西林 MIC 分别为: 2,2,1,0. 5 mg/L) ,37 ℃、pH 5. 2 和 9 g/L NaCl 分别与 32 ℃、pH 7. 2 和 40 g/ L NaCl条件下诱导 10 株 MRSA, 所表达的 PBP2a含量前后比较差值有显著性(P∶ 0. 02～ 0. 05, 0. 01～ 0. 005, 0. 02～ 0. 05)。 【结论】不同温度、pH、盐浓度通过诱导耐药蛋白 PBP2a的表达明显影响 MRSA 对苯唑西林、头孢唑林和头孢他啶耐药水平, 而 其 MecA 基因却不受培养条件的影响,可以快速检测 M RSA 感染

The physiological responses of Betula albosinensis seedling roots to soil waternitrogen coupling

采用两因素随机区组设计,设置了5个水分梯度,即40%(W_1) 、50%(W_2) 、60%(W_3) 、80%(W_4) 、100%(W_5)的土壤田间持水量(FC)和3个施氮梯度,即模拟氮沉降施加0(对照,N_0) 、20(N_1) 、40(N_2) gN m~(-2) a~(-1)的硝酸铵,研究了水-氮耦合效应对川西亚高山主要阔叶树种红桦(Betula albosinensis)幼苗根系生理活性的影响及根系在土壤水、氮胁迫下的生理调控机制。结果表明: 1)随土壤含水量降低,根系活力和根系呼吸速率显著降低,膜脂过氧化产物(丙二醛) 、渗透调节物质(脯氨酸、可溶性蛋白质和可溶性糖)含量及抗氧化物酶(超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶)活性显著升高。2)水-氮耦合效应对红桦幼苗根系生理特征影响显著:施氮(N_1和N_2)在土壤水分良好(W_4和W_5)时使根系活力和根系呼吸速率显著升高,而在土壤水分不足(W_1和W_2)时显著降低了根系活力和根系呼吸速率;且在水分不足时,施氮浓度越大根系活力、MDA含量、脯氨酸及可溶性蛋白质含量变化越显著;在W_3条件下,只有N1对根系生理功能促进作用显著。3)根系活力和根系呼吸速率与丙二醛含量呈显著负相关性。因此,一定范围内的氮沉降在土壤水分状况良好时对植物根系生理特征具有显著正效应,而在土壤水分不足时则使根系细胞膜系统受损,抑制根系生理活性,但根系可通过增加渗透调节物质含量和增强抗氧化物酶活性来抵御一定范围的环境胁迫

Difference in soil pH values between Picea asperata and Abies faxoniana stands in subalpine regions and a preliminary study on its mechanism

比较了川西亚高山针叶林主要树种粗枝云杉(Picea asperata)和岷江冷杉(Abies faxoniana)样地各土层(05 cm、510 cm、1020 cm)土壤pH值差异,并从两树种养分吸收和养分归还相关累积H~+输入方面探究其差异原因。研究结果表明:云杉样地各土层土壤pH值均显著高于冷杉样地(P<0.05);云杉样地地被物累积H~+输入显著低于冷杉样地(P<0.05);云杉样地凋落物中P、Mg、N、C平均浓度显著低于冷杉(P<0.05),而Ca、C/N、木质素/N、C/P显著高于冷杉样地(P<0.05),两树种凋落物中木质素、K平均浓度无显著差异。云杉和冷杉凋落物化学特性主成分分析PC_1、PC_2方差贡献率分别为73.7%和15.6%,累积方差贡献率为89.4%,其中PC_1主要综合Ca、C/P、C/N、木质素/N、P、N、Mg的信息;PC_2主要综合木质素、K、C的信息。各土层土壤pH值均与地被物累积H~+输入显著负相关,与PC_1样本分数显著正相关。研究结论:云杉和冷杉样地土壤pH值存在显著树种差异,且云杉使土壤pH值变大,冷杉使土壤pH值变小,这主要与地被物形成以及凋落物化学特性有关,即与凋落物的量和凋落物分解速率、凋落物养分归还率密切相关

Effects of water and nitrogen coupling on growth of Betual albo-sinensis seedlings and its physiological mechanism

全球大气氮沉降日益加剧的背景下,研究川西亚高山地区主要阔叶树种红桦(Betual albo-sinensis)幼苗在不同水、氮供应下的形态变化和生理机制,以了解该区主要植被的生长特性,并可为森林生态系统的恢复重建提供一定的科学依据.采用两因素随机区组试验设计,设置5个水分梯度,即40%(W_1)、50%(W_2)、60%(W_3)、80%(W_4)、100%(W_5)的土壤田间持水量(FC)和3个施氮梯度,即模拟氮沉降施加N 0(N_0)、20(N_1)、40(N_2) g m~(-2) a~(-1)的硝酸铵. 结果显示:土壤水分和氮素及二者交互作用对生长和生理特征均具有显著(P<0.001)影响.表现为:1)幼苗生长(株高和基径)、叶片碳同化特征(最大净光合速率、叶绿素含量和叶片氮含量)及根系生理特征[呼吸速率、NH_4~+和NO_3~- 净吸收速率及根系硝酸还原酶(NR)活性]均随土壤水分增加而增大,且在土壤水分为W_4和W_5时达到最大.根冠比的变化呈相反趋势.2)施氮在土壤水分不足(W_1和W_2)时除对基径、NO_3~-净吸收速率和NR活性无影响外,显著抑制了红桦株高及叶片和根系生理特征.而在水分充足(W_4和W_5)时,除N_2在土壤水分W_4时对叶片生理特征和根系呼吸速率无影响外,对红桦的生长和根系生理特征有显著的促进作用,且N_1效果更显著.在W_3时两种施氮浓度效果不同:N_1对红桦的生长和相关生理特性具有促进作用而N_2呈抑制作用(除对根系NH_4~+和NO_3~-净吸收速率及NR活性无影响外).根冠比变化呈相反趋势.3)根系离子(NH_4~+和NO_3~-)净吸收速率与根系呼吸速率和叶片氮含量呈极显著正相关.本研究表明,土壤水分和氮素供应对植物的影响存在显著的耦合效应,当土壤水分不足时施氮不利于红桦幼苗生长,而适量的施氮在水分充足时有利于生长.对于供试土壤以及本试验设置的水、氮梯度而言,土壤含水量为80%田间持水量,施加N20 g m~(-2) a~(-1)更适宜红桦幼苗生长

红霉素对绿脓杆菌生物膜形成的抑制作用

摘　要　采用高效液相色谱分析的方法, 测定不同浓度红霉素在琼脂培养基上生长的绿脓杆菌产生的藻 酸盐。结果显示:红霉素对绿脓杆菌产生藻酸盐物质有抑制作用, 红霉素的浓度在1 mg/ L、4 mg/ L、16 mg/ L 和64 mg/ L 时, 抑制率分别为23 .7 %、65 .2 %、92 .0 %和92 .5 %。电子扫描显微镜观察, 红霉素浓度为50 mg/ L 时, 放在其溶液中的医用塑料纤维片上, 未见绿脓杆菌生物膜的形成。红霉素是通过抑制绿脓杆菌产生藻酸 盐进而抑制其生物膜的形成