Identification of hepatitis C or/and G virus RNA in one tube by reverse transcription nested polymerase chain reaction

目的庚型肝炎病毒（HgV）与丙型肝炎病毒（HCV）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高，本研究旨在建立一种同时检测HgV与HCV感染的方法。方法根据HCV与HgV的基因序列分别选取5’-uTr（HCV）与nS3（HgV）的两套引物，在同一管内进行逆转录-巢式聚合酶链反应，并初步应用于153例标本。结果该方法能同时检出HgV与HCV感染，扩增片段大小与设计相符。结论该方法简便特异，适用于临床检测Hepatitis C and G viruses belong to the flaviviridae family.They have similar modes of transmission.The dual infection of HGV and HCV were reported.A simultaneous detection for HCV or/and HGV was established by reverse transcription nested polymerase chain reaction(RT-nested PCR).The primers were derived from the 5'non-coding region of HCV and NS3 region of HGV ,and the length of the PCR product was between 170bp and 300bp.RT-nested PCR can be finished in one test tube and HGV and /or HCV can be detected simultaneously in one RT-nest PCR.153 samples were detected by his method.Our results showed that the established assay is useful for screening and identification of HCV or/and HGV RNA.This method is simple and specific practicable.国家九五课

Basic Examination for Introduction of Collagen gel Droplet embedded culture Drug Sensitivity Test（CD-DST Method）

癌の化学療法は新薬の開発により選択肢が増えてきているものの，その効果は実際に治療を行ってみないと分からないことが多い。抗癌剤感受性試験は体外で患者癌細胞と抗癌剤を接触させ，癌細胞に対してどれくらい効果があるかを客観的に判定する検査法である。抗癌剤感受性試験の導入は治療成績の向上および患者の身体的負担の軽減につながり，今後需要の増大が予想される。当院では2006年3月よりCD-DST 法（Collagen gel Droplet embedded culture Drug Sensitivity Test）による抗癌剤感受性試験を試験的に導入してから3年目になる。当院における抗癌剤感受性試験の現況について報告する

杆状病毒表达EV71病毒样颗粒的装配、制备纯化与鉴定

将EV71P1和3CD基因片段克隆入同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bac-mid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD)。用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定和分析。电镜结果显示P1经3CD切割装配成了大小约为27nm的类球形颗粒(即EV71VLPs)。进一步分析影响杆状病毒表达系统的因素以对表达条件进行优化,结果显示MOI值和时间均可影响目的蛋白的表达,其中时间是主要因素。选择优化后条件利用无血清培养基对贴壁Sf9细胞在多层细胞培养器中进行VLPs的大量表达,密度梯度离心法纯化,SDS-PAGE结果可见三条大小约为39kD、34kD和26kD的VP1、VP0和VP3特异性条带。纯化后EV71VLPs颗粒结构完好,为下一步EV71蛋白结构的基础研究和基因工程疫苗的研究奠定了基础