Особенности содержания матриксных металлопротеиназ 2, 3, 9 и тканевых ингибиторов матриксных металлопротеиназ 1, 2, 3, 4 во внутриглазной жидкости пациентов с первичной открытоугольной глаукомой

Aim. To study the content of matrix metalloproteinase (MMP)-2, -3, -9 and tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) -1, -2, -3, -4 in the aqueous humor of patients with moderate primary open-angle glaucoma (POAG).Materials and methods. The experimental group included 47 patients with verified moderate primary open-angle glaucoma. The control group consisted of 26 patients with uncomplicated cataract. The levels of MMP-2, -3, -9 were determined with Luminex Performance Human MMP Magnetic Panel 3-plex kit (R&D Systems, USA), the concentration of TIMPs-1, -2, -3, - 4 was determined with the Human TIMP Magnetic Luminex Performance Assay 4-plex kit (R&D Systems, USA). The study was carried out using flow-through field fluorometry on a Bio-Plex 200 double-beam laser analyzer (Bio-Rad, USA).Results. The study showed a statistically significant increase in the levels of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitors of matrix metalloproteinases-1, -2, -3, -4 in the aqueous humor of patients with moderate POAG compared with patients with uncomplicated cataract.Conclusion. The obtained data on high concentrations and imbalance in the levels of matrix metalloproteinases and their tissue inhibitors in the aqueous humor of patients with moderate POAG confirm the role of local inflammation, as well as impairments in the structure of the extracellular matrix and its remodeling in the mechanisms of development of this pathology. Цель – изучить содержание матриксных металлопротеиназ (МMP) 2, 3, 9 и тканевых ингибиторов матриксных металлопротеиназ (TIMP) 1, 2, 3, 4 во внутриглазной жидкости пациентов с развитой стадией первичной открытоугольной глаукомы.Материалы и методы. Обследованы 47 пациентов с верифицированным, на основании офтальмологического обследования, диагнозом развитой стадии первичной открытоугольной глаукомы, которые составили основную группу. Контрольную группу составили 26 пациентов с диагнозом «неосложненная катаракта». Концентрацию MMP-2, MMP-3, MMP-9 определяли с использованием набора Luminex Performance Human MMP Magnetic Panel (3-Plex) (R&D Systems, США), определение концентрации TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3, TIMP-4 проводили с помощью набора Human TIMP Magnetic Luminex Performance Assay 4-plex (R&D Systems, США). Исследование проводилось методом проточной флуориметрии на двухлучевом лазерном анализаторе Bio-Plex 200 (Bio-Rad, США).Результаты. Установлена статистически значимо высокая концентрация матриксной металлопротеиназы-2 и тканевых ингибиторов матриксных металлопротеиназ 1, 2, 3, 4 во внутриглазной жидкости пациентов с развитой стадией первичной открытоугольной глаукомы относительно данных, полученных при исследовании внутриглазной жидкости лиц с неосложненной катарактой.Заключение. Полученные в исследовании данные о высоких концентрациях и нарушении баланса содержания матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в внутриглазной жидкости пациентов с развитой стадией первичной открытоугольной глаукомы подтверждают роль местного воспалительного процесса, а также нарушений структуры внеклеточного матрикса и его ремоделирования в механизмах развития патологического процесса.

Анализ ассоциаций полиморфизма гена VEGF-A в позициях -2578A/C и +936C/T с разным рецепторным статусом у больных раком молочной железы

The study of functional polymorphism of the VEGF-A gene at positions –2578 in the promoter region and +936 in the 3`untranslated region in breast cancer patients with different receptor status of the tumor was undertaken to identify markers associated with risk of breast cancer. DNA samples from 292 women with breast cancer were analyzed. The genotyping of С–2578A and C+936T VEG-FA polymorphisms was performed using the method of restriction analysis of amplification products. The distributions of VEGF-A genotypes in patients having estrogen and progesterone receptors in tumor tissues were investigated and genotypes associated with risk of breast cancer recurrences were detected.Проведено исследование функционального полиморфизма гена VEGF-A в позициях -2578 промоторного региона и +936 3`нетранслируемого региона у пациенток с раком молочной железы (РМЖ) с разным рецепторным статусом опухоли c целью выявления информативных маркеров, ассоциированных с риском развития заболевания. В анализ включены образцы ДНК 292 женщин с РМЖ. Генотипирование полиморфизмов С–2578A и C+936T VEG-FA осуществляли методом рестриктазного анализа продуктов амплификации (ПДРФ-анализ). Выявлены особенности распределения генотипов VEGF-A у пациенток с наличием эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в опухолевых тканях и генотипы, ассоциированные с риском развития рецидивов РМЖ

Содержание цитокинов и факторов роста во внутриглазной жидкости у пациентов с первичной открытоугольной глаукомой

Purpose. To study the content of cytokines and growth factors in the intraocular fluid of patients with developed stage of primary open-angle glaucoma (POAG).Materials and methods. 56 patients with a verified diagnosis developed stage of primary open-angle glaucomawere examined. The control group consisted of 30 patients with a diagnosis of uncomplicated cataract. A concentration of 17 cytokinesand 3 isoforms of the transforming growth factor (TGF) β was determined using a Bio-Plex Pro™ Human Cytokine 17-plex Assay and Bio-Plex Pro™ and TGFβ 3-plex Assay kit by flow-through fluorometry on a Bio-Plex 200, Bio-Rad double beam laser analyzer, USA.Results. Astatistically significant increase was shown in the concentrations of cytokines and growth factors (interleukins (IL) 4, 6, 7, 8, 12, 17, TGFβ 1, 2, 3, macrophage inflammatory protein 1 β) in the intraocular fluid of patients with developed stage of the primary open-angle glaucoma in respect to data obtained from the study of the intraocular fluid of the persons with uncomplicated cataract, as well as a statistically significant decrease in the concentrations IL-2, IL-10, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor.Conclusion. In the pathogenesis of primary open-angle glaucoma, the activity of the local chronic inflammatory process is determined. This is confirmed by statistically significant changes in the studied cytokines and growth factors. Increase in the concentrations of the studied representatives of the superfamily of transforming growth factors-beta, which have anti-inflammatory activity, the ability to stimulate proliferation, cell growth, synthesis of extracellular matrix proteins, etc., attests to their importance in the mechanisms of primary open-angle glaucoma development. Increase concentrations of IL-7 in the intraocular fluid of patients with primary open-angle glaucoma allows us to assume participation in the pathogenesis of the primary open-angle glaucoma of this autocrine mediator of activation of the growth of lymphatic structures.Цель. Изучить содержание цитокинов и факторов роста во внутриглазной жидкости пациентов с развитой стадией первичной открытоугольной глаукомы.Материалы и методы. Были обследованы 56 пациентов с верифицированным на основании офтальмологического обследования диагнозом развитой стадии первичной открытоугольной глаукомы, которые составили основную группу. Контрольную группу составили 30 пациентов с диагнозом «неосложненная катаракта». Концентрацию 17 цитокинов во внутриглазной жидкости и трех изоформ трансформирующего фактора роста (ТФР) β определяли с использованием набора Bio-Plex Pro™ Human Cytokine 17-plex Assay и Bio-Plex Pro™ TGFβ 3-plex Assay (Bio-Rad, США) методом проточной флуориметрии на двухлучевом лазерном анализаторе Bio-Plex 200 (Bio-Rad, США).Результаты. Установлено наличие статистически значимо более высоких концентраций цитокинов и факторов роста во внутриглазной жидкости пациентов с развитой стадией первичной открытоугольной глаукомы относительно данных, полученных при исследовании внутриглазной жидкости лиц с неосложненной катарактой (интерлейкины (ИЛ) 4, 6, 7, 8, 12, 17, ТФРβ 1, 2, 3, макрофагальный воспалительный протеин (МВП) 1β), а также статистически значимо более низкие концентрации ИЛ-2, ИЛ-10, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора.Заключение. В патогенезе первичной открытоугольной глаукомы определяется активность местного хронического воспалительного процесса. Это подтверждается статистически значимыми изменениями изучаемых цитокинов и факторов роста. Установленное нарастание концентраций представителей суперсемейства трансформирующих факторов роста β, обладающих противовоспалительной активностью, способностью стимулировать процессы пролиферации, клеточного роста, синтез белков внеклеточного матрикса и др., свидетельствует об их значимости в механизмах развития первичной открытоугольной глаукомы. Выявленное повышение во внутриглазной жидкости у пациентов с первичной открытоугольной глаукомой концентраций ИЛ-7, позволяет предположить участие в патогенезе первичной открытоугольной глаукомы этого аутокринного медиатора активации роста лимфатических структур

ЭФФЕКТ НИТРОГЛИЦЕРИНА НА ПРОЛИФЕРАТИВНЫЙ И МИГРАЦИОННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ

Aim. To study the effects of nitroglycerin on proliferative and migratory activity of mononuclear cells and endothelial progenitor cells in patients with chronic heart failure.Materials and methods. Proliferative potential of peripheral blood mononuclear cells in donors and patients were studied in MTT-test in the presence of 50 and 100 mg/ml nitroglycerin. Proliferation and migration of endothelial progenitor cells in patients were evaluated by changes in the cell impedance in real-time in the presence of various doses of nitroglycerin.Results. It is shown that nitroglycerin reduces in vitro both spontaneous and Concanavalin A stimulated proliferative activity of mononuclear cells in patients with chronic heart failure. Peripheral blood mononuclear cells in patients with chronic heart failure, obtained after procedure of mobilization by granulocyte colony-stimulating factor respond to nitroglycerin dose of 50 mg/ml with the increased proliferative activity, and with the suppressed proliferative activity to nitroglycerin dose of 100 mg/ml. Mononuclear cells of healthy donors respond to 50 mg/ml of nitroglycerin with the activation of proliferative capacity, but at a dose of 100 mg/ml spontaneous proliferative activity of mononuclear cells inhibit. It is also shown that the presence of nitroglycerin in medium dose in stimulating test leads to the inhibition of mononuclear cells proliferation from healthy donors. It is shown the stimulating effect of nitroglycerin on proliferative and migration potential of endothelial progenitor cells.Conclusion. Multidirectional and dose-dependent effects of nitroglycerin to the various types of human cells in vitro were observed.Цель. Изучить эффекты влияния нитроглицерина на пролиферативную и миграционную активность мононуклеарных клеток и эндотелиальных прогениторных клеток у пациентов с хронической сердечнойнедостаточностью.Материалы и методы. Пролиферативный потенциал мононуклеарных клеток периферической крови у доноров и пациентов изучали в МТТ-тесте в присутствии 50 и 100 мкг/мл нитроглицерина, пролиферацию и миграцию эндотелиальных прогениторных клеток пациентов оценивали по изменению клеточного импеданса в режиме реального времени в присутствии различных доз нитроглицерина.Результаты. Показано, что нитроглицерин снижает пролиферативную активность in vitro мононуклеарных клеток пациентов с хронической сердечной недостаточностью, как спонтанную, так и стимулированную Конканавалин А. Мононуклеарные клетки периферической крови пациентов с хронической сердечной недостаточностью, полученные после процедуры мобилизации гранулоцитарным колониестимулирующим фактором, отвечают увеличением пролиферативной активности на нитроглицерин в дозе 50 мкг/мл, а при дозе 100 мкг/мл – подавлением пролиферативной активности. Мононуклеары условно здоровых доноров в ответ на стимуляцию нитроглицерином отвечают активацией пролиферативного потенциала. Показан стимулирующий эффект нитроглицерина на пролиферативный и миграционный потенциал эндотелиальных прогениторных клеток.Заключение. Установлен разнонаправленный и дозозависимый эффект нитроглицерина на различные типы клеток человека in vitro

Опухоль-ассоциированные мезенхимные стволовые клетки при химически-индуцированном раке молочной железы у крыс Wistar

Objective: to compare the morphological and functional properties of mesenchymal stem cells from mammary tissues and chemically-induced mammary tumor tissues. material and methods. The study included 25 female Wistar rats. In 20 rats, mammary carcinoma was induced by intramammary injection of N-methyl-N-nitrosourea after estrus synchronization with chorionic gonadotropin. The control group consisted of 5 rats. Mammary carcinoma was verified histologically and immunohistochemically. To examine, whether the cells isolated from normal tissue and tumor tissue belonged to mesenchymal stem cells, FACS Canto II flow cytofluorometer was used. The functional properties of mesenchymal stem cells were evaluated in MTT assay by the level of nitric oxide production in normal and by hydrogen peroxide-induced hypoxia. The levels of prolactin, luteinizing hormone and estradiol E2 in urine were studied using solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay. results. Chemically-induced mammary tumor according to histological and immunohistochemical studies corresponded to luminal B type breast cancer in humans. In rats that developed mammary tumors, the urine prolactin levels after synchronization of estrus were increased. In rats that did not develop tumors, the levels of prolactin and luteinizing hormone were decreased, but the levels of estradiol E2 were increased. More mesenchymal stem cells with CD45-/CD90+phenotype were obtained from the breast tumor tissue. Mesenchymal stem cells from tumor tissue showed increased proliferative potential and were more resistant to hypoxia. conclusion. Tumor- associated mesenchymal stem cells having high proliferative potential and resistance to hypoxia were obtained from chemically-induced mammary tumor tissue. Morphologic and functional differences in mesenchymal stem cells obtained from mammary breast tissue and tumor tissue require further studies.Цель исследования – сравнить морфофункциональные свойства мезенхимных стволовых клеток из тканей молочной железы и ткани химически-индуцированной опухоли молочной железы. материал и методы. У 20 крыс-самок Wistar после синхронизации эструса хорионическим гонадотропином, интрамаммарным введением N-метил-N-нитрозомочевины индуцирована аденокарцинома молочной железы, контрольную группу составили 5 крыс. Верификацию опухоли проводили гистологически и иммуногистохимически. Принадлежность выделенных клеток из ткани молочной железы и опухоли молочной железы к мезенхимным стволовым клеткам верифицировали на основании морфологии и фенотипирования на проточном цитофлуориметре FACS Canto II. Функциональные свойства мезенхимных стволовых клеток оценивали в МТТ-тесте и по уровню продукции оксида азота в норме и при индукции перекисью водорода окислительного стресса. Уровни пролактина, лютеинизирующего гормона и эстрадиола Е2 в моче исследовали твердофазным иммуноферментным анализом. Результаты. Химически индуцированная опухоль молочной железы по данным гистологического и иммуногистохимического исследования соответствовала люминальному В1 типу рака молочной железы у человека. Уровни пролактина в моче после синхронизации эструса у животных с развившейся опухолью были повышены, а у животных с неразвившейся опухолью молочной железы снижены уровни пролактина и лютеинизирующего гормона, но повышены уровни эстрадиола Е2. Из ткани опухоли молочной железы получено большее количество мезенхимных стволовых клеток с фенотипом CD45-/CD90+. Мезенхимные стволовые клетки из ткани опухоли проявляли повышенный пролиферативный потенциал и были более устойчивы к окислительному стрессу. заключение. Из ткани химически индуцированной опухоли молочной железы получены опухоль-ассоциированные мезенхимные стволовые клетки, которые имеют высокий пролиферативный потенциал и устойчивы к окислительному стрессу. Выявленные морфофункциональные различия мезенхимных стволовых клеток из тканей молочных желез и ткани опухоли молочной железы требуют дальнейшего исследования

УРОВНИ ГОРМОНОВ, микроРНК И ЦИТОКИНОВ В ЛИМФЕ В НОРМЕ И ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

The involvement of hormones, microRNAs and cytokines in breast cancer pathogenesis has been well established. Lymph picks up secretory products of breast cancer cells. The purpose of the study was to evaluate the levels of hormones, microRNAs and cytokines in lymph. Wistar rats were injected with N-methyl-N-nitrosourea to induce breast cancer. The rats were subjected to either surgery alone or chemotherapy alone (cyclophosphamide, methotrexate and 5-fluorouracil). In some animals, surgery was followed by chemotherapy. The levels of follicle-stimulating hormone (FSH), prolactin, luteinizing hormone (LH), estradiol (E2) and thyroglobulin (TG), microRNA-21, microRNA-221, microRNA-222, microRNA-429 and 24 cytokines were determined. Chemotherapy was shown to result in the reduction in the levels of prolactin, thyroglobulin, FSH and estradiol. In rats with breast cancer, the expression levels of microRNA-21, microRNA-221 and microRNA-222 were increased, and the expression levels of microRNA-429 were decreased. In breast cancer rats, the levels of most cytokines were found to be increased. Correlations between the levels of cytokines, hormones, and microRNAs in lymph were identified. Differences in the expression levels of cytokines, hormones, and microRNAs in lymph with respect to treatment option were detected.Цель исследования – оценка уровней гормонов, микроРНК и цитокинов в лимфе.Материал и методы. Экспериментальный рак молочной железы индуцировали введением N-метил-N-нитрозомочевины у крыс Wistar. Часть животных подвергалась только оперативному вмешательству или только химиотерапии (циклофосфан, метотрексат, 5-фторурацил). У части животных сочетали оперативное вмешательство с последующим курсом ХТ. В лимфе исследовали содержание фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), пролактина, лютеинизирующего гормона (ЛГ), эстрадиола (Е2) и тириоглобулина (ТГ), микроРНК-21, микроРНК-221, микроРНК-222, микроРНК-429 и 24 цитокинов.Результаты. Показано, что на фоне ХТ снижаются уровни пролактина, тиреоглобулина, ФСГ и эстрадиола. В группе животных с РМЖ увеличены уровни экспрессии микроРНК-21, микроРНК-221, микроРНК-222 и снижены уровни экспрессии микроРНК-429. При РМЖ в лимфе увеличены уровни большинства цитокинов. Между уровнями в лимфе цитокинов, гормонов и микроРНК определены взаимосвязи. В лимфе выявляются различные уровни цитокинов, гормонов и микроРНК с учетом вида проведенного лечения

Гладкость старших производных потенциала простого слоя для параболических и эллиптических уравнений второго порядка

Исследование вопроса о принадлежности потенциала анизотропному пространству Гельдера С² ª(Ω) при условии, что "боковая" граница области принадлежит лишь классу С¹