Morphological and molecular studies on microfungi isolated from indoor air of refrigerators used at homes

Yüksek Lisans TeziBu çalışmada, 4 farklı evde kullanılan buzdolaplarının iç ortam havasında bulunan mikrofungusların morfolojik ve moleküler tanısı yapılarak, buzdolabı havası florasındaki mikrofungal çeşitliliğin tesbiti amaçlanmıştır. Araştırma materyali Ekim, Kasım ve Aralık 2012 aylarının ilk ve son haftasında her bir istasyondan (her ay ikişer kez olmak üzere) toplam 24 kez örnekleme yapılarak elde edilmiştir. Örnek alımında mikrobiyal hava örnekleme cihazı (Millipore) kullanarak, bir örneklemede 100 L hava aspire edilmiştir. Örnekleme işleminde Dichloran Glycerol Agar (DG 18) besiyerleri kullanılmıştır. İzolatlar saf kültür olarak elde edilip yatık PDA besiyerine pasaj alınarak 25 °C'de 7 gün inkübe edilmiş ve daha sonra stok kültür olarak +4 °C'de saklanmıştır. Elde edilen izolatlar özelliklerine göre PDA, MEA, CYA, CY20S G25N, CZ, CREA, YES ve DG 18 besiyerlerine ekilmiş olup, ilgili monograflardan yararlanılarak morfolojik teşhisleri yapılmıştır. Moleküler teşhiste ise elde edilen fungal amplikonların dizi analizleri Sanger Yöntemi ile, ABI prism Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit kullanılarak, ABI Prism 377 DNA Sequencer?da (Applied Biosystems, ABD) belirlenmiştir ve gen bankasındaki benzer sekanslarla BLAST Analizi yapılarak kıyaslanmıştır. Araştırmanın sonucunda teşhisi yapılan mantarların yüzdelik dağılımları % 34 Penicillium, % 24 Cladosporium, % 17 Alternaria, % 11 Aspergillus türleri ve % 9 diğer türler olarak tespit edilmiştir.Anahtar Kelimeler : Havayla taşınan funguslar, ITS gen dizisi, Buzdolabı, Q-PCR, Sanger DizilemeAbstractIn this study, it was aimed to determination of microbial diversity from indoor air flora of refrigerators used at four different homes with conventional and molecular identifications. Research materials were obtained by taking samples twice each months from all refrigerators (totally twenty four times) at first and last weeks of October, November and December months of 2012. Microbial air sampler (Millipore) were used to take samples and 100 L air was aspirated for each sampling. Dichloran Glycerol Agar (DG 18) medium was used on the sampling process. All isolates taken like a pure culture and to incubated at 25 °C during 7 days after to passaged on slant PDA medium. After that, these pure cultures at PDA medium were stored at +4 °C as storage cultures. Conventional identifications of obtained isolates were diagnosed according to their features by using related monographs after to cultured on PDA, MEA, CYA, CY20S, G25N, CZ, CREA, YES and DG 18 mediums. On the molecular identification, sequence analysis of obtained fungal amplicons were determined on Sanger Method at ABI Prism 377 DNA Sequencer (Applied Biosystems, ABD) by using ABI prism Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit and to compared with similar sequences on gene bank by BLAST Analysing. As a result of this study, it was identified what 34 % Penicillium, 24 % Cladosporium, 17 % Alternaria, 11 % Aspergillus species and 9 % other species as a percentage distribution of obtained fungi izolates.Keywords : airborne fungi, ITS region, refrigerator, Q-PCR, Sanger Sequencing Metho