Structure And Multimerization Effects Of Inorganic Binding Peptides: Phage Display Selected Pt Binders As A Case Study

Tez (Yüksek Lisans) -- İstanbul Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, 2006Thesis (M.Sc.) -- İstanbul Technical University, Institute of Science and Technology, 2006Bir çok organizma protein inorganik etkileşimlerinden meydana gelen organik-inorganik melez sistemler içerir. Bu melez sistemlerin koruyucu tabakalar ve destekleyici dokular oluşturmak, yük ve iyon transferi yapmak, bazı optik ve mekanik özellikler geliştirmek gibi mükemmel özellikleri vardır. Bu üstün özellikler, herhangi bir inorganik malzeme ve spesifik polipeptitler kullanılarak biyoteknoloji ve nano-biyoteknolojide kullanılmaya çalışılmaktadır. Fonksiyonel inorganik melez malzeme ve sistemlerin oluşum ve düzenlenmelerini kontrol etmek için inorganiklere bağlanan polipeptitler biyolinker ve moleküler yapı taşları olarak kullanılırlar. Belirli bir inorganiğe özgün olarak bağlanan polipeptitler, faj gösterim kütüphaneleri gibi kombinatoriyel moleküler kütüphaneler kullanılarak seçilebilirler. Seçilen, inorganiklere bağlanabilen, peptitler tanıma mekanizmalarının ve optimum yapılarının araştırılması amacıyla tekrar dizayn edilebilirler. Protein mühendisliği proteinlerin yapı ve fonksiyonlarının değiştirilmesi amacıyla genetik ve kimyasal yöntemlerden yararlanmak olarak tanımlanabilir. Protein mühendisliğinin işlevi proteinlerin kataliz, moleküler tanıma, katlanma ve stabiliteleri ile ilgilenmektir. Bu çalışmada, Platinyuma bağlanan peptitlerden biri yapısal ve çoklu tekrarların peptit üzerindeki etkisini araştırmak için değiştirilmiştir. Protein mühendisliği yöntemleri, bağlanan dizinin çoklu tekrarlarını oluşturarak inorganik yüzeyin yapısal özellikleri ile birleştirmek için kullanılmıştır. Peptit konformasyonunun bağlanmaya etkisinin araştırılması için peptitin çoklu tekrarları hem lineer hem de sınırlandırılmış formda inşa edilmiştir. Çoklu tekrarlar yapan peptitlerin bağlanma eğilimleri ve spesifisiteleri lineer ve sınırlandırılmış orijinal peptitle, immuno-florasan işaretleme ve ELİZA analizleri kullanılarak karşılaştırılmıştır.Many organisms contain organic-inorganic hybrid systems consist of protein inorganic interactions. These hybrid systems have excellent functions such as forming protective layers, supportive tissues, transferring charge and ion, developing some optical and mechanical properties. These excellent functions by using any inorganic material and specific polypeptides are tried to be used in biotechnology and nano-biotechnology. In order to control the formation and assembly of functional inorganic hybrid materials and systems, inorganic-binding polypeptides are used as biolinkers and molecular building blocks. Polypeptides that selectively bind to a given inorganic can be selected by using combinatorial biology based molecular libraries such as phage display peptide libraries. Selected inorganic binding peptides can further be designed to investigate their recognition mechanism and optimal structure. Protein engineering can be defined as the use of genetic and chemical techniques to change the structure and function of a protein. The act of protein engineering deals with catalysis, molecular recognition, folding and stability of proteins. In this study, one of the Platinum-binding peptides was engineered to investigate the structural and multimerization effect on peptides. The protein engineering tools were utilized for the generation of multiple repeats of binding sequence to incorporate the structural properties of the inorganic surfaces.Multiple repeating form of the peptide was constructed both in linear and constraint form in order to investigate peptide conformation on binding affinity. Binding affinity and specificity of multiple repeating peptides were compared with the original linear and constraint ones through immuno-fluorescent labeling and ELISA analysis.Yüksek LisansM.Sc

İnorganiklere özgün bağlanan peptidlerin nano-biyoteknolojik uygulamalari

Tez (Doktora) -- İstanbul Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, 2012Bir çok organizma protein anorganik etkileşimlerinden meydana gelen organik-anorganik hibrid sistemler içerir. Bu hibrid sistemlerin koruyucu tabakalar vedestekleyici dokular oluşturmak, yük ve iyon transferi yapmak, bazı optik vemekanik özellikler geliştirmek gibi mükemmel fonksiyonları mevcuttur.Çeşitlendirilmiş fonksiyonlara sahip bu sistemler, biyoteknoloji ve nano-biyoteknoloji alanında kullanılabilecek yeni sistemlerin tasarımında örnek teşkil eder(biyobenzetim). Anorganik yüzeyleri tanıma ve kuvvvetli bir şekilde tutunmaözelliğine sahip olan peptitlerin (GEPI) kullanılmasını esas alan bir yaklaşım ilenanoparçacık ve biyomoleküllerin istenen anorganik yüzeye immobilize edilmesi yada yeni özellikte nanoyapıların sentezlenmesi mümkündür.Biyomoleküllerin anorganik yüzeylere immobilizasyonları aktivite ve stabilite artışısağlaması amacıyla önemlidir. Kimyasal immobilizasyon yöntemleri ile elde edilensistemler biyomolekülün aktivitesinde azalmaya ya da kayba neden olabilmektedir.Bu nedenle GEPI'ler aracılığı ile immobilizasyon denenmiş ve başarılı örnekler eldeedilmiştir. GEPI aracalıklı immobilzasyonda peptidler, biyolojik molekülle birlikteüretilerek çift foksiyonlu bir molekül elde edilir. Molekül peptidden gelen yüzeytanıma özelliği ile matrikse tutunurken, biyomolekülü oluşturan bölge istenenbiyolojik fonksiyonu göstermeye devam eder. Bu tür bir tutuklanma sistemindeprotein yapısının kimyasal reaksiyonlarla bozunması ya da yüzeye kontrolsüz olarakbağlanması engellenmiş olur. Bu çalışmada altın yüzeye özgün bağlanan iki farklıpeptid sırasıyla Huntingtin proteinini ve Lactate dehidrogenaz enziminin altınyüzeylere tutuklamak amacıyla kullanılmıştır.Çalışmanın ilk kısmında altın yüzeye özgün bağlanan GBP1 peptidi, Huntingtinproteininin N-terminal ucuna eklenerek proteinin altın sensör yüzeyine bağlanmasınaaracılık etmek amacıyla kullanılmıştır. Huntingtin proteini mutant formundaHuntington hastalığına neden olan ökaryotik bir proteindir. Proteinin mutant formuN-terminal bölgesindeki glutamin tekrarlarının sayısında artış meydana gelmişhalidir. Normal protein 35 ve daha az glutamin tekrarı içerirken, mutant proteinde busayı 110 a kadar ulaşabilmektedir. Glutamin tekrarlarındaki artış miktarı hastalığınseyri ile doğru orantılı bulunmuştur. Hastalığın en belirgin hücre patalojisisitoplazma ve nukleusda inklüzyon cisimciklerinin gözlenmesidir. ?nklüzyoncisimcikleri mutant proteinin agregatlar oluşturması sonucu meydana gelir. Bir gruparaştırmacı hastalık patalojisinde etkin mekanizmanın protein agregasyonu sonucuolaşan fibril yapıların varlığı olduğunu düşünmektedir. Ancak fibril yapılarınsayısında azalma olmaksızın hastalık patalojisinin engellenebildiği durumlarınvarlığı, bazı araştırmacıların fibrilasyonun aslında hücrenin korunma mekanizmasıolduğunu düşünmelerine yol açmıştır. Hastalık oluşumunun daha iyi anlaşılabilmesive etkin tedavi yöntemlerinin geliştirilmesi için Huntingtin fibrillasyon mekanizması çalışılmaktadır. Ancak şu ana kadar farklı fibrillasyon basamaklarında meydanagelen agregasyon kinetiği nicel olarak araştırılmamıştır. Biz yüzey plazmon resonanspektroskopisini kullanarak (SPR) Htt fibrilasyon kinetiğini incelemeyi hedefledik.Yüzey plasmon rezonans spektroskopisi çalışmalarında proteinlerin altın sensoryüzeyine immobıilize edilmeleri gerekmektedir. Altın yüzeyine proteinimmobilizasyonunu gerçekleştirmek için GBP1 kullanılmıştır. GBP1-Htt füzyonproteinleri hem fibril hem de proto-fibril formlarda SPR yüzeyine tutuklanmışlardır.Ardından monomer haldeki Htt proteinleri yüzeye tutuklanmış fibril yapılarınüzerine gönderilerek bağlanma kinetikleri incelenmiştir. Kontrol olarak Htt fibril veproto-fibril yapıları altın yüzeyine kovalent immobilizasyonla tutuklanarak dadeneyler tekrar edilmiştir. Kontrol çalışmaları GBP1 aracılıklı immobilziasyon ile enaz kovalent tutuklanma kadar etkin bir immobilizasyon gerçekleştirildiğinigöstermiştir. Ayrıca fibril ve proto-fibril uzamasının kinetiğinin incelenmesineolanak sağlamıştır.Elde edilen veriler, fibril uzaması için iki basamaklı bir fibrillasyon modeliönerilmesine sebep olmuştur. Model, ilk basamakta monomerin fibril ucunaeklenmesini, ikinci basamakta ise konformasyonel değişimini içermektedir. Bukonformasyonel değişim sonucu monomer artık fibrilin bir parçası haline gelmiş veyeni eklenecek olan monomer proteinlerle etkileşmeye hazır hale gelmiştir. Proto-fibril uzamasında ise tek basamaklı bir fibrilasyon kinetiği modeliönerilebilmektedir. Bu modele göre monomer proto-fibril ucuna eklenmiş veuzamaya neden olmuştur. Fibril ve proto-fibril uzamaları için elde edilen dengesabitleri, fibrilasyonun başlangıç aşamalarında daha yavaş olduğunu göstermiştir. Buveri nükleasyona dayalı polimerizasyon olarak değerlendirilen Huntingtin fibriluzamasını destekler niteliktedir. Bu modelde fibrilasyonun başlaması için önceliklebir nukleus oluşumu gerekliliği ve bu basamağın da hız kısıtlayıcı basamak olduğudüşünülmektedir. Proto-firbil uzamasının da bu nedenle fibril uzamasından dahayavaş olması anlamlı bulunmuştur. Çünkü proto-fibriller aslında nukleus dan dahabüyük ancak henüz fibril büyüklüğüne ulaşmamış ara yapılardır. Elde edilenfibrilasyon kinetiği verileri ile hastalık tedavisi için geliştirlen olası ilaçprokürsörlerinin agregasyona etkileri araştırılabilir. Ayrıca GBP1 aracıklıimmobilizasyon diğer agregasyon profili gösteren proteinlerin kinetiklerininincelenmesinde de kullanılabilir bir yöntem olarak sunulabilir. Bu sayede Huntingtonbenzeri nörodejeneratif hastalıkların da araştırılması mümkün görülmektedir.Çalışmanın ikinci kısmında diğer bir altına özgün bağlanan peptid olan AuBP2(WALRRSIRRQSY), LDH enziminin N-terminaline eklenmiş ve enzimin altınyüzeyine immobilizasyonunda kullanılmıştır. Laktat dehidrogenaz enzimi birçokorganizma tarafından üretilmektedir. Ancak bu çalışmada aktitesi ve üç boyutluyapısı aydınlatılmış olanı termostabil organizmalardan Bacillus stearothermophilustarafından üretilen enzim (bsLDH) kullanılmıştır. bsLDH NADH/NAD+ kofaktörçiftini kullanarak pürivat (oxo asid) ve laktat (hydroksi asid)'ın dönüşümünükatalizlemektedirler. Reaksiyon ürünleri yarı-sentetik penisilin ve antihipertensiflergibi farmasötiklerin yapımı ve fenilketonürinin tıbbi tanısında kullanılmaktadırlar.Ayrıca diyagnostik alanında lactat miktarının tayininde yararlanılan bir enzimdir.Son zamanlarda ise nano boyutlu bio-enerji sistemlerinin geliştirilmesinde bir redoksenzimi olan LDH'in direk elektron transferini sağlama özelliğinden yararlanılmasıüzerine çalışılmaktadır. Hem biyosensör hem de biyo-enerji sistemlerinde LDH'denyararlanabilmek için uygun bir matrikse immobilize edilmesine ihtiyaç vardır. Bu çalışmada, kimyasal tutuklama yöntemlerine alternatif olarak LDHimmobilizasyonunu AuBP2 peptidi aracılığı ile gerçekleştirilmiştir. AuBP2 peptiddizisi, rekombinant DNA teknoloji kullanılarak LDH proteinin N-terminal ucunaeklenmiştir. Oluşturulan füzyon proteinin LDH aktivesi göstermeye devam edipetmediği enzim aktivite tahlilleri ile test edilmiştir. Sonuçlar AuBP2 eklenmesininLDH aktivitesinde ciddi bir azalmaya sebep olmadığını göstermiştir. Ardından yüzeyplazmon resonans spektorskopisi kullanılarak füzyon proteinin altın yüzeyebağlanma ilgisi araştırılmıştır. SPR sonuçları AuBP2 varlığında enzimin altın yüzeyeilgisinin on kat kadar arttırıldığını ve yüzeye tutuklandıktan sonrauzaklaştırılmadığını göstermiştir. Bu çalışmalar ile AuBP2-LDH füzyon proteininhem altın yüzeye bağlanabildiği hem de LDH aktivitesi göstermeye devam ettiğibulunmuştur.Füzyon proteinin immobilize halde iken ne kadar aktif olduğu da enzimler altın nanoparçacıklara tutuklanarak incelenmiştir. Enzimlerin immobilizasyon sonrası serbestenzime kıyasla %80 civarında aktivite gösterdikleri bulunmuştur. Enzimimmobilizasyonlarında %50 üzerinde immobilize aktivite elde etmenin iyi bir veriolduğu düşünüldüğünde AuBP2 ile immobilizasyonun etkinliği görülmektedir.Ayrıca immobilize enzimlerin 30 güne kadar aktivitelerini korudukları da izlenmiştir.Serbest enzimler ise 30 gün sonunda immobilize enzime kıyasla daha fazla aktivitekaybına uğradıkları gözlenmiştir.Son olarak, LDH enziminin redoks raksiyonunu incelemek amacıyla siklikvoltametri çalışması yapılmıştır. Bu çalışmada AuBP2-LDH altın elektrod yüzeyineimmobilize edilmiştir. Sisteme substrate olarak laktat ve kofaktor olarak NADbeslenmiştir. Elektrod yüzeyine potansiyel farkı uygularak, redüklenme veoksitlenme reaksiyonları izlenmiştir. Siklik voltametre analizlerinde enzimin NADredüksiyonu gözlenmiştir. Bu gözlem, hem biyosensör hem de biyo-enerjisistemlerinde elde edilen redüklenme miktarından daha yüksek bulunmuştur. Busonuç, AuBP2 gibi çok küçük bir molekül ile yüzeye tutturulan enzimin, elektrodayakınlığı sonucunda elektrod ile enzim arasındaki elektron transferine olanaksağlandığını düşündürmüştür.Tez çalışması genel olarak incelendiğinde altına özgün bağlanan peptidlerin hemprotein hem de enzim immobilzasyonunda etkin olarak kullanılabileceğigörülmüştür. GEPI aracılıklı immobilizasyon ile huntington hastalığı gibi proteinagregasyonuna dayalı diğer nörodejeneratif hastalıkların da çalışılması mümkündür.Ayrıca sensör yüzeyine yaklaştırılmak istenen enzimlerin GEPI aracılıklıimmobilizasyon ile yüzeye tutuklanmaları olanağı vardır.Nature provides enormous structures exhibiting great functions such as strength,optical and magnetic properties. The molecular hierarchy of these structures arisesfrom the hybrid organic-inorganic interfaces. The organic compounds are mainlyproteins, which are mediating the assembly of inorganic molecules for orderedstructures. The protein moieties interacting with the inorganic molecules could bepurified and utilized for biotechnological applications in order to obtain newgeneration biomaterials. However, the purification of the proteins from hard tissuesis time consuming as well as the natural proteins may not even exist for some of thetechnologically relevant materials. Therefore, combinatorial biology techniques havebeen adapted and applied in the last decade for the selection of inorganic bindingpeptides for desired inorganic materials. The inorganic binding peptides selected andfurther characterized by Sarikaya and Tamerler group was named as GEPIs(Genetically Engineered Peptides for Inorganics) and this term is widely used in theliterature. In the last decade, inorganic binding peptides have been selected forvarious inorganic materials by our group and others. In the last years GEPIs weredemonstrated to exhibit a number of functions such as linking inorganic-inorganicparticles, synthesizing inorganic materials and immobilizing biomolecules oninorganic surfaces through their controlled interactions at the biological-materialinterface based on molecular recognition. In this study, our purpose to develop fusionproteins incorporating inorganic binding domain and demonstrate their versatile usein a wide range of area from biomedical to biotechnology. We utilized two of theinorganic gold binding peptides, with different length and binding characteristics fordirected immobilization of Huntingtin protein, which is responsible for Huntingtondisease, and Lactate dehydrogenase, which is an important enzyme in chemical andpharmaceutical industriesIn the biomedical studies related part of our study, one of the gold binding peptides(GBP1: MHGKTQATSGTIQS) was used as fusion partner with Huntingtin protein(Htt) to mediate its directed immobilization onto gold surface. Htt is a eukaryoticprotein, which is causing to Huntington?s disease in mutated form. The mainpathology of the disease is the inclusion bodies found in cytoplasm and nucleus,which are composed of aggregated Htt proteins. Therefore, investigating theaggregation profile of the protein is critical and expected to have an impact on theprogress of the disease. In order to investigate aggregation kinetics, we utilized SPR,which is a surface based system. Preformed fibrils composed of mutant Htt proteinswere immobilized on gold sensor surface with the gold binding ability of the fusionpartner GBP1. Two different stages of fibrillization were monitored which are fibriland proto-fibril elongations. The data obtained for fibril elongation was suggested atwo-stage model indicating the interaction of monomer to fibril in the first stage and the conformational change of newly added monomer in the second stage. In theproto-fibril elongation, a one-stage model was proposed indicating the addition ofmonomer to the fibril. Difference between the first stage KD values of two individualsteps showed that fibril elongation is slower in the early times of fibrillization whichincreases while the fibril is formed. The obtained fibrillization kinetics lead for thedetection of the effect of new drug targets either for preventing or inducingaggreagation. Our studies demonstrate that the GBP1 mediated immobilization couldbe utilized for the investigation of aggregation kinetics for other neurodegenerativediseases as well through the attaching the proteins to the electrode surfaces with anorientation control and following the interaction with the counterparts dynamically.In the second part of our study, we used another gold binding peptide AuBP2, whichis much smaller than GBP, as the fusion partner for Bacillus stearothermophilusLDH (bsLDH). The AuBP2 link was utilized to provide to direct LDH?simmobilization onto gold surface with an orientation control and result in self-organization of the fusion product. bsLDH is a consumable enzyme in food,chemical and pharmaceutical industries and it is therefore industrially an importantenzyme. Additionaly, enzyme based biosensors for lactate detection is required LDHutilization. Finally, as being a redox enzyme, LDH has application area in biofuellcell systems, which has getting increasing interest in the recent years. However, theenzyme has to be immobilized without catalytic activity loss which requiresorientation control at the close proximity to increase the efficiency for both biosensorand biofuell cell applications. In consequence of reduced retained activities andefficiencies in electron circulation due to conventional surface immobilizationtechniques, we utilized GEPI mediated immobilization for LDH attachment ontogold surfaces. AuBP2 peptide region was genetically fused to the N-terminal of theenzyme. Enzyme activity analysis of the fusion construct indicated that AuBP2insertion doesn?t effect the enzyme activity. On the other hand, gold binding kineticsof fusion construct concluded that AuBP2 insertion resulted in gold binding ability toLDH enzyme. As expected, the immobilized enzyme was still keeping its activity.Even, at the end of the 30th day, the relative activity of the immobilized enzyme wasabout %100 compared to free enzyme. Finally, redox catalysis efficiency of theenzyme was investigated by using cyclic voltammetry. The data enabled thedetection of reducing reaction catalysed by LDH, in correlation with increasingsubstrate concentration. These data together provides that LDH immobilized byAuBP2 could be used for biosensor and biofuell cell applications.Overall, our results demonstrate that inorganic binding peptides are new type ofsurface functionalization linkers that provide functional biomolecules, ie. proteinsand enzymes to be immobilized on the desired surfaces with orientation control at aclose proximity through self assembly of the fusion molecules. This self-organizationhas potential in diverse technological areas from monitoring to energy conversion.DoktoraPh.D

Satış organizasyonlarında kilit müşteri yönetimi uygulamalarının müşteri memnuniyeti yaratma üzerindeki önem ve rolü

TEZ İ Organizasyonel satın alma ve tedarikçi ilişkileri ile ilgili araştırmalar günümüzde giderek artan bir hızla önem kazanmaya başlamıştır. Yerli veya çok uluslu tüm şirketler müşterilerin satın alma kararlarında etken olabilecek unsurları dikkatlice değerlendirerek, faaliyet gösterdikleri sektördeki pazar paylarını optimum noktaya çıkarabilmek arzusundadır. İşte bu amaçla, şirketler mevcut satış organizasyonlarını yeniden şekillendirerek satış personellerini müşteriye daha odaklanarak çalışma, onlarla ve onların sorunlarıyla yoğrulma ve müşterideki genel memnuniyet düzeyini arttırmaya teşvik etmektedirler. Çalışma 5 başlıktan oluşmaktadır. Birinci bölümde, "kilit müşteri yönetimi" kavramı ve bu yapılanmanın geleneksel satış gücü sistemlerinden ayrılan yönleri; avantajları ve olası dezavantajlarıyla birlikte incelenmiştir. Geleneksel satış gücü organizasyonları ve kilit müşteri yönetimiyle geleneksel satış sistemlerinin birbiriyle farklılılaştığı noktalar, ikinci bölümde incelenecek konular arasındadır. Üçüncü bölümde ise "ilişki pazarlaması" yaklaşımı geleneksel satış yöntemleriyle olan karşılaştırılarak incelenmektedir Dördüncü bölümde ise, müşteri memnuniyeti kavramı ve bu kavramın alt bileşenleri göz önüne serilmiştir . Araştırmanın yer aldığı son bölüm, Türkiye'de ev dışı yemek sektöründe faaliyet gösteren firmaların (yani toplu yemek, oteller, uluslararası fast food zincirleri vb.) satın alma kararının alınmasında önemli ölçüde etkili kişilerle yapılan anket sonuçlarına yer vermektedir. Anket verileri kullanılarak, bu sektörde faaliyet gösteren firmaların gıda tedarikçilerini farklı kriterler göz önünde bulundurarak değerlendirmeleri istenmiş ve özellikle tedarikçi firmaların satış organizasyonlarının performanslarının genel memnuniyet değerlendirmelerinde ne derece etkisinin bulunduğu incelenmiştir. Kilit, stratejik, ulusal, büyük ya da global müşteri gibi kavramların iş dünyasında daha sık kullanılmasının en önemli sebebi, şirketlerin satıştan elde ettikleri cirolarının yada karlarının önemli bir kısımından Pareto etkisi olarak adlandırılan bir kavram çerçevesinde, müşterilerinin küçük bir kısmından geldiklerini fark etmeleridir. Kilit müşterilerin stratejik önemi, tedarikçilerin üzerinde pazar gücü elde etme imkanına kavuşturduğu gibi, Kilit Müşteri Yönetiminin olmadığı yerde her müşterinin farklılaşan istekleriyle kuşatılma tehlikesi de ortaya çıkar. Kilit müşteriler kurumsal pazarlamada satıcı şirketler tarafından stratejik önemi olan müşteriler olarak tanımlanan gruplardır. Kilit Müşteri Yönetimi ise satıcı şirketler tarafından daimi olarak müşterilerin bireysel ihtiyaçlarına yönelik ürün/hizmet paketlerinin sunulması yoluyla sadık kilit müşteri portföyü elde etmeye odaklı bir yaklaşımdır. Kilit Müşteri Yönetimi süreci, öncelikle potansiyel kilit müşterileri tespit etmekle başlamaktadır. İkinci adım ise, seçilen müşterilerin stratejilerini titizlikle araştırmak ve bu stratejileri birer gelişim fırsatı olarak değerlendirmektir. Üçüncü adım, ilişki pazarlaması araçlarını etkin bir şekilde uygulamaktan geçmektedir.Bu safhada, müşterilerle kurulacak olan uzun vadeli ilişkiler anahtar unsur görevini üstlenmektedir. Dördüncü adım ise, mevcut müşterinin gelecekte tedarikçi firmaya ciro ve kar olarak geri dönebilecek potansiyel iş gelişim alanlarını keşfetmektir. Bundan sonrası ise, tedarikçi firma ile müşteri organizasyonlarının entegre bir şekilde çalışmasıdır. Kilit Müşteri Yönetimi'nde son evre ise, tedarikçi firmaların mevcut ürün/hizmet porföylerinin dışına çıkarak, kilit müşterilerine özel ürün ya da hizmetleri ona sunabilmek doğrultusunda ürün karmalarını yönetmeleridir. Research on organizastional buying and supplier relations has nowadays gained a considerable attention. All multinational or local compaines are carefully analysing the factırs that have influence on the purchasing decision of their customers and they desire to optimise their market share. With this aim, compainies are in the rush of reorganising their sales organisation and encoraging their sales people to focus more on customers' needs and desires. The research consists of 5 parts. In the first part, the term "key account management" and its difference from traditional sales organisations will be analysed with regards to its potential advantages and disadvantages. Traditional sales organisations and the points that marks the difference between traditional sales organisations and key account management is the topic of discussion for part 2. In part 3, relationship marketing will be analysed in comparison to traditional sales organisations. In the fourth section, the term "customer satisfaction" and its sub components will be discussed. The last part consists of an empirical research carried out in the FMCG sector of out of home business. The survey has been applied to the staff of the key accounts of the sector and people have evaluated their food suppliers according to the criteria provided to them. The reason why terms such as key account, national account or global account are increasingly being used is the recogntion of the companies that the major share of their NPS and profitability come from a small portion of their customers- the pareto effect. The strategic importance of the key accounts, while giving the customers more market power, has also provided the danger of being surronded by the differşng needs of each customer. Key accounts are defined in the industrial market as having a strategic importance. Key account management is a perception focused on the individual needs needs of the customers by providing them tailor made products/services. Key account process starts with identifying the potential custoımers. The second step is to investigate the strategies of the selected customers and to evaluate them as an opportunity of development. The third step is to us

Hyaluronan-sphingosine polymersomes for treatment of ocular neovascularization: synthesis and evaluation

Ocular neovascularization is a hallmark of several sight-threatening diseases, including diabetic retinopathy and age-related macular degeneration. Currently, available treatments are limited and often associated with side effects. Therefore, a novel approach to ocular neovascularization treatment through utilization of polymersomes from self-assembled sphingosine-grafted hyaluronic acid (HA-Sph) amphiphilic polymers is presented. The polymersomes are generated in spherical morphologies and sizes between 97.95 - 161.9 nm with homogenous size distributions. Experiments reveal that HA-Sph polymersomes, with concentrations ≥150 µg mL−1, significantly inhibit the proliferation of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), while concurrently promoting the proliferation of retinal pigment epithelial cells. The polymersomes demonstrate gradual disintegration in vitro, leading to sustained release of sphingosine, which prolongs the inhibition of HUVEC proliferation (from 87.5% at 24 h to 35.2% viability at 96 h). The efficacy of polymersomes in inhibiting angiogenesis is confirmed through tube formation assay, revealing a substantial reduction in tube length compared to the control group. The findings also validate the ocular penetration capability of polymersomes through ex vivo whole porcine eye ocular penetration study, indicating their suitability for topical administration. Potentially, HA-Sph polymersomes can be harnessed to develop intricate drug delivery systems that protect the retina and effectively treat ocular diseases

An injectable peptide hydrogel for reconstruction of the human trabecular meshwork

Glaucoma is a leading cause of irreversible blindness worldwide. Current treatments of glaucoma involve lowering the IOP by means of decreasing aqueous humor production or increasing non-trabecular aqueous humor outflow with the help of IOP-lowering eye drops, nanotechnology enabled glaucoma drainage implants, and trabeculectomy. However, there is currently no effective and permanent cure for this disease. In order to investigate new therapeutic strategies, three dimensional (3D) biomimetic trabecular meshwork (TM) models are in demand. Therefore, we adapted MAX8B, a peptide hydrogel system to bioengineer a 3D trabecular meshwork scaffold. We assessed mechanical and bio-instructive properties of this engineered tissue matrix by using rheological analysis, 3D cell culture and imaging techniques. The scaffold material exhibited shear-thinning ability and biocompatibility for proper hTM growth and proliferation indicating a potential utilization as an injectable implant. Additionally, by using a perfusion system, MAX8B scaffold was tested as an in vitro platform for investigating the effect of Dexamethasone (Dex) on trabecular meshwork outflow facility. The physiological response of hTM cells within the scaffold to Dex treatment clearly supported the effectiveness of this 3D model as a drug-testing platform, which can accelerate discovery of new therapeutic targets for glaucoma. Statement of significance: Artificial 3D-TM (3-dimentional Trabecular Meshwork) developed here with hTM (human TM) cells seeded on peptide-hydrogel scaffolds exhibits the mechanical strength and physiological properties mimicking the native TM tissue. Besides serving a novel and effective 3D-TM model, the MAX8B hydrogel could potentially function as an injectable trabecular meshwork implant

Therapeutic nanoparticles and their targeted delivery applications

Nanotechnology offers many advantages in various fields of science. In this regard, nanoparticles are the essential building blocks of nanotechnology. Recent advances in nanotechnology have proven that nanoparticles acquire a great potential in medical applications. Formation of stable interactions with ligands, variability in size and shape, high carrier capacity, and convenience of binding of both hydrophilic and hydrophobic substances make nanoparticles favorable platforms for the target-specific and controlled delivery of micro- and macromolecules in disease therapy. Nanoparticles combined with the therapeutic agents overcome problems associated with conventional therapy; however, some issues like side effects and toxicity are still debated and should be well concerned before their utilization in biological systems. It is therefore important to understand the specific properties of therapeutic nanoparticles and their delivery strategies. Here, we provide an overview on the unique features of nanoparticles in the biological systems. We emphasize on the type of clinically used nanoparticles and their specificity for therapeutic applications, as well as on their current delivery strategies for specific diseases such as cancer, infectious, autoimmune, cardiovascular, neurodegenerative, ocular, and pulmonary diseases. Understanding of the characteristics of nanoparticles and their interactions with the biological environment will enable us to establish novel strategies for the treatment, prevention, and diagnosis in many diseases, particularly untreatable ones

Fuzzy drug targets: disordered proteins in the drug-discovery realm

Intrinsically disordered proteins (IDPs) and regions (IDRs) form a large part of the eukaryotic proteome. Contrary to the structure-function paradigm, the disordered proteins perform a myriad of functions in vivo. Consequently, they are involved in various disease pathways and are plausible drug targets. Unlike folded proteins, that have a defined structure and well carved out drug-binding pockets that can guide lead molecule selection, the disordered proteins require alternative drug-development methodologies that are based on an acceptable picture of their conformational ensemble. In this review, we discuss various experimental and computational techniques that contribute toward understanding IDP “structure” and describe representative pursuances toward IDP-targeting drug development. We also discuss ideas on developing rational drug design protocols targeting IDPs

Molecular insights on the therapeutic effect of selected flavonoids on diabetic neuropathy

One of the common clinical complications of diabetes is diabetic neuropathy affecting the nervous system. Painful diabetic neuropathy is widespread and highly prevalent. At least 50% of diabetes patients eventually develop diabetic neuropathy. The four main types of diabetic neuropathy are peripheral neuropathy, autonomic neuropathy, proximal neuropathy (diabetic polyradiculopathy), and mononeuropathy (Focal neuropathy). Glucose control remains the common therapy for diabetic neuropathy due to limited knowledge on early biomarkers that are expressed during nerve damage, there-by limiting the cure through pharmacotherapy. Glucose control dramatically reduces the onset of neuropathy in type 1 diabetes but proves to be less effective in type 2 diabetes. Therefore, the focus is on various herbal remedies for prevention and treatment. There is numerous research on the use of anti-convulsants and antidepressants for the management of pain in diabetic neuropathy. Extensive research is being conducted on natural products, including the isolation of pure compounds like flavonoids from plants and their effect on diabetic neuropathy. This review focuses on the use of important flavonoids such as flavanols (e.g., quercetin, rutin, kaempferol, and isorhamnetin), flavanones (e.g., hesperidin, naringenin and class eriodictyol), and flavones (e.g., apigenin, luteolin, tangeretin, chrysin, and diosmin) for the prevention and treatment of diabetic neuropathy. The mechanisms of action of flavonoids against diabetic neuropathy by their antioxidant, anti-inflammation, anti-glycation proper-ties, etc., are also covered in this review article

Bone tissue engineering: anionic polysaccharides as promising scaffolds

Bone repair is a self-healing process through modelling and remodeling. However, critical-sized bone defects need bone augmentation where bone tissue engineering plays vital role. Bone tissue Engineering (BTE) requires unique combinations of scaffolds, cells, and bio-signal molecules. Bone scaffold materials should be biocompatible, bioresorbable and exhibit biomimetic properties. Natural polymers, acquiring cell binding motives, producing nontoxic degradation products and tunable properties are ideal materials. Anionic polysaccharides of natural origin mimic mammalian ECM components and even the group called GAGs (Glycosaminoglycan) are actual components of ECM possessing various functions including cell adhesion, cell signaling, maintenance of homeostasis and inflammation control. Among them, anionic polysaccharides provide stabilization and sustained release of growth factors (GFs), porosity, calcium phosphate nucleation site, viscoelasticity, and water retention. Therefore, anionic polysaccharides are unique biomaterials for BTE. In this review, we have summarized the highlights of bone tissue engineering and recent applications of anionic polysaccharides in BTE

Polysaccharide-bioceramic composites for bone tissue engineering: a review

Limitations associated with conventional bone substitutes such as autografts, increasing demand for bone grafts, and growing elderly population worldwide necessitate development of unique materials as bone graft substitutes. Bone tissue engineering (BTE) would ensure therapy advancement, efficiency, and cost-effective treatment modalities of bone defects. One way of engineering bone tissue scaffolds by mimicking natural bone tissue composed of organic and inorganic phases is to utilize polysaccharide-bioceramic hybrid composites. Polysaccharides are abundant in nature, and present in human body. Biominerals, like hydroxyapatite are present in natural bone and some of them possess osteoconductive and osteoinductive properties. Ion doped bioceramics could substitute protein-based biosignal molecules to achieve osteogenesis, vasculogenesis, angiogenesis, and stress shielding. This review is a systemic summary on properties, advantages, and limitations of polysaccharide-bioceramic/ion doped bioceramic composites along with their recent advancements in BTE