Clonación y expresión de la proteína MOMP de Chlamydia abortus en el sistema de Escherichia coli BL21: Clonagem e expressão da proteína MOMP de Chlamydia abortus no sistema Escherichia coli BL21

La bacteria Clamydophila abortus, ocasiona el aborto y la muerte temprana de crías débiles en el ganado caprino y ovino. Su detección es compleja y puede llevar a falsos negativos cuando ocurren reacciones cruzadas en algunas de las técnicas utilizadas. Por esta razón, el objetivo de este trabajo fue clonar y expresar la proteína MOMP de Chlamydophila abortus, para usarse como antígeno en el diagnóstico de la enfermedad ocasionada por esta bacteria. La proteína recombinante MOMP se produjo en E. coli BL21 y la confirmación de su expresión se hizo con un anticuerpo dirigido hacia la etiqueta de histidinas. La detección inmunogénica se realizó usando un suero positivo de referencia. Estos resultados permiten inferir que la proteína recombinante MOMP puede ser un buen candidato para el desarrollo de pruebas inmunológicas que permitan realizar un diagnóstico sensible y específico de la clamidiosis en México

Detección molecular de Candidatus Liberibacter asiaticus en naranjo agrio (Citrus aurantium L.) en el norte de Tamaulipas, México: Detecção molecular de Candidatus Liberibacter asiaticus em laranja azeveda (Citrus aurantium L.) no norte de Tamaulipas, México

El Huanglongbing (HLB), es una de las enfermedades más devastadoras de los cítricos a nivel mundial, el agente causal es una bacteria del género Candidatus Liberibacter spp., y afecta a todas las especies de cítricos, especialmente los cítricos agrios. Actualmente se han confirmado tres especies de la bacteria: Ca. L. asiáticus, Ca. L. americanus y Ca. L. africanus. Esta bacteria es transmitida por dos insectos vectores: Diaphorina citri (América y Asia) y Trioza erytrae (África), lo que favorece su rápida y eficaz diseminación, ocasionando cuantiosas pérdidas económicas, así como problemas sociales y ambientales. En este trabajo se realizó la optimización de la Reacción en Cadena de la Polimerasa punto final y Tiempo Real (PCR punto final y PCR-TR) para la detección de HLB en naranjo agrio en la zona norte del estado de Tamaulipas, México. Se procesaron 178 muestras (168 fueron de nervadura central de la hoja, ocho de raíz y dos muestras del vector). Mediante PCR punto final se detectó a la bacteria a partir del DNA extraído de hoja, pero no se detectó en el DNA extraído a partir de raíz y del vector. Mediante la PCR-TR se detectó a la bacteria a partir del ADN extraído de hoja y raíz de naranjo agrio y del insecto vector. Estos resultados demuestran que la PCR-TR es más eficiente que la PCR punto final para la detección de la bacteria en diferentes tejidos de la planta de naranjo agrio y en el insecto vector

Expresión de la proteína B8Y674 Candidatus Liberibacter asiaticus mediante electroforesis en geles de poliacrilamida (page) y dot blot: Expressão da proteína B8Y674 Candidatus Liberibacter asiaticus por eletroforese em gel de poliacrilamida (page) e dot blot

El Huanglongbing (HLB), es una de las enfermedades más devastadoras de los cítricos a nivel mundial y representa una seria amenaza para la citricultura mexicana. El agente causal es una bacteria incultivable que pertenece al género Candidatus Liberibacter spp. y afecta a todas las especies de cítricos, especialmente los cítricos agrios. Para su detección, se emplean técnicas moleculares como es la reacción en cadena de la polimerasa (QT-PCR), técnicas serológicas y espectrofotométricas. El objetivo de este trabajo fue expresar la proteína recombinante BY8743 de Candidatus Liberibacter mediante electroforesis en geles de poliacrilamida al 12 % (PAGE) y Dot Blot. Para obtener la secuencia se acudió a la base de datos del National Center Biotechnology Information (NCBI). Una vez obtenida la secuencia, se revisó y modificó el marco de lectura abierto, por sus siglas en ingles Open Reading Frame (ORF) mediante el programa CLC Main Workbench 7 y se procedió a sintetizar el vector pET22b+, también se verificó el codón de inicio y de termino acoplado al vector. Para la transformación se usaron células comerciales One Shot® TOP10 Chemically Competent (InvitrogenTM), posteriormente fueron subclonadas en células de E. coli BL21. Se realizaron minipreparaciones usando un método de lisis alcalina y además se realizó una cinética de crecimiento, observando que en tres horas se alcanza la fase estacionaria. Se aplicaron concentraciones de 0.5, 0.8 y 1 mM del inductor metabólico isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) y la mejor concentración fue 1 mM, ya que a las cuatro horas después de su aplicación se pudo visualizar una proteína sobreexpresada de 38 kDa. Cuando se realizó el Dot Blot se obtuvieron resultados sobresalientes de inmunoexpresión en las tres concentraciones del inductor utilizado a diferencia del control y de las células sin transfectar

Evaluación molecular del aguacate criollo (Persea americana Mill) en Nuevo León, México

ABSTRACT México is the center of origin of the avocado (Persea americana Mill), most of the recognized members of the genus Persea occur primarily from the central part of México to Central América. In this study, the molecular evaluation of germplasm of wild avocado from the State of Nuevo León, México, was performed using Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD's) technique. A total of 27 wild avocado materials were collected in the southern region and 16 in the northern region of Nuevo León. The level of gen et-ic diversity detected was 84%, which is considered high. Specific fragments or only RAPD's type, present in a single individual, were observed, this type of fragments are of particular interest since they can be linked to a particular genotype and serve in the diagnosis to differentiate a genotype or a specific region of the genome. The above is of particular interest for the creole avocado of the State of Nuevo León, whose problem for marketing is the short shelf life that presents, therefore, finding great genetic variation as detected in this work increases the possibility of generating new materials whose shelf life is longer, enhancing its commercial value.RESUMEN México es centro de origen del aguacate (Persea americana Mill), la mayoría de los miembros reconocidos del género Persea ocurren primariamente desde la parte central de México hasta Centroamérica. En este estudio se realizó la evaluación molecular de germoplasma de aguacate criollo del Estado de Nuevo León, México, utilizando la técnica del DNA Polimórfico Amplificado al Azar (RAPD's). Se colectaron 27 materiales de aguacate criollo en la región sur y 16 en la región norte de Nuevo León. El nivel de diversidad genética detectado fue del 84%, el cual se considera como alto. Se observaron fragmentos específicos o únicos tipo RAPD's, presentes en un solo individuo, este tipo de fragmentos son de particular interés ya que pueden estar ligados a un genotipo en particular y servir en el diagnóstico para diferenciar un genotipo o una región específica del genoma. Lo anterior es de particular interés para el aguacate criollo del Estado de Nuevo León, cuyo problema para su comercialización es la corta vida de anaquel que presenta, por lo tanto, encontrar gran variación genética como la detectada en este trabajo incrementa la posibilidad de generar nuevos materiales cuya vida de anaquel sea más prolongada, potenciando su valor comercial

Variability of the total oil content and fatty acid profile of creole avocados from Nuevo Leon, Mexico

El Estado de Nuevo León se considera depositario de una amplia diversidad genética de aguacates criollos (Persea americana var drimyfolia). Objetivo. El objetivo de este trabajo fue determinar la variabilidad del contenido total de aceite y el perfil de los ácidos grasos en los aguacates criollos de Nuevo León, México. Materiales y métodos. Durante la primavera y el verano de 2016, se recolectaron 36 variedades de aguacates criollos en la región norte y sur del Estado de Nuevo León, México para su caracterización química. La variedad comercial “Hass” fue incluida como control. Para determinar la variabilidad que existe en el contenido de aceites totales y de ácidos grasos en los materiales recolectados, se realizaron análisis de componentes principales y de conglomerados. Resultados. Se detectaron seis ácidos grasos en el aceite total de las variedades de aguacate criollo: palmítico, esteárico, oleico, palmitoleico, linoleico y linolénico. Las variedades “Plátano temprano”, “Plátano delgado”, “Huevo de toro”, “Cuerno”, “Pato” y “Especial”, mostraron en promedio 17,28, 24,93 y 66,29 % más en el contenido de ácidos oleico, linoleico y linolénico, respectivamente, y un promedio de 28,12 % menos de ácido esteárico en comparación con la variedad comercial “Hass”. De acuerdo al análisis de componentes principales, los materiales con altos contenidos de ácido oleico, por lo general tienen bajos contenidos de los ácidos palmítico y palmitoleico. El dendograma presentó seis grupos con los materiales evaluados, la mayoría de los materiales sobresalientes quedaron ubicados en los grupos uno y cuatro. Conclusión. Se determinó una alta variabilidad en el contenido de aceites totales y ácidos grasos en los aguacates criollos de Nuevo León. Por lo tanto, se consideran promisorios para su incorporación a programas de mejoramiento genético.Introduction. The State of Nuevo Leon is considered the depositary of a wide genetic diversity of creole avocados (Persea americana var drimyfolia). Objective. The aim of this work was to determine the variability of the total oil content and the fatty acids profile in creole avocados from Nuevo Leon, Mexico. Materials and methods. During the spring and summer of 2016, 36 varieties of creole avocados were collected in the northern and southern region of the State of Nuevo Leon, Mexico for chemical characterization. The commercial variety “Hass” was included as a control. To determine the variability that exists in the content of total oils and fatty acids in the collected materials, analyzes of the main components and conglomerates were carried out. Results. Six fatty acids were detected in the total oil of the creole avocados: palmitic, stearic, oleic, palmitoleic, linoleic and linolenic. The outstanding varieties were “Platano temprano”, “Platano delgado”, “Huevo de toro”, “Cuerno”, “Pato”, and “Especial”, which presented an average of 17.28, 24.93 and 66.29 % more in the content of oleic, linoleic and linolenic acids respectively, and an average of 28.12 % less stearic acid compared to the commercial variety “Hass”. According to the analysis of main components, materials with high oleic acid content usually have low palmitic and palmitoleic acid contents. The dendrogram presented six groups within the evaluated materials, most of the outstanding materials are located in groups one and four. Conclusion. High variability in the content of total oils and fatty acids was determined in creole avocados from Nuevo Leon. Therefore, they are considered promising for their incorporation into genetic improvement programs