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Purificaci贸n de IgY contra la subunidad nr3 del receptor nmda de cerebro de rata
Objetivo. Obtener anticuerpos tipo IgY contra p茅ptidos sint茅ticos de las subunidades NR3A y NR3B del receptor NMDA de ratas, para reconocer y seguir la expresi贸n de estas subunidades en extractos de cerebro de rata de diferentes edades. Materiales y m茅todos. Se dise帽aron dos p茅ptidos empleando los sistemas de la base de datos Entrez y el programa ClustalWPBIL de alineamientos m煤ltiples contra las subunidades NR3A y NR3B del receptor NMDA; una vez sintetizados por el m茅todo SSPS-fmoc fueron utilizados para inocular gallinas (Gallus gallus, variedad Hy Line Brown) de 16 semanas de edad; al cabo de 57 d铆as postinoculaci贸n se purific贸 IgY espec铆fica y se enfrentaron a extractos de cerebro de rata postnatal y adulta. Resultados. Se detectaron las subunidades NR3A y NR3B y se relacion贸 su expresi贸n con la edad del animal; siendo mayor la expresi贸n de la subunidad NR3A en extracto de cerebro de rata postnatal. No se encontr贸 diferencia marcada en la expresi贸n de la subunidad NR3B en las edades mencionadas. Conclusiones. Esta es la primera investigaci贸n que emplea prote铆na nativa para el reconocimiento de la subunidad NR3 del receptor NMDA, lo cual muestra la especificidad de los anticuerpos generados y contribuye con el entendimiento de las funciones de este receptor y su relaci贸n con la regulaci贸n de la memoria espacia
Uso de una conantokina y anticuerpos policlonales para identificar la subunidad NR2B del receptor n-metil-d-aspartato
Objetivo. Proponer una metodolog铆a de identificaci贸n de la subunidad NR2B, mediante el uso de conantokina G, as铆 como una adecuada extracci贸n de la subunidad NR2B. Materiales y m茅todos. Se ensayaron dos metodolog铆as para la extracci贸n de la subunidad NR2B de cerebro de rata adulta, la primera busc贸 la extracci贸n de la subunidad a partir de la membrana mediante la utilizaci贸n del detergente deoxicolato de sodio y la segunda, garantiz贸 primero la solubilizaci贸n y eliminaci贸n de prote铆nas citoplasm谩ticas para luego realizar la extracci贸n de la subunidad mediante el uso del mismo detergente, a partir del pellet generado en la centrifugaci贸n del extracto obtenido. Adicionalmente se biotinil贸 la conantokina G para evaluar su eficiencia en la identificaci贸n de la subunidad y comparar los resultados con los obtenidos por metodolog铆as tradicionales como DOT-BLOT, WESTERN-BLOT, ELISA e Inmunohistoqu铆mica. Resultados. La segunda metodolog铆a mostr贸 mayor extracci贸n de NR2B por lo que se seleccion贸 para la realizaci贸n de los extractos posteriores. Los ensayos de identificaci贸n con la conantokina biotinilada evidenciaron interferencia en el reconocimiento, haci茅ndose necesaria la identificaci贸n de la presencia de la subunidad NR2B mediante el uso de anticuerpos policlonales en los ensayos mencionados. Conclusiones. Se propone que hay un impedimento de tipo est茅rico en el marcaje de la conantokina con la biotina lo que no favorece la interacci贸n de este p茅ptido con la subunidad
Purificaci贸n de IgY contra la subunidad NR3 del receptor NMDA de cerebro de rata
Objective. To obtain IgY antibodies against synthetic peptides of NR3A and NR3B subunits
of the rat NMDA receptor, to recognize and follow the expression of these subunits in rat
brain extract at different ages. Materials and methods. By using Entrez data base and
ClustalW-PBIL program for sequence alignment two peptides against NR3A and NR3B subunits
of the NMDA receptor were designed, Once synthesized by SSPS-fmoc method, peptides
were then inoculated into 16-week-old chickens (Gallus gallus, var. Hy Line Brown). After
57 days specific IgY was purified and confronted with postnatal and adult rat brain extract.
Results. Both subunits NR3A and NR3B were detected and their expression was related to
rat age. The level of expression of NR3A was higher in postnatal rat brain extract; no
marked differences in expression of NR3B were found for either age. Conclusions. This is
the first research using native protein for recognition of the NR3 subunit of the NMDA
receptor It shows the antibody specificity and contributes to understanding the receptor锟絪
functions and its relation to spatial memory regulation.Objetivo. Obtener anticuerpos tipo IgY contra p茅ptidos sint茅ticos de las subunidades NR3A
y NR3B del receptor NMDA de ratas, para reconocer y seguir la expresi贸n de estas subunidades
en extractos de cerebro de rata de diferentes edades. Materiales y m茅todos. Se dise帽aron
dos p茅ptidos empleando los sistemas de la base de datos Entrez y el programa ClustalWPBIL
de alineamientos m煤ltiples contra las subunidades NR3A y NR3B del receptor NMDA; una
vez sintetizados por el m茅todo SSPS-fmoc fueron utilizados para inocular gallinas (Gallus
gallus, variedad Hy Line Brown) de 16 semanas de edad; al cabo de 57 d铆as postinoculaci贸n
se purific贸 IgY espec铆fica y se enfrentaron a extractos de cerebro de rata postnatal y
adulta. Resultados. Se detectaron las subunidades NR3A y NR3B y se relacion贸 su expresi贸n
con la edad del animal; siendo mayor la expresi贸n de la subunidad NR3A en extracto de
cerebro de rata postnatal. No se encontr贸 diferencia marcada en la expresi贸n de la subunidad
NR3B en las edades mencionadas. Conclusiones. Esta es la primera investigaci贸n que
emplea prote铆na nativa para el reconocimiento de la subunidad NR3 del receptor NMDA, lo
cual muestra la especificidad de los anticuerpos generados y contribuye con el entendimiento
de las funciones de este receptor y su relaci贸n con la regulaci贸n de la memoria espacial