Efecto del uso conjunto de metformina y una mezcla de microRNAs sobre la proliferación, migración y los niveles de las proteínas c-Myc y VEGF en una línea celular de cáncer ovárico epitelial

Abstract

El cáncer de ovario epitelial (COE) es la segunda neoplasia ginecológica con mayor mortalidad en Chile y el mundo, representando al 90% de los casos totales de cáncer de ovario. Se diagnostica de manera tardía debido a su sintomatología inespecífica. El principal tratamiento es la cirugía citorreductora seguida de quimioterapia, la cual puede generar resistencia en estadíos avanzados y tumores recurrentes. Por esta razón, es esencial buscar nuevas alternativas terapéuticas. La metformina, fármaco normoglicemiante usado para la diabetes mellitus tipo 2, ha mostrado tener efectos antitumorales. Su uso en pacientes diabéticas con COE se ha asociado con una mayor tasa de supervivencia y menor riesgo de recurrencia. Nuestro grupo de laboratorio ha demostrado que la metformina reduce la proliferación y angiogénesis en líneas celulares de COE, regulando proteínas claves como c-Myc y VEGF. Por otra parte, el factor de crecimiento nervioso (NGF) y su receptor TrkA están elevados en el COE, promoviendo su progresión y distintos procesos celulares mediante oncoproteínas reguladas por microRNAs (miRNAs). En el COE, los miRNAs oncogénicos aumentan, mientras que los oncosupresores, como miR-23b y miR-145, disminuyen. Estos miRNAs regulan genes como VEGF y c-Myc. Nuestro equipo de investigación encontró que la metformina contrarresta la disminución de miR-23b y miR-145 provocada por NGF, así mismo con los niveles de c-Myc y VEGF, lo que sugiere su potencial como tratamiento en el COE. Hipótesis: El uso conjunto de metformina con miR-23b y miR-145 disminuye la proliferación, migración y los niveles proteicos de c-Myc y VEGF en una línea celular de cáncer ovárico epitelial. Objetivo general: Determinar si el uso de metformina acompañado de una co-transfección con miR-23b y miR-145 disminuye la proliferación y migración, así como los niveles proteicos de c-Myc y VEGF en la línea celular de cáncer ovárico epitelial A2780. Metodología: Se realizaron experimentos in vitro en la línea celular A2780 de cáncer ovárico epitelial, la cual fueron tratadas con metformina clorhidrato y co-transfectadas con miR-23b y miR-145 durante 48 h. Luego de esto, para evaluar la proliferación celular se realizó una inmunocitoquímica específica para Ki-67, mientras que para evaluar la migración celular se realizó un ensayo de migración con insertos transwell. Asimismo, se evaluaron los niveles proteicos de c-Myc y VEGF a través de una inmunocitoquímica y de inmunodetección ELISA, respectivamente. Resultados: Luego del tratamiento conjunto de metformina con miR-23b y miR-145, la proliferación y migración celular, junto con los niveles proteicos de c-Myc y VEGF, evidenciaron una disminución en la línea celular A2780 de cáncer ovárico epitelial. Por su parte, el tratamiento individual con metformina a 0.5 mM mostró una disminución sobre el número de células y los niveles de VEGF en la línea celular A2780 de cáncer ovárico epitelial. Además, con el tratamiento individual con la mezcla de miR-23b y miR-145, se observó una disminución en los niveles de VEGF. Conclusión: El tratamiento conjunto de metformina con miR-23b y miR-145, disminuye la proliferación y migración celular, junto con los niveles proteicos de c-Myc y VEGF, posicionándose como un posible complemento a las terapias actuales de COE.Epithelial ovarian cancer (EOC) is the second most deadly gynecological neoplasm in Chile and the world, accounting for 90% of total ovarian cancer cases. It is often diagnosed at a late stage due to its nonspecific symptoms. The main treatment is cytoreductive surgery followed by chemotherapy, which can lead to resistance in advanced stages and recurrent tumors. Therefore, it is essential to explore new therapeutic alternatives. Metformin, a normoglycemic drug used for type 2 diabetes mellitus, has shown antitumor effects. Its use in diabetic patients with EOC has been associated with higher survival rates and a lower risk of recurrence. Our research group has demonstrated that metformin reduces proliferation and angiogenesis in EOC cell lines by regulating key proteins such as c-Myc and VEGF. Additionally, nerve growth factor (NGF) and its receptor TrkA are overexpressed in EOC, promoting cancer progression and various cellular processes through oncogenic proteins regulated by microRNAs (miRNAs). In EOC, oncogenic miRNAs increase, while tumor-suppressor miRNAs, such as miR-23b and miR-145, decrease. These miRNAs regulate genes such as VEGF and c-Myc. Our research team found that metformin counteracts the NGF-induced reduction of miR-23b and miR-145, as well as the levels of c-Myc and VEGF, suggesting its potential as a treatment for EOC. Hypothesis: The combined use of metformin with miR-23b and miR-145 reduces proliferation, migration, and protein levels of c-Myc and VEGF in an epithelial ovarian cancer cell line. Objective: To determine whether metformin combined with co-transfection of miR-23b and miR-145 decreases proliferation and migration, as well as the protein levels of c-Myc and VEGF in the A2780 epithelial ovarian cancer cell line. Methodology: In vitro experiments were conducted using the A2780 epithelial ovarian cancer cell line, treated with metformin hydrochloride and co-transfected with miR-23b and miR-145 for 48 hours. To assess cell proliferation, specific immunocytochemistry for Ki-67 was performed, while cell migration was evaluated using a transwell migration assay. Additionally, protein levels of c-Myc and VEGF were analyzed through immunocytochemistry and ELISA immunodetection, respectively. Results: Following combined treatment with metformin and miR-23b/miR-145, cell proliferation, migration, and protein levels of c-Myc and VEGF decreased in the A2780 epithelial ovarian cancer cell line. Moreover, individual treatment with metformin at 0.5 mM resulted in a reduction in cell count and VEGF levels. Additionally, treatment with the miR-23b/miR-145 mixture alone led to a decrease in VEGF levels. Conclusion: The combined treatment of metformin with miR-23b and miR-145 reduces cell proliferation, migration, and protein levels of c-Myc and VEGF, positioning it as a potential complementary therapy for EOC.FONDECYT REGULAR 1220479Versión original del auto