Diseño e implementación de un dispositivo para la aplicación de la terapia de estimulación por corriente continua transcraneal de alta definición

Versión original del autor22-05-203

Rol de CD73 y A2AR en la diferenciación de células T CD8+ agotadas en el nicho tumoral

El agotamiento es un proceso de diferenciación que caracteriza la inmunidad citotóxica de las células T CD8+ frente a células tumorales o infecciones crónicas y que dificulta la erradicación de tumores. Las células T CD8+ agotadas (Tex) derivan de células T precursoras agotadas (Tpex), que presentan características de célula de memoria como capacidad de autorenovación, y de linfocitos agotados como la expresión de receptores inhibitorios. Las células Tpex mantienen la respuesta inmune contra tumores y son esenciales para la efectividad de la terapia anti PD-1 aumentando el número de células Tpex y Tex, pudiendo estas últimas atacar directamente las células tumorales. Las células Tpex expresan la ectoenzima CD73 productora de adenosina, un nucleósido inmunosupresor que se acumula en altos niveles en el nicho tumoral. Sin embargo, no es clara la relación entre el eje CD73/adenosina y la diferenciación Tpex/Tex, ni los efectos del bloqueo inmunoterapeútico sobre estas células. En este trabajo se estudió el rol de CD73 y A2AR en la generación de células Tpex y Tex in vitro e in vivo. Para los estudios in vitro, estandarizamos un protocolo previamente descrito para inducir agotamiento en células T CD8+ mediante estimulación crónica con péptido y evaluamos por citometría de flujo la formación de células Tpex y Tex. Para los estudios in vivo, analizamos el agotamiento de células T CD8+ en un modelo de melanoma murino. La cinética de expresión de CD73 en células T CD8+ durante la diferenciación a Tpex in vitro mostró un aumento de CD73, seguido de una posterior reducción de CD73 cuando las células adquirían el fenotipo de Tex. Cuando se utilizaron ratones CD73 knockout (KO), los cuales no expresan CD73, observamos una reducción en la frecuencia de Tex y un déficit de células agotadas capaces de producir citoquinas efectoras, comparado a células Tex de ratones silvestres (WT). Al bloquear farmacológicamente CD73 durante la generación de células agotadas in vitro, no observamos diferencias en la formación de células con fenotipo agotado. Además, experimentos de RNAseq de células WT y CD73 KO agotadas in vitro, demostraron que las células de ratones CD73 KO tienen mayor expresión de genes asociados a la respuesta inmune que su contraparte WT, sugiriendo menor agotamiento en células provenientes de ratones CD73 KO. Por otro lado, analizamos la expresión de CD73 en linfocitos T CD8+ agotados presentes en tumores de melanoma B16.OVA y confirmamos una alta frecuencia de células Tpex CD73+ comparado a Tex. Finalmente, realizamos una cotransferencia de linfocitos T CD8+ vírgenes WT y CD73 KO en ratones portadores de tumores de melanoma B16.OVA y observamos una mayor frecuencia de linfocitos CD73 KO con fenotipo Tpex en el tumor y el nódulo drenante en relación a su contraparte WT. En cuanto al papel de A2AR en el agotamiento, analizamos la expresión de este receptor a través de RNAseq y PCR en tiempo real y encontramos que tanto células WT como CD73 KO agotadas in vitro expresan A2AR, pero este receptor se expresa menos en Tpex CD73 KO que WT. Experimentos de agotamiento de células T CD8+ in vitro en presencia de agonistas de A2AR demostraron una disminución en la expresión de moléculas asociadas a activación y agotamiento, una reducción en la frecuencia de células Tex y un aumento en la expresión de moléculas asociadas a troncalidad relativo al control. Por otra parte, ratones portadores de un tumor de melanoma B16.OVA, tratados con un antagonista específico de A2AR (SYN115), muestran un aumento en la frecuencia de Tex y una reducción en la frecuencia de células que expresan moléculas asociadas a la troncalidad relativo al control. Este trabajo entrega evidencia que sugiere roles diferentes para CD73 y la adenosina en el agotamiento de los linfocitos T CD8+. Mientras CD73 promueve el avance de la diferenciación desde linfocitos Tpex a Tex en los linfocitos T CD8+, la adenosina a través de su señalización por A2AR frena este proceso promoviendo la mantención de células Tpex.Exhaustion is a differentiation process that characterizes the cytotoxic immunity of CD8+ T cells against tumor cells or chronic infections and makes tumor eradication difficult. Exhausted CD8+ T cells (Tex) are derived from exhausted precursor T cells (Tpex), which present memory cell characteristics such as self-renewal capacity, and exhausted lymphocytes characteristics such as the expression of inhibitory receptors. Tpex cells maintain the immune response against tumors and are essential for the effectiveness of anti-PD-1 therapy by increasing the number of Tpex and Tex cells, the latter being able to directly attack tumor cells. Tpex cells express the adenosine-producing ectoenzyme CD73, an immunosuppressive nucleoside that accumulates at high levels in the tumor niche and to which Tpex cells are also exposed. However, the relationship between the CD73/adenosine axis and Tpex/Tex differentiation is unclear, as is the effect of immunotherapeutic blockade on these cells. In this work, we studied the role of CD73 and A2AR in the generation of Tpex and Tex cells in vitro and in vivo. For the in vitro studies, we standardized a previously described protocol to induce CD8+ T cell exhaustion by chronic stimulation with peptide, and we evaluated the formation of Tpex and Tex cells by flow cytometry. For the in vivo studies, we analyzed CD8+ T cell exhaustion in a murine melanoma model. The kinetics of CD73 expression in CD8+ T cells during Tpex differentiation in vitro showed an increase in CD73, followed by a further reduction in CD73 as cells acquired the Tex phenotype. When CD73 knockout (KO) mice were used, which do not express CD73, we observed a reduced Tex frequency and a deficit of exhausted cells capable of producing effector cytokines, compared to Tex cells from wild-type (WT) mice. When CD73 was pharmacologically blocked during the generation of exhausted cells in vitro, we observed no differences in the formation of cells with an exhausted phenotype. Furthermore, RNAseq experiments of WT and in vitro exhausted CD73 KO cells demonstrated that cells from CD73 KO mice have higher expression of genes associated with the immune response than their WT counterparts, suggesting less exhaustion in cells from CD73 KO mice. On the other hand, we analyzed CD73 expression on exhausted CD8+ T cells present in B16.OVA melanoma tumors and confirmed a high frequency of CD73+ Tpex cells compared to Tex. Finally, we cotransferred WT and CD73 KO naïve CD8+ T cells into mice bearing B16.OVA melanoma tumors and observed a higher frequency of CD73 KO cells with Tpex phenotype in the tumor and draining node relative to their WT counterpart. Regarding the role of A2AR in exhaustion, we analyzed the expression of this receptor through RNAseq and real-time PCR and found that both WT and CD73 KO cells exhausted in vitro express A2AR, but this receptor is less expressed in CD73 KO Tpex than WT. In vitro CD8+ T cell exhaustion experiments in the presence of A2AR agonists demonstrated a decrease in the expression of activation- and exhaustion-associated molecules, a reduction in the frequency of Tex cells, and an increase in the expression of stemness-associated molecules relative to control. On the other hand, mice bearing a B16.OVA melanoma tumor treated with a specific A2AR antagonist (SYN115) showed an increase in the frequency of Tex and a reduction in the frequency of cells expressing stemness-associated molecules relative to control. This work provides evidence suggesting different roles for CD73 and adenosine in CD8+ T cell exhaustion. While CD73 promotes the progression of differentiation from Tpex to Tex in CD8+ T cells, adenosine through its A2AR signaling slows down this process promoting the maintenance of Tpex cells.FONDECYT 1220196; FONDECYT 1230183; Beca de Doctorado Nacional 21201553Versión original del auto

Caracterización fotofísica de alquil amino derivados de fenalenona en medio homogéneo/ microheterogéneo y análisis de su eventual uso como sondas de membrana

En este trabajo se estudió el comportamiento fotofísico de tres potenciales sondas fluorescentes derivadas de la fenalenona con capacidad de generar oxígeno singulete y evaluar su eventual uso como sonda de membrana. Los estudios de caracterización fotofísica se realizaron en medios homogéneos (solventes) y microheterogéneos (sistemas micelares y vesículas lipídicas). La caracterización fotofísica consistió en la evaluación de propiedades espectroscópicas tales como absorción y emisión en los diferentes medios mencionados anteriormente utilizando espectroscopía UV-Vis y de fluorescencia, además se evaluaron rendimientos cuánticos de fluorescencia y de generación de oxígeno singulete en dos medios (acetonitrilo y metanol). Para evaluar los rendimientos cuánticos de fluorescencia se utilizó el método comparativo de las pendientes utilizando como actinómetro Rosa de Bengala para la 6DMAFN, posteriormente se utilizó la misma sonda 6DMAFN como actinómetro para evaluar el rendimiento cuántico de 6MOAFN y finalmente se utilizó 6MOAFN como actinómetro para evaluar el rendimiento cuántico de 6dodMAFN, en general los rendimientos son bajos. Con respecto a los rendimientos cuánticos de generación de oxígeno singulete, se utilizó el mismo método pero el actinómetro (fenalenona) fue común para las tres sondas, también se obtuvieron rendimientos bajos. En cuanto a los resultados obtenidos de la caracterización tanto en medio homogéneo como microheterogéneo, se observa que al ir aumentando el largo de cadena del alquil amino derivado de fenalenona la absorción y emisión experimentan un desplazamiento hipsocrómico en medios polares próticos y un desplazamiento batocrómico en medios apolares y polares apróticos, esto se debe a la interacción específica por puentes de hidrógeno entre el carbonilo de las sondas, con solventes próticos, afectando más la absorción que la emisión en los tres casos. Por otra parte, del estudio de fluidez en membranas se observa que a mayor largo de cadena, mayor inserción en la membrana, pero se pierde sensibilidad de la sonda, siendo 6MOAFN la sonda con el largo de cadena que presenta mayor sensibilidad a cambios en la fluidez de membranas, (comparado con Laurdan como sonda fluorescente de referencia).In this work, the photophysical behavior of three fluorescent probes derived from phenalenone with the capacity to generate singlet oxygen was studied and their eventual use as a membrane probe was evaluated. Photophysical characterization studies were performed in homogeneous (solvent) and microheterogeneous (micellar systems and lipid vesicles) media. The photophysical characterization consisted in the evaluation of spectroscopic properties such as absorption and emission in the different media mentioned above using UV-Vis and fluorescence spectroscopy, in addition to fluorescence quantum yields, singlet oxygen generation were also evaluated in two media (acetonitrile and methanol). To evaluate fluorescence quantum yields, the slopes comparative method by actinometry was used using Rose Bengal as actinometer for 6DMAFN, then the same 6DMAFN probe was used as actinometer to evaluate the quantum yield of 6MOAFN and finally 6MOAFN was used as actinometer to evaluate the quantum yield of 6dodMAFN, low quantum yields were obtained in the three cases. With respect to the quantum yields of singlet oxygen generation, the same method was used but the actinometer (phenalenone) was common for all three probes, low yields were also obtained. Regarding the results obtained from the characterization in both homogeneous and microheterogeneous media, it is observed that as the chain length of the alkyl amino phenalenone derivative increases, absorption and emission experience a hysochromic shift in protic polar media and a bathochromic displacement in apolar and aprotic polar media, this is due to specific interactions by hydrogen bonds between the carbonyl of the probes with protic solvents, affecting absorption more than emission in all three cases. On the other hand, from fluidity study in membranes it is observed that the longer the chain, the greater the insertion in membranes, but sensitivity of probe is lost, with 6MOAFN being the probe with the chain length that presents greater sensitivity to fluidity changes (compared to Laurdan as a referent fluorescent probe).Versión original del auto

El observatorio de compras públicas y sus competencias de control en la administración digital del Estado

El modelo actual de compras públicas fue diseñado con el objeto de evitar los problemas que aquejaban a la Dirección de Aprovisionamiento del Estado, estableciendo también un modelo de compras públicas electrónicas. La Dirección de Compras y Contratación Pública está diseñada de manera distinguible de su antecesora, una decisión premeditada del legislador. Así es diseñada bajo un modelo conceptual-institucional en que la Dirección es la mandataria de los Órganos Públicos, en nombre de quienes realizan los procedimientos necesarios para adquirir lo deseado. Sin embargo, el impulso progresista que llevó a establecer una plataforma en línea a través de la cual son realizadas estas compras dio pie a problemas únicos y de rápido desarrollo. La naturaleza de estos problemas fácticos que afronta la Dirección lleva a la creación, por parte de los funcionarios, de un Departamento de Observatorio y su gestión de reclamos o denuncias, dotada de facultades de control aparentemente ajenas a la legislación, pero necesarias y aceptadas por los particulares. Prima, ante todo, la búsqueda de una administración eficiente en una era de transformación electrónica, y aquello siempre fue la intención, la Dirección solo actúa como ha sido predeterminada a actuar. Pero ¿es suficiente dejar que los mismos funcionarios de la Administración realicen esta transformación electrónica? ¿Es eficiente o suficiente el modelo conceptual con el cual se encuentra diseñada la Dirección?Versión original del auto

Análisis del diseño de una matriz de riesgo de corrupción: el caso del municipio de Lo Barnechea

El presente trabajo tiene como objetivo analizar el diseño de la matriz de riesgo de corrupción utilizada por el Municipio de Lo Barnechea desde 2022 hasta la fecha. La selección de este no fue aleatoria, sino que responde a que este municipio presenta características relevantes para su estudio, como ser uno de los únicos dentro de la Región Metropolitana que cuenta con una matriz de riesgo de corrupción. Esta investigación adopta un enfoque cualitativo y se desarrolla como un estudio de caso, donde el instrumento seleccionado constituye la muestra del análisis. La recopilación de datos se llevó a cabo a través de la revisión de documentos obtenidos vía transparencia y la realización de entrevistas semiestructuradas. En total, se analizaron 25 documentos, entre oficios de transparencia, decretos alcaldicios, memorándums y documentos técnicos asociados a la matriz. En cuanto a las entrevistas, se realizaron 9 en total: cuatro dirigidas a funcionarios municipales y cinco a expertos en corrupción y gestión de riesgos, con el propósito de complementar y enriquecer el análisis. Asimismo, el presente estudio estructura sus resultados en torno a los tres objetivos específicos que son: (1) clasificar los motivos y contextos institucionales que llevaron al municipio a diseñar esta herramienta; (2) identificar las direcciones municipales más vulnerables a la corrupción según su matriz de riesgo; y (3) describir los factores que explican la vulnerabilidad de dichas direcciones. Los resultados de la investigación indican que las principales motivaciones del municipio para la implementación de esta herramienta fueron: (1) la prevención de daños reputacionales, (2) la mejora en la gestión interna y (3) el fortalecimiento de la buena gobernanza. En cuanto a los factores que permitieron su diseño, se identificaron dos elementos clave: (a) los recursos municipales, tanto financieros como humanos, y (b) la voluntad política, expresada en el compromiso del alcalde, el concejo municipal y los funcionarios. Respecto a las direcciones municipales identificadas en la matriz de riesgo, está considera un total de 16, siendo las más relevantes la Secretaría de Planificación Comunal (SECPLA), Compras Públicas, Desarrollo Comunitario (DIDECO), Tránsito y Transporte, y la Dirección de Obras Municipales (DOM). Finalmente, los factores que explican la vulnerabilidad de estas direcciones incluyen: (1) interacción con actores externos, (2) manejo de grandes volúmenes de recursos financieros, (3) discrecionalidad de las autoridades en la toma de decisiones, (4) concentración de poder y (5) deficiencias en los mecanismos de fiscalización. Abstract: This study aims to analyze the design of the corruption risk matrix used by the Municipality of Lo Barnechea. The selection of this municipality was not random; between March and May 2024, through active transparency, inquiries were made to the 52 municipalities of the Metropolitan Region regarding whether they had a risk matrix and, specifically, one focused on corruption. In this process, 15 municipalities reported having an institutional risk matrix, but only Lo Barnechea indicated having a specific corruption risk matrix, making it a relevant case study for examining this tool. This research adopts a qualitative approach and is conducted as a case study, with the Municipality of Lo Barnechea serving as the unit of analysis. Data collection was carried out through the review of 25 documents obtained via transparency requests and semi-structured interviews. In total, four municipal officials and five experts in corruption and risk management were interviewed to complement and enrich the analysis. The study is structured around three specific objectives: (1) to classify the institutional motives and contexts that led the municipality to design this tool; (2) to identify the municipal departments most vulnerable to corruption according to the risk matrix; and (3) to describe the factors that explain the vulnerability of these identified departments. The research findings indicate that the municipality's primary motivations for implementing this tool were: (1) preventing reputational damage, (2) improving internal management, and (3) strengthening good governance. Regarding the contextual factors that enabled its design, two key elements were identified: (a) municipal resources, both financial and human, and (b) political will, reflected in the commitment of the mayor, the municipal council, and municipal staff. Regarding the municipal departments identified in the risk matrix, a total of 16 were considered, with the most relevant being the Communal Planning Secretariat (SECPLA), Public Procurement, Community Development (DIDECO), Transit and Transport, and the Directorate of Municipal Works (DOM). Finally, the factors explaining the vulnerability of these departments include: (1) interaction with external actors, (2) management of large volumes of financial resources, (3) discretion of authorities in decision-making, (4) concentration of power, and (5) deficiencies in oversight mechanisms.Versión original del auto

Conservación del patrimonio arquitectónico de los sitios de memoria : análisis conceptual, normativo y metodológico

Versión original del autor30-06-202

Aplicaciones de aprendizaje reforzado y teoría de juegos en modelos de estrategias electorales

La teoría de juegos es un área de las matemáticas aplicadas cuyo principal propósito es analizar y modelar escenarios estratégicos en los que múltiples agentes o jugadores toman decisiones interdependientes. Un caso particular de ambiente competitivo es el de dos contendientes electorales enfrentándose en una elección, donde ambos buscan, en cada período de un horizonte finito y tomando decisiones simultáneamente, maximizar el desempeño de sus campañas antes de la elección. En este trabajo se emplean dos enfoques distintos para encontrar estrategias óptimas para los jugadores en dos escenarios competitivos: un modelo de juego por turnos con acciones simultáneas y el conocido juego del Coronel Blotto, ambos juegos de suma cero aplicados a un entorno electoral. Por un lado, se desarrolla un método analítico que permite calcular el equilibrio de Nash de manera exacta en el juego por turnos. Por otro, se implementa una técnica de aprendizaje por refuerzo, el algoritmo MinMax-Q Learning, que aproxima las estrategias óptimas a través de las interacciones del juego. Además, se analiza cómo varían las estrategias a medida que cambian los parámetros del juego y se exploran brevemente sus interpretaciones en un entorno electoral. También se lleva a cabo una discusión sobre los algoritmos actuales de aprendizaje profundo por refuerzo (DLR), analizando sus diferencias con nuestro enfoque y argumentando por qué no han tenido un buen rendimiento o por qué no son aplicables a nuestro contexto. Finalmente, se aplican los métodos con datos de encuestas de los Estados Unidos, a partir de los cuales se estiman los sesgos electorales de la población en cada estado. Se realizan experimentos en los que dos agentes compiten en dos diferentes sistemas electorales: el sistema mayoritario y el Colegio Electoral. Mediante una métrica específica, se concentra el análisis en los estados de mayor variabilidad electoral en Estados Unidos.Esta tesis ha sido parcialmente financiada por: Proyectos FONDECYT de Iniciación No 11241531.Versión original del auto

Diseño e implementación de un programa de verificación de prerrequisitos de inocuidad alimentaria según la Norma ISO/TS 22002-1:2009 en la Fábrica de Helados y Postres Refrigerados, Fábrica Macul, Nestlé Chile

En respuesta a la creciente importancia de la inocuidad alimentaria y la demanda sostenida de helados y postres refrigerados en Chile, Nestlé Macul ha concebido el Programa de Verificación de Prerrequisitos de Inocuidad. Aunque la planta ya implementa actividades donde se evalúan aspectos de calidad a modo general, se reconoce la necesidad de un enfoque estructurado para verificar prerrequisitos, cruciales para la calidad e inocuidad de los productos alimentarios. El objetivo principal es diseñar e implementar este programa, asegurando la aprobación del equipo directivo y la alineación con estándares internacionales. La metodología implica la colaboración de evaluadores del equipo de Aseguramiento de Calidad, abarcando todas las zonas de la planta de Macul. Herramientas de Microsoft Forms y Excel se emplearán para digitalizar y almacenar datos. Con una duración de 6 meses en total; 2 periodos de 3 meses para el cumplimiento de la verificación de los prerrequisitos, se garantiza la activa participación y controlada del personal, evaluando continuamente para identificar oportunidades de mejora y realizar ajustes que optimicen la eficacia del programa. En adición, se establecen objetivos específicos: diseñar el programa de verificación, ejecutar oficialmente el programa en el plazo establecido y evaluar la efectividad de la implementación, comparando los grados de cumplimiento de ambos periodos. Además, evaluar continuamente la ejecución, buscando cumplir con estándares organizacionales y adaptarse a dinámicas cambiantes. En la etapa Q1, el Programa de Verificación de Prerrequisitos de Inocuidad Alimentaria reveló que existían categorías que necesitaban una mejora en el cumplimiento de sus prerrequisitos, con un cumplimiento del 47%. En Q2, el cumplimiento mejoró gracias a planes de acción y capacitación, aunque persisten deficiencias en la gestión de materiales y zonas exteriores. Es crucial seguir fortaleciendo estrategias de control y prevención para garantizar la mejora continua y la Inocuidad alimentaria.Versión original del auto

Effect of agriculture on the chemical properties of the soils in viña Tarapacá, Región Metropolitana

Las labores agrícolas, como la aradura, la fertilización o el riego, modifican las propiedades químicas, físicas y biológicas del suelo. Este estudio evalúa la influencia de las prácticas agrícolas en las propiedades químicas del suelo, comparando suelos agrícolas con suelos con vegetación nativa en la Comuna de Isla de Maipo, Región Metropolitana. Se analizaron doce perfiles de suelo con profundidades entre 210 y 295 cm (promedio: 235 cm), con más de 30 años de riego, asociados a litologías ígneas y calcáreas. Se caracterizaron propiedades químicas (pH, carbonatos materia orgánica del suelo [MOS] y cationes intercambiables y físicas (densidad aparente, densidad real, curva característica de retención de agua y porosidad total) por horizonte pedogenético, analizando su distribución en profundidad en relación con el sitio control (vegetación nativa). Los resultados mostraron que los suelos agrícolas presentan mayores concentraciones de (2-14 %), un pH más elevado (7,5-8,5) y un incremento en cationes no ácidos (160-285 cmol ( ) en comparación con suelos no agrícolas ( 0,09 %; pH: 5,4-7,0; cationes: 45- 244 cmol Estas diferencias se atribuyen al riego prolongado, las prácticas de fertilización y la variabilidad litológica entre los sitios estudiados. La acumulación de carbono inorgánico y las modificaciones en las propiedades del suelo sugieren un impacto en el secuestro de carbono, resaltando el papel de las actividades agrícolas en la dinámica del suelo y del carbono.Agricultural practices such as plowing, fertilization, and irrigation modify the chemical, physical, and biological properties of the soil. This study evaluates the influence of agricultural practices on soil chemical properties by comparing agricultural against soils with native vegetation in the Isla de Maipo Commune, Metropolitan Region. Twelve soil profiles with depths ranging from 210 to 295 cm (average: 235 cm) were analyzed, all with more than 30 years of irrigation and associated with igneous and calcareous lithologies. Chemical properties (pH, carbonates soil organic matter [SOM], and exchangeable cations and physical properties (bulk density, particle density, water retention characteristic curve, and total porosity) were characterized by pedogenic horizon, analyzing their distribution in depth compared to control site. The results showed that agricultural soils had higher concentrations (2-14%), a higher pH (7.5-8.5), and an increase in nonacidic cations (160-285 compared to non-agricultural soils ( 0.09%; pH: 5.4-7.0; cations: 45-244 These differences are attributed to prolonged irrigation, fertilization practices, and lithological variability among the studied sites. The accumulation of inorganic carbon and modifications in soil properties suggest an impact on carbon sequestration, highlighting the role of agricultural activities in soil and carbon dynamics.Versión original del auto

Obtención y nano encapsulación de biopeptidos antioxidantes de quenopodina, evaluación de desempeño del sistema nanoencapsulado en medio colónico simulado y su viabilidad celular

Fondos grupo de investigación Matrices Biopoliméricas de liberación controlada en sistemas farmacéuticos y alimentarios cargados con bioactivos nano y microencapsulados. Departamento de Ciencia de los Alimentos y Tecnología Química. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de ChileVersión original del auto