Use of thermolytic protective groups to prevent G-tetrad formation in CpG ODN type D: structural studies and immunomodulatory activity in primates

CpG oligodeoxynucleotides (ODN) show promise as immunoprotective agents and vaccine adjuvants. CpG ODN type D were shown to improve clinical outcome in rhesus macaques challenged with Leishmania major. These ODN have a self-complementary core sequence and a 3′ end poly(G) track that favors G-tetrad formation leading to multimerization. Although multimerization appears necessary for localization to early endosomes and signaling via Toll-like receptor 9 (TLR-9), it can result in product polymorphisms, aggregation and precipitation, thereby hampering their clinical applications. This study shows that functionalizing the poly(G) track of D ODN with thermolytic 2-(N-formyl-N-methyl)aminoethyl (fma) phosphate/thiophosphate protecting groups (pro-D ODN) reduces G-tetrad formation in solution, while allowing tetrad formation inside the cell where the potassium concentration is higher. Temperature-dependent cleavage of the fma groups over time further promoted formation of stable G-tetrads. Peripheral blood cells internalized pro-D ODN efficiently, inducing high levels of IFNα, IL-6, IFNγ and IP-10 and triggering dendritic cell maturation. Administration of pro-D35 to macaques challenged with L.major significantly increased the number of antigen-specific IFNγ-secreting PBMC and reduced the severity of the skin lesions demonstrating immunoprotective activity of pro-D ODN in vivo. This technology fosters the development of more efficient immunotherapeutic oligonucleotide formulations for the treatment of allergies, cancer and infectious diseases

An amphipathic trans-acting phosphorothioate RNA element delivers an uncharged phosphorodiamidate morpholino sequence in mdx mouse myotube

An efficient method for the delivery of uncharged polyA-tailed phosphorodiamidate morpholino sequences (PMO) in mammalian cells consists of employing a synthetic 8-mer amphipathic trans-acting poly-2′-O-methyluridylic thiophosphate triester element (2′-OMeUtaPS) as a transfection reagent. Unlike the dTtaPS DNA-based element, this RNA element is potent at delivering polyA-tailed PMO sequences to HeLa pLuc 705 cells or to myotube muscle cells. However, much like dTtaPS, the 2′-OMeUtaPS-mediated internalization of PMO sequences occurs through an energy-dependent mechanism; macropinocytosis appears to be the predominant endocytic pathway used for cellular uptake. The transfected PMO sequences induce alternate splicing of either the pre-mRNA encoding luciferase in HeLa pLuc 705 cells or the excision of exon 23 from the pre-mRNA encoding dystrophin in myotube muscle cells of the mdx mouse model of muscular dystrophy with an efficiency comparable to that of commercial cationic lipid reagents but without detrimental cytotoxicity

Intelligence Assessment. Current Tendencies and Some Questions

Los últimos 50 años han sido testigo de múltiples aportes teóricos y fuertes contro-versias respecto de la estructura, naturaleza, y rasgos básicos del concepto de inteligencia. También han dado lugar a la aparición de nuevas técnicas de evaluación cognitiva basadas en los aportes de estas teorías. En un mercado competitivo, que tiende a la globalización, se observan actualmente dos tendencias disímiles: la actualización y ampliación de los tests tradicionales vs. el énfasis en la integración intertest, jerarquizando sub-tests pertenecientes a pruebas diversas. A su vez, en respuesta a la creciente demanda de evaluación multicultural, también predominan dos tendencias: la traducción y adaptación de los tests existentes, vs. la creación de nuevas técnicas de índole no-verbal. Se incluyen algunas sugerencias para la integración clínica de estos aportes en la práctica del quehacer profesional. The past 50 years have produced multiple advances, as well as strong controversies, regarding the structure, nature, and basic traits of the concept of intelligence. They also originated a number of new cognitive tests based on these theories. In a very competitive market, that tries to go global, two dissimilar tendencies can be presently observed: traditional tests are updated and made more comprehensive, vs. emphasis is placed on cross battery sub-test integration. Similarly, in response to the increasing demand for multicultural assessments, two tendencies predominate: the translation and adaptation of existing tests, vs. the creation of new non- verbal instruments. Some suggestions on how to integrate these varios contributions into the clinical practice are included.

El dibujo infantil, algunas aproximaciones téoricas

Mucho antes de ser usados los dibujos como tests de inteligencia o técnicas proyectivas han sido un modo de expresión natural y primario del niño. Apenas se descubre o se le facilita la conducta gráfica, el niño encuentra un enorme placer en garabatear, siguiendo a esta etapa otras que ustedes habrán visto en Evolutiva y que no entraremos a detallar, ya que están en parte, además, cubiertas por la bibliografía. Diferentes autores desde distintas teorías han hecho aportes a la comprensión del dibujo infantil en cuanto a su motivación, significado y características. Todos, sin embargo, están de acuerdo en que para el niño es un modo de expresión tan importante como lo es la palabra para el adulto y que en el dibujo cenestésico, el goce de registrar el movimiento dará lugar gradualmente a la mayor satisfacción de crear una forma representativa. En el niño, juego y dibujo, están muy unidos; dibujar es una actividad lúdica y cuando nosotros le ofrecemos material para una hora de juego incluimos elementos para dibujar.Departamento de Psicologí

El dibujo infantil, algunas aproximaciones téoricas

Mucho antes de ser usados los dibujos como tests de inteligencia o técnicas proyectivas han sido un modo de expresión natural y primario del niño. Apenas se descubre o se le facilita la conducta gráfica, el niño encuentra un enorme placer en garabatear, siguiendo a esta etapa otras que ustedes habrán visto en Evolutiva y que no entraremos a detallar, ya que están en parte, además, cubiertas por la bibliografía. Diferentes autores desde distintas teorías han hecho aportes a la comprensión del dibujo infantil en cuanto a su motivación, significado y características. Todos, sin embargo, están de acuerdo en que para el niño es un modo de expresión tan importante como lo es la palabra para el adulto y que en el dibujo cenestésico, el goce de registrar el movimiento dará lugar gradualmente a la mayor satisfacción de crear una forma representativa. En el niño, juego y dibujo, están muy unidos; dibujar es una actividad lúdica y cuando nosotros le ofrecemos material para una hora de juego incluimos elementos para dibujar.Departamento de Psicologí

El dibujo infantil, algunas aproximaciones téoricas

Mucho antes de ser usados los dibujos como tests de inteligencia o técnicas proyectivas han sido un modo de expresión natural y primario del niño. Apenas se descubre o se le facilita la conducta gráfica, el niño encuentra un enorme placer en garabatear, siguiendo a esta etapa otras que ustedes habrán visto en Evolutiva y que no entraremos a detallar, ya que están en parte, además, cubiertas por la bibliografía. Diferentes autores desde distintas teorías han hecho aportes a la comprensión del dibujo infantil en cuanto a su motivación, significado y características. Todos, sin embargo, están de acuerdo en que para el niño es un modo de expresión tan importante como lo es la palabra para el adulto y que en el dibujo cenestésico, el goce de registrar el movimiento dará lugar gradualmente a la mayor satisfacción de crear una forma representativa. En el niño, juego y dibujo, están muy unidos; dibujar es una actividad lúdica y cuando nosotros le ofrecemos material para una hora de juego incluimos elementos para dibujar.Departamento de Psicologí

Thermolytic CpG-containing DNA oligonucleotides as potential immunotherapeutic prodrugs

A CpG-containing DNA oligonucleotide functionalized with the 2-(N-formyl-N-methyl)aminoethyl thiophosphate protecting group (CpG ODN fma1555) was prepared from phosphoramidites 1a–d using solid-phase techniques. The oligonucleotide behaved as a prodrug by virtue of its conversion to the well-studied immunomodulatory CpG ODN 1555 through thermolytic cleavage of the 2-(N-formyl-N-methyl)aminoethyl thiophosphate protecting group. Such a conversion occurred at 37°C with a half-time of 73 h. The immunostimulatory properties of CpG ODN fma1555 were evaluated in two in vivo assays, one of which consisted of mice challenged in the ear with live Leishmania major metacyclic promastigotes. Local intradermal administration of CpG ODN fma1555 was as effective as that of CpG ODN 1555 in reducing the size of Leishmania lesions over time. In a different infectious model, CpG ODN 1555 prevented the death of Tacaribe-infected mice (43% survival) when administered between day 0 and 3 post infection. Administration of CpG ODN fma1555 three days before infection resulted in improved immunoprotection (60–70% survival). Moreover, co-administration of CpG ODN fma1555 and CpG ODN 1555 in this model increased the window for therapeutic treatment against Tacaribe virus infection, and thus supports the use of thermolytic oligonucleotides as prodrugs in the effective treatment of infectious diseases

Trace Levels of Innate Immune Response Modulating Impurities (IIRMIs) Synergize to Break Tolerance to Therapeutic Proteins

Therapeutic proteins such as monoclonal antibodies, replacement enzymes and toxins have significantly improved the therapeutic options for multiple diseases, including cancer and inflammatory diseases as well as enzyme deficiencies and inborn errors of metabolism. However, immune responses to these products are frequent and can seriously impact their safety and efficacy. Of the many factors that can impact protein immunogenicity, this study focuses on the role of innate immune response modulating impurities (IIRMIs) that could be present despite product purification and whether these impurities can synergize to facilitate an immunogenic response to therapeutic proteins. Using lipopolysaccharide (LPS) and CpG ODN as IIRMIs we showed that trace levels of these impurities synergized to induce IgM, IFNγ, TNFα and IL-6 expression. In vivo, trace levels of these impurities synergized to increase antigen-specific IgG antibodies to ovalbumin. Further, whereas mice treated with human erythropoietin showed a transient increase in hematocrit, those that received human erythropoietin containing low levels of IIRMIs had reduced response to erythropoietin after the 1st dose and developed long-lasting anemia following subsequent doses. This suggests that the presence of IIRMIs facilitated a breach in tolerance to the endogenous mouse erythropoietin. Overall, these studies indicate that the risk of enhancing immunogenicity should be considered when establishing acceptance limits of IIRMIs for therapeutic proteins