Etude de l' a-amylase de lactobacillus fermentum : purification, caractérisation et propriétés. Comparaison avec les a-amylases de Lb. plantarum et Lb. manihotivorans

Une nouvelle a-amylase de Lb. fermentum (FERMENTA) obtenue par fermentation à partir de céréales a été purifiée, étudiée au niveau structural et fonctionnel et comparée avec deux autres a-amylases de Lb. plantarum (PLANTAA) et de Lb. manihotivorans (MANIHOA). Les trois a-amylases présentent une masse moléculaire voisinant les 100 kDa et des pI du même ordre de grandeur (3,5+-0,3). Comme PLANTAA et MANIHOA, la structure de FERMENTA contient des séquences répétées en C-terminal. Les propriétés physico-chimiques (pH 5 et température 40ʿC) ont été déterminées et l'étude cinétique avec l'amylose pour substrat et l'acarbose pour inhibiteur a été effectuée. L'inhibition non-compétitive mixte pour FERMENTA (K1i = 5,3 æM et L1i = 1,7 æM) et incompétitive pour PLANTAA et MANIHOA révèlent que l'acarbose est un puissant inhibiteur pour ces trois a-amylases. Ces études cinétiques montrent l'existence d'un site secondaire de fixation des carbohydrates distinct du site actif et nécessaire pour l'hydrolyse des substrats longs.AIX-MARSEILLE3-BU Sc.St Jérô (130552102) / SudocSudocFranceF

Mycotoxines et pisciculture : un risque oublié ?

Les mycotoxines, produites par divers mycètes ou champignons des genres Aspergillus, Fusarium et Penicillium, peuvent contaminer facilement les céréales, leurs sous-produits et les produits d'origine végétale et animale qui entrent dans la composition des aliments industriels ou de fabrication artisanale destinés à la pisciculture. Les plus communes sont les aflatoxines, l'ochratoxine A, la zéaralènone et les trichothécènes. Cependant, les informations sur l'impact des mycotoxicoses sont assez rares et la plupart des informations proviennent d'études expérimentales. Les effets toxicologiques chez les poissons dépendent du type de mycotoxine et de la relation dose-exposition à laquelle les poissons sont soumis. Dans les intoxications subchroniques, on observe généralement un arrêt de croissance, des altérations de l'état général, des atteintes d'organes spécifiques impliquant notamment le foie, une immunosuppression combinée à une sensibilité accrue aux agents pathogènes opportunistes et, pour les aflatoxines, une incidence élevée des tumeurs hépatiques. Toutefois, des variations importantes de la toxicité sont liées à divers facteurs, en particulier l'espèce et l'âge du poisson. Cet article propose une synthèse des problèmes liés aux mycotoxines en pisciculture et les actions à entreprendre afin de réduire leur effets, en mettant l'accent sur l'aspect multifactoriel de ces contaminations

Rapid and sensitive liquid chromatographic method using a conductivity detector for the determination of phytic acid in food

An LC method was developed for the determination of phytic acid in food. The separation was carried out by gradient elution on an anion-exchange column using a conductivity detector. Earlier reversed-phase LC procedures for the quantitation of phytic acid usually required a prepurification step. The prepurification can be avoided by the separation method described in this paper. The method is sensitive and selective, and can be rapidly and easily performed. It is therefore suitable for routine determination. (Résumé d'auteur

The mechanism of action of alpha-amylase from Lactobacillus fermentum on maltooligosaccharides

The action pattern of Lactobacillus fermentum alpha-amylase (FERMENTA) was examined using a series of maltooligosaccharides (G2-G7) as substrates. Structurally, this enzyme has a molecular mass (106 kDa) almost twofold higher than alpha-amylases from mammalians and cereals. The product pattern was investigated through an analysis of products and substrates using HPAEC with pulsed amperometric detection. FERMENTA was consistent with an endo-type of amylase. The bond cleavage frequencies were studied using maltooligosaccharides of various chain lengths as substrate, i.e. maltose up to maltoheptaose and DP 4900-amylose catalyzed by FERMENTA. The catalytic efficiency (k(cat)/K-m) increased with chain length from maltose (8.7 x 10(4)M (-1)s(-1)) up to amylose (1 x 10(9) M(-1)s(-1)). These action pattern results revealed that FERMENTA can readily cleave the third linkage from the reducing end of the maltooligosaccharides (G5-G7). (c) 2006 Elsevier B.V. All rights reserved

Secondary metabolite localization by autofluorescence in living plant cells.

International audienceAutofluorescent molecules are abundant in plant cells and spectral images offer means for analyzing their spectra, yielding information on their accumulation and function. Based on their fluorescence characteristics, an imaging approach using multiphoton microscopy was designed to assess localization of the endogenous fluorophores in living plant cells. This method, which requires no previous treatment, provides an effective experimental tool for discriminating between multiple naturally-occurring fluorophores in living-tissues. Combined with advanced Linear Unmixing, the spectral analysis extends the possibilities and enables the simultaneous detection of fluorescent molecules reliably separating overlapping emission spectra. However, as with any technology, the possibility for artifactual results does exist. This methodological article presents an overview of the applications of tissular and intra-cellular localization of these intrinsic fluorophores in leaves and fruits (here for coffee and vanilla). This method will provide new opportunities for studying cellular environments and the behavior of endogenous fluorophores in the intracellular environment

Isolation of C-glycosyl xanthones from Coffea pseudozanguebariae and their location

The biochemical composition of leaves from Coffea pseudozanguebariae, a wild caffeine-free coffee species, was determined. Two phenolic compounds were extracted from leaves, separated and characterized. Their structures were elucidated by mass spectrometry, and 1D and 2D NMR spectroscopy and were shown to be mangiferin (1) and isomangiferin (2), which were the main polyphenol products. Multiphoton fluorescence imaging was performed to visualize polyphenol distribution in leaf cross sections. Consistent biochemical analysis cell imaging techniques on leaves revealed yellow fluorescence in the epidermis and parenchyma cells corresponding to xanthone compounds

Technical handbook of domestication and production of Diptera Black Soldier Fly (BSF), Hermetia illucens, Stratiomyidae

Ce manuel technique a pour objectif de fournir les indications nécessaires pour la domestication et le développement de la production de l’insecte Hermetia illucens. Connu également sous le nom de Black Soldier Fly (BSF) ce diptère cosmopolite, appartenant à la famille des Stratiomyidae, est un non nuisible. Saprophage au stade larvaire il est capable de biodégrader des substrats ou des déchets organiques divers. Depuis quelques années, la valorisation des sous-produits agroalimentaire et le recyclage des déchets urbains sont devenus incontournables et le potentiel des larves de BSF dans ce domaine n’a pas échappé à de nombreux chercheurs. Les larves sont capables de traiter et de réduire les masses de déchets organiques et leur action diminue aussi significativement les odeurs provenant des matières en décomposition. Ces expériences ont été en grande partie réalisées grâce à la création d’un pilote d’élevage semi-industriel réalisé en Indonesie en étroite collaboration avec les scientifiques Indonésiens qui n’a pas d’égal dans le monde et qui a permis d’investiguer à la fois sur la production des géniteurs, des oeufs et des larves destinées à l’alimentation animale et notamment les poissons. Outre les méthodes de production du BSF, ce guide rappelle les travaux réalisés par les différentes équipes impliquées dans le projet et qui ont investigué les potentialités et les limites de l’utilisation des larves de BSF pour l’alimentation des poissons en aquaculture tropicale. Une analyse économique approfondie met en exergue les points forts et les points faibles du pilote et fournit des éléments de jugement pour le futur entrepreneur. Ce manuel technique Il a l’ambition de proposer au lecteur une méthode de domestication et de production du BSF, mais aussi de partager le savoir acquis dans le cadre du projet Bioconversion. Nous espérons que cet ouvrage puisse motiver et aider les lecteurs à devenir des acteurs de celle qui sera indirectement et peut-être aussi directement une nouvelle ressource alimentaire pour l’humanité : les insectes

Spectral analysis combined with advanced linear unmixing allows for histolocalization of phenolics in leaves of coffee trees

An imaging method using spectral analysis combined with advanced linear unmixing was used to allow histolocalization of natural autofluorescent compounds such as hydroxycinnamic acid (chlorogenic acid) and xanthone (mangiferin) in living cells and tissues (mature coffee leaves). The tested method included three complementary steps: 1/ visualization of natural autofluorescence and spectrum acquisition with a multiphoton microscope; 2/ identification of some compounds using previous information on the chemical composition of the tissue, obtained from litterature; and 3/ localization of candidate compounds by spectral imaging. The second part of the study consisted of describing the histochemical structure of leaves during their development. This revealed very fast histochemical differentiation of leaves during the first week after their emergence. Lastly, young leaves of Coffea pseudozanguebariae (PSE), C. eugenioides (EUG), C. arabica (ARA) and C. canephora (CAN) were compared. This confirmed the presence of xanthone in PSE and EUG, but especially its precise tissue localization. This also highlighted the paternal CAN origin of the leaf structure in the allotetraploid species ARA. The limits and advantages of the method without staining are discussed relative to classical epifluorescence microscopy under UV light. This non-invasive optical technique does not require pretreatment and is an effective experimental tool to differentiate multiple naturally-occuring fluorochores in living tissues

Partial purification and characterization of alpha-amylases from Abrus precatorius, Burnatia enneandra and Cadaba farinosa

Leaves of Abrus precatorius, tubers of Burnatia enneandra and stems of Cadaba farinosa are used in savannah regions of Cameroon in traditional food processing, particularly in sweetening and liquefaction of gruels. α-amylase was extracted and partially purified from these plants using conventional methods of protein purification including ammonium sulfate fractionation and two steps of gel filtration. Purification achieved 58, 61 and 46 fold respectively for A. precatorius, B. enneandra and C. farinosa. The purified enzymes were then characterized in terms of molecular weight, optimum pH and stability, optimum temperature and stability, Km, Vmax and metals ions effects. The optimum pH of enzymes varied from 6.0 for amylases from B. enneandra and C. farinosa, to 7.0 for amylase from A. precatorius; while the optimum temperature was 60°C for amylases from A. precatorius and B. enneandra, and 65°c for amylase from C. farinosa. The three enzymes displayed, respectively for A. precatorius, B enneandra and C farinosa, a molecular weight of 60, 65 and 48.5 kDa, Km for hydrolyzing soluble starch of 3.25, 1.81 and 3.18 mg/ml, and strong individual activation by Ca2+, Co2+ and Fe3+. Li2+ appeared as a common activator for all the amylases, while Ag+, Hg2 +, Zn2+ and Cu2+ act as common inhibitors