Ectoparasitos e patógenos vetoriais emergentes (Bartonella spp., Rickettsia spp. e Mycoplasma spp.) em felídeos neotropicais

Agentes patogênicos emergentes e reemergentes podem causar zoonoses e, além disso, muitas destas são doenças vetoriais consideradas negligenciadas. Os carnívoros silvestres podem atuar como potenciais reservatórios desses agentes. Neste contexto, destacam-se como doenças emergentes a bartonelose, a rickettsiose e a micoplasmose. Apesar dos estudos sobre estes patógenos em cães e gatos domésticos e em algumas espécies de animais silvestres, há pouco conhecimento sobre a ocorrência destas enfermidades em felídeos neotropicais. O objetivo geral desta tese foi pesquisar a ocorrência de ectoparasitos e patógenos emergentes (Bartonella spp., Rickettsia spp. e Mycoplasma spp.) em felídeos neotropicais de vida livre no Rio Grande do Sul (RS), Brasil. Foram colhidas amostras de sangue e ectoparasitos de felídeos silvestres de vida livre. As amostras foram oriundas de animais capturados no ambiente, alojados em centros de reabilitação e em carcaças encontradas em rodovias no RS. Todos os animais amostrados neste estudo estavam clinicamente saudáveis. No 1º capítulo desta tese foi realizada pesquisa molecular e sorológica de Bartonella spp. em amostras de duas espécies de felídeos (Leopardus geoffroyi e Leopardus wiedii). Foram coletadas 53 amostras de sangue felinos silvestres de vida livre (39 L. geoffroyi e 14 L. wiedii). Duas amostras de sangue de L. geoffroyi foram positivas para a presença de DNA de Bartonella henselae. Em teste de imunofluorescência indireta (IFI) para detecção de anticorpos IgG, 28% das amostras de soro de felídeos silvestres foram reativas (soropositivas) para B. henselae, com títulos variando de 64 a 256. Já no 2º capítulo investigou-se os ectoparasitos e a presença de agentes infecciosos nos mesmos. Foi encontrado um total de 82 carrapatos, 10 pulgas e 22 ácaros coletados em L. geoffroyi, L. wiedii, Leopardus guttulus, Herpailurus yagouaroundi, Leopardus pardalis e Puma concolor. Foram identificadas quatro espécies de carrapatos: Rhipicephalus microplus, Amblyomma aureolatum, Amblyomma dubitatum e Amblyomma longirostre, sendo a mais frequente A. aureolatum; três espécies de pulgas (Ctenocephalides felis, Xenopsylla cheopis e Pulex irritans) e um ácaro do gênero Eutrombicula. Ainda, foi detectado DNA de Rickettsia parkeri e Rickettsia asembonensis em carrapatos e DNA de Bartonella clarridgeiae, Bartonella sp. e R. asembonensis em pulgas. Por fim, no 3º capítulo demonstrou-se a presença de três espécies de Mycoplasma nos felídeos silvestres. A pesquisa molecular para Mycoplasma spp. foi realizada em 63 amostras de sangue de felídeos silvestres, sendo 44 amostras de L. geoffroyi e 19 amostras de L. wiedii. Um total de 28/63 (44%) das amostras foram positivas para Mycoplasma spp., destas 19 L. geoffroyi e 9 L. wiedii. Onze (17%) amostras apresentaram coinfecção de “Candidatus Mycoplasma haemominutum” (CMhm) e Mycoplasma haemofelis (Mhf), três (4,7%) de “Candidatus Mycoplasma turicensi” (CMt) e Mhf, uma (1,5%) de CMhm e CMt, e uma (1,5%) de Mhf, CMhm e CMt. Os resultados apresentados aqui fornecem as primeiras evidências de um ciclo enzoótico de Bartonella spp., Rickettsia spp. e hemoplasmas em L. geoffroyi e L. wiedii, que, por sua vez, podem ser responsáveis pela manutenção e dispersão destes patógenos zoonóticos no sul do Brasil. Destaca-se também a presença de artrópodes vetores em felídeos silvestres, e seu potencial de ampla distribuição no bioma Pampa e na porção mais meridional da Mata Atlântica no Brasil. Os dados ampliam o conhecimento e a área de distribuição na América do Sul de ectoparasitos e patógenos transmitidos por vetores de interesse veterinário e de saúde pública.Emerging and reemerging pathogens can cause zoonosis, and, in addition, many of these are neglected vector-borne diseases. Wild carnivores may act as potential reservoirs for these agents. In this context, bartonellosis, rickettsiosis and mycoplasmosis stand out as emerging diseases. Despite there are some studies on these pathogens in domestic dogs and cats and even in few wild species, there is a paucity of knowledge about these diseases in neotropical felids. The aim of this thesis was to investigate the occurrence of ectoparasites and emerging pathogens (Bartonella spp., Rickettsia spp. and Mycoplasma spp.) in free-living neotropical felids in Rio Grande do Sul (RS), Brazil. Blood samples and ectoparasites were collected from free-ranging wild felids. The samples were obtained from live-trap animals captured in the natural environment, from felids located in wildlife rehabilitation centers, and from carcasses found in roads from RS state. All animals sampled in this study were clinically healthy. In the 1st chapter of this thesis it was performed the molecular and serological investigation of Bartonella spp. in samples from two felid species (Leopardus geoffroyi and Leopardus wiedii). Fifty three samples of free-ranging felids (39 L. geoffroyi and 14 L. wiedii) were collected. Two blood samples of L. geoffroyi were positive for the presence of B. henselae DNA. Using indirect immunofluorescence assay (IFA) for the detection of antibodies IgG, 28% of the serum samples from wild felids were reactive (seropositive) for B. henselae, with titers ranging from 64 to 256. On the 2nd chapter it was investigated the ectoparasites and the presence of infectious agents in these vectors. It was found a total of 82 ticks, 10 fleas and 22 mites were collected from L. geoffroyi, L. wiedii, Leopardus guttulus, Herpailurus yagouaroundi, Leopardus pardalis and Puma concolor. We identified four tick species: Rhipicephalus microplus, Amblyomma aureolatum, Amblyomma dubitatum e Amblyomma longirostre, the most frequent being A. aureolatum; three species of fleas (Ctenocephalides felis, Xenopsylla cheopis and Pulex irritans) and one genus of mite (Eutrombicula). DNA from Rickettsia parkeri and Rickettsia asembonensis were detected in ticks and DNA from Bartonella clarridgeiae, Bartonella sp. and R. asembonensis in fleas. At last, on the 3rd chapter it was demonstred the presence of three species of Mycoplasma spp. in wild felids. Molecular search for Mycoplasma spp. were performed on 63 blood samples from wild felids, with 44 samples from L. geoffroyi and 19 samples from L. wiedii. A total of 28/63 (44%) of the samples were positive for Mycoplasma spp. (19 L. geoffroyi and 9 L. wiedii). Eleven (17.5%) samples presented “Candidatus Mycoplasma haemominutum” (CMhm) e Mycoplasma haemofelis (Mhf) co-infection, three (4.7%) “Candidatus Mycoplasma turicensis” (CMt) and Mhf, one (1.5%) of CMhm and CMt, and one (1.5%) of Mhf, CMhm and CMt. The results presented here provide the first evidences of an enzootic cycle of Bartonella, Rickettsia and hemoplasmas on L. geoffroyi and L. wiedii, which, in turn, may be responsible for the maintenance and dispersion of these emerging zoonotic pathogens the south of Brazil. It is noteworthy the presence of arthropod vectors in wild felids, and their potential of wide distribution in the Pampa biome and in the southernmost portion of the Atlantic Rainforest in Brazil. The set of results presented here improves the knowledge and extends the distribution area in South America of ectoparasites and vector-borne pathogens of veterinary and public health interest

Primeira detecção molecular de Mycoplasma ovis (Micoplasmas Hemotrópicos) em ovinos no Brasil

Mycoplasma ovis is an emerging zoonotic pathogen with a worldwide distribution and can cause mild to severe hemolytic anemia, icterus, and poor weight gain in animals. Although M. ovis has been described in small ruminants worldwide, data on M. ovis in sheep in Brazil is unknown. The objective of the present study was to present the first report of hemotropic mycoplasma (HM) in sheep from Brazil. We evaluated factors associated with this infection, such age group, tick presence, and anemia. Blood samples were collected from 33 sheep from a farm in southern Brazil and screened for hemoplasmas using PCR. Out of 33 samples, 26 (78.8%) tested positive for M. ovis. The sequencing of positive samples showed 100% identity with multiple M. ovis 16S rDNA sequences. No association was observed between the presence of M. ovis and the FAMACHA© score (p = 0.620). Rhipicephalus (Boophilus) microplus (15/33, 45.4%) was the tick species found on the animals. No significant association between M. ovis infection and presence of ticks (p = 0.4134) and age group (p = 0.4221) was observed. This is the first report of M. ovis infection in sheep from Brazil and only the second report of this pathogen in sheep in Latin America.Mycoplasma ovis é um patógeno zoonótico emergente com distribuição mundial e pode causar anemia hemolítica de leve a grave, icterícia e baixo ganho de peso em animais. Embora M. ovis tenha sido descrito em pequenos ruminantes em todo o mundo, os dados sobre M. ovis em ovinos no Brasil são desconhecidos. O objetivo deste estudo foi apresentar o primeiro relato de micoplasmas hemotrópicos em ovinos no Brasil. Avaliamos os fatores associados a essa infecção, como faixa etária, presença de carrapatos e anemia. Amostras de sangue foram coletadas de 33 ovelhas de uma fazenda no sul do Brasil e testadas para hemoplasmas usando a PCR. Das 33 amostras, 26 (78,8%) apresentaram resultado positivo. O sequenciamento das amostras positivas mostrou 100% de identidade com múltiplas sequências de M. ovis 16S rDNA. Não foi observada associação entre a presença de M. ovis e o escore FAMACHA© (p = 0,620). Rhipicephalus (Boophilus) microplus (15/33, 45,4%) foi a espécie de carrapato encontrada nos animais. Não houve associação significativa entre infecção por M. ovis e presença de carrapatos (p = 0,4134) e faixa etária (p = 0,4221). Este é o primeiro relato de infecção por M. ovis em ovinos no Brasil e o segundo relato deste patógeno em ovinos na América Latina

Levantamento molecular de micoplasma hemotrópico em mão-pelada (Procyon cancrivorus) do sul do Brasil

Hemoplasmas are non-cultivable bacterial parasites of erythrocytes that infect domestic and wild animals, as well as humans. Their means of transmission and pathogenesis remain contentious issues and difficult to evaluate in wild animals. Procyon cancrivorus is a South American carnivore and occurs in all Brazilian biomes. In this study, we aimed to investigate occurrences of hemoplasmas infecting P. cancrivorus and to identify their 16S rRNA gene, in southern Brazil. DNA was extracted from spleen and blood samples of P. cancrivorus (n = 9) from different locations. Hemoplasma DNA was detected in six samples, based on 16S rRNA gene amplification and phylogenetic analysis. Four of the six sequences belonged to the “Mycoplasma haemofelis group”, which is closely related to genotypes detected in Procyon lotor from the USA; one was within the “Mycoplasma suis group”, closely related to “Candidatus Mycoplasma haemominutum”; and one was within the intermediate group between these clusters. Thus, these sequences showed that the molecular identity of hemoplasmas in the population studied was very variable. In five positive animals, Amblyomma aureolatum ticks and a flea (Ctenocephalides felis felis) were collected. The present study describes the first molecular detection of mycoplasmas in P. cancrivorus.Os micoplasmas hemotrópicos (hemoplasmas) são parasitas bacterianos não-cultiváveis de eritrócitos que infectam tanto animais domésticos e selvagens, como seres humanos. A transmissão e a patogênese são discutíveis e difíceis de avaliar em animais selvagens. O mão pelada (Procyon cancrivorus) é um carnívoro Sul-americano, que ocorre em todos os biomas brasileiros. O objetivo do presente estudo é o de investigar a ocorrência de hemoplasmas infectando P. cancrivorus e identificar seu gene 16S rRNA no Sul do Brasil. O DNA foi extraído do baço e amostras de sangue de P. cancrivorus (n= 9). O DNA de hemoplasma foi detectado em seis amostras, com base na amplificação do gene 16S rRNA e na análise filogenética. Quatro das seis sequências pertencem ao “Grupo Mycoplasma haemofelis”, que estão intimamente relacionadas aos genótipos detectados no Procyon lotor dos EUA; uma dentro do “Grupo Mycoplasma suis”, que está intimamente relacionado ao “Candidatus Mycoplasma haemominutum”, e uma dentro do grupo intermediário entre esses clusters, mostrando assim que há uma diversidade genética de hemoplasmas na população estudada. Em cinco animais positivos, foram coletados carrapatos Amblyomma aureolatum e uma pulga Ctenocephalides felis. O presente estudo traz a primeira detecção molecular de micoplasmas em P. cancrivorus

Serosurvey of West Nile virus (WNV) in free-ranging raptors from Brazil

Fil: Morel, Ana Paula. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Webster, Anelise. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Zitelli, Larissa Calo. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Umeno, Karen. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Souza, Ugo Araújo. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Prusch, Fabiane. Clinica Veterinária Toca dos Bichos, Porto Alegre, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Anicet, Marina. Clinica Veterinária Toca dos Bichos, Porto Alegre, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Marsicano, Gleide. Clinica Veterinária Toca dos Bichos, Porto Alegre, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Bandarra, Paulo. Nucleo de Reabilitação da Fauna Silvestre-UFPel, Pelotas, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Trainini, Gustavo. Hayabusa Consultoria Ambiental, São Francisco de Paula, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Stocker, Julian. Hayabusa Consultoria Ambiental, São Francisco de Paula, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Giani, Denise. Hayabusa Consultoria Ambiental, São Francisco de Paula, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Fortes, Flávia Borges. Secretaria da Agricultura Pecuária e Desenvolvimento Rural (SEAPDR). Programa Estadual de Sanidade Avícola (PESA), Porto Alegre, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Goenaga, Silvina. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas; Argentina.Fil: Reck, José. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.West Nile virus (WNV) is a mosquito-borne Flavivirus that can affect birds, horses, and humans, and is the only zoonotic Flavivirus that has been identified in six continents. In Brazil, until 2010, there was no evidence of WNV circulation. Recently, the virus was isolated from a horse with encephalitis, and the first human cases were registered in Brazil. Despite that, there is still no information on the enzootic cycle of this virus in birds or wildlife. This study aimed to investigate whether there is evidence of WNV circulation among wild birds from Southern Brazil. For this, we used free-living wild raptors (live-trapped or rescued) as potential sentinels to investigate the presence of WNV antibodies using ELISA and plaque reduction neutralization test (PRNT) assay. In addition, the presence of nucleic acids from Flavivirus family members was investigated. None of the birds sampled presented clinical findings compatible with WNV. Of the 200 serum samples from birds of prey belonging to 21 species, ten (5%) were positive for the presence of WNV antibodies on ELISA testing. The PRNT test did not confirm the ELISA results, but indicated that three birds had possibly been exposed to Saint Louis encephalitis virus (SLEV). All samples were negative for Flavivirus RNA. The results presented here evince the need for permanent surveillance for emerging flaviviruses in Brazil, as well as for a contingency policy in the case of human/animal outbreaks, particularly in high-risk areas

Serosurvey of West Nile virus (WNV) in free-ranging raptors from Brazil

Fil: Morel, Ana Paula. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Webster, Anelise. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Zitelli, Larissa Calo. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Umeno, Karen. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Souza, Ugo Araújo. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Prusch, Fabiane. Clinica Veterinária Toca dos Bichos, Porto Alegre, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Anicet, Marina. Clinica Veterinária Toca dos Bichos, Porto Alegre, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Marsicano, Gleide. Clinica Veterinária Toca dos Bichos, Porto Alegre, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Bandarra, Paulo. Nucleo de Reabilitação da Fauna Silvestre-UFPel, Pelotas, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Trainini, Gustavo. Hayabusa Consultoria Ambiental, São Francisco de Paula, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Stocker, Julian. Hayabusa Consultoria Ambiental, São Francisco de Paula, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Giani, Denise. Hayabusa Consultoria Ambiental, São Francisco de Paula, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Fortes, Flávia Borges. Secretaria da Agricultura Pecuária e Desenvolvimento Rural (SEAPDR). Programa Estadual de Sanidade Avícola (PESA), Porto Alegre, Río Grande del Sur; Brasil.Fil: Goenaga, Silvina. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas; Argentina.Fil: Reck, José. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Centro de Pesquisa em Saúde Animal, Eldorado do Sul, Río Grande del Sur; Brasil.West Nile virus (WNV) is a mosquito-borne Flavivirus that can affect birds, horses, and humans, and is the only zoonotic Flavivirus that has been identified in six continents. In Brazil, until 2010, there was no evidence of WNV circulation. Recently, the virus was isolated from a horse with encephalitis, and the first human cases were registered in Brazil. Despite that, there is still no information on the enzootic cycle of this virus in birds or wildlife. This study aimed to investigate whether there is evidence of WNV circulation among wild birds from Southern Brazil. For this, we used free-living wild raptors (live-trapped or rescued) as potential sentinels to investigate the presence of WNV antibodies using ELISA and plaque reduction neutralization test (PRNT) assay. In addition, the presence of nucleic acids from Flavivirus family members was investigated. None of the birds sampled presented clinical findings compatible with WNV. Of the 200 serum samples from birds of prey belonging to 21 species, ten (5%) were positive for the presence of WNV antibodies on ELISA testing. The PRNT test did not confirm the ELISA results, but indicated that three birds had possibly been exposed to Saint Louis encephalitis virus (SLEV). All samples were negative for Flavivirus RNA. The results presented here evince the need for permanent surveillance for emerging flaviviruses in Brazil, as well as for a contingency policy in the case of human/animal outbreaks, particularly in high-risk areas

Combined fit to the spectrum and composition data measured by the Pierre Auger Observatory including magnetic horizon effects

The measurements by the Pierre Auger Observatory of the energy spectrum and mass composition of cosmic rays can be interpreted assuming the presence of two extragalactic source populations, one dominating the flux at energies above a few EeV and the other below. To fit the data ignoring magnetic field effects, the high-energy population needs to accelerate a mixture of nuclei with very hard spectra, at odds with the approximate E$^{-2}$ shape expected from diffusive shock acceleration. The presence of turbulent extragalactic magnetic fields in the region between the closest sources and the Earth can significantly modify the observed CR spectrum with respect to that emitted by the sources, reducing the flux of low-rigidity particles that reach the Earth. We here take into account this magnetic horizon effect in the combined fit of the spectrum and shower depth distributions, exploring the possibility that a spectrum for the high-energy population sources with a shape closer to E$^{-2}$ be able to explain the observations