Determinação da atividade de glicogênio fosforilase em culturas de células de Sertoli de ratos de diferentes idades

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Efectos de los bisfosfonatos en diferentes áreas de la placa de crecimiento epifisario de ratas

Bisphosphonates (BIS) are indicated for several clinical disorders (e.g., osteoporosis). However, BIS has been associated with osteonecrosis and alterations in osteoclastogenesis and skeletal development. This study aimed to evaluate the effects of BIS (zoledronic acid -ZA and alendronate sodium-AS) onzones of the growth plateofrat femur. Animals (Wistar rats, n = 19) were divided intogroups: 1) AS Group: animals received alendronate sodium orally (3 mg/kgperday); 2) ZA Group: ZA was administered intraperitoneally (0.2 mg/kg perweek); and 3) Control Group (CG): a vehicle was administered. Animals were euthanized 21 days after the treatment, and femurs were collected forhistological analysis. The images of allzones (resting, proliferative, hypertrophic, and calcified) were processed by the Qcapture® software providing a 40 and 400-fold increase. ZA decreased epiphyseal growth plate cell zones (ZA Group vs. CG) in most cases. Likewise, AS diminished the proliferative zone (AS Group vs. CG). Furthermore, ZA increased the calcified zon e (ZA Group vs. CG). Previous works demonstrated that BIS decrease the epiphyseal disc. This reduction is probably due to the shortening of the cellular zones that undergoes calcification/ossification. The present results suggest that BIS should be carefully indicated because these drugs might accelerate epiphyseal closure.Os bisfosfonatos (BIS) são indicados para diversas condições clínicas, como a osteoporose. No entanto, os BIS têm sido associado a osteonecrose, alterações na osteoclastogênese e no desenvolvimento esquelético. O presente estudo testou a hipótese de que os BIS (alendronato de sódio -AS e ácido zoledrônico -ZA) modificam a espessura das zonas da placa de crescimento do fêmur de ratos. Ratos Wistar (n = 19) foram divididos em: 1) Grupo AS: alendronato de sódio por via oral (3 mg / kg / dia); 2) Grupo ZA: administração de ácido zoledrônico por via intraperitoneal (0,2 mg / kg / semana); e 3)Grupo Controle (GC): sem administração de medicamentos. Após 21 dias de tratamento, os animais foram eutanasiados e os fêmures coletados para análise histológica. As imagens de diferentes zonas da placa de crescimento (zonas de repouso, proliferativas, hipertróficas e calcificadas) foram capturadas usando o software Qcapture® (aumento de 40 e 400 vezes). ZA diminuiu as zonas de células da placa (Grupo ZA vs. CG) na maioria dos casos. Da mesma forma, o AS causou umadiminuição da zona proliferativa (Grupo AS vs. GC). Além disso, ratos tratados com ZA apresentaram aumento da espessura da zona calcificada (Grupo ZA vs. GC). Estudos anteriores mostraram efeito dos BIS na redução da espessura do disco epifisário. Essa redução da placa de crescimento provavelmente deve-se ao encurtamento das zonas celulares que sofrem calcificação e ossificação. Nossos resultados sugerem que os BIS devem ser indicados com cautela, pois podem acelerar o fechamento epifisário.Los bisfosfonatos (BIS) están indicados para varias afecciones clínicas, como la osteoporosis. Sin embargo, los BIS se han asociado con osteonecrosis, alteracionesen la osteoclastogénesis y desarrollo esquelético. El presente estudio probó la hipótesis de que BIS (alendronato sódico -AS y ácido zoledrónico -ZA) modifica el grosor de las zonas de la placa de crecimiento del fémur de rata. Las ratas Wistar (n = 19)se dividieron en: 1) Grupo AS: alendronato sódico oral (3 mg / kg / día); 2) Grupo ZA: administración intraperitoneal de ácido zoledrónico (0,2 mg / kg / semana); y 3) Grupo Control (GC): sin administración de medicación. Después de 21 días de tratamiento, se sacrificó a los animales y se recogieron los fémures para análisis histológico. Se capturaron imágenes de diferentes zonas de la placa de crecimiento (zonas de reposo, proliferativas, hipertróficas y calcificadas) utilizando el software Qcapture® (aumento 40 y 400 veces). ZA disminuyó las zonas de células de placa (Grupo ZA frente a CG) en la mayoría de los casos. Asimismo, AS provocó una disminución en la zona proliferativa (Grupo AS vs. GC). Además, las ratas tratadas con ZA mostraron un mayor grosorde la zona calcificada (Grupo ZA frente aGC). Estudios anteriores han demostrado el efecto de BIS en la reducción del grosor del disco epifisario. Esta reducción de la placa de crecimiento probablemente se deba al acortamiento de las zonas celulares que sufren calcificación y osificación. Nuestros resultados sugieren que los BIS deben indicarse con precaución, ya que pueden acelerar el cierre epifisari

BDNF as an effect modifier for gender effects on pain thresholds in healthy subjects

AbstractBDNF is an important marker of neuronal plasticity. It has also been associated with pain processing. Increased BDNF levels are observed in chronic pain syndromes. In order to understand the role of BDNF associated with other factors such as gender on experimental pain we aimed to determine whether experimental heat or pressure pain threshold is correlated with brain derived neurotrophic factor (BDNF) level, gender and age. Heat pain threshold and pressure pain threshold were measured in 49 healthy volunteers (27 females). The multivariate linear regression models (on heat and pressure pain thresholds) revealed a significant effect of gender (p=0.001 for both models), serum BDNF (p<0.004 for both models) and interaction between BDNF and gender (<0.001 for both models). In fact, when adjusting for BDNF levels and age, heat and pressure pain thresholds were significantly reduced in women as compared to men (p<0.001 for both models). These effects were not observed when gender was analyzed alone. These finding suggests that experimental heat and pressure pain threshold is gender-related and BDNF dependent. In fact BDNF has a facilitatory effect on pain threshold in females but has an opposite effect in males; supporting the notion that BDNF is an effect modifier of the gender effects on pain threshold in healthy subjects

Neurobiological Effects of Transcranial Direct Current Stimulation: A Review

Transcranial Direct Current Stimulation (tDCS) is a non-invasive brain stimulation technique that is affordable and easy to operate compared to other neuromodulation techniques. Anodal stimulation increases cortical excitability, while the cathodal stimulation decreases it. Although tDCS is a promising treatment approach for chronic pain as well as for neuropsychiatric diseases and other neurological disorders, several complex neurobiological mechanisms that are not well understood are involved in its effect. The purpose of this systematic review is to summarize the current knowledge regarding the neurobiological mechanisms involved in the effects of tDCS. The initial search resulted in 171 articles. After applying inclusion and exclusion criteria, we screened 32 full-text articles to extract findings about the neurobiology of tDCS effects including investigation of cortical excitability parameters. Overall, these findings show that tDCS involves a cascade of events at the cellular and molecular levels. Moreover, tDCS is associated with glutamatergic, GABAergic, dopaminergic, serotonergic, and cholinergic activity modulation. Though these studies provide important advancements toward the understanding of mechanisms underlying tDCS effects, further studies are needed to integrate these mechanisms as to optimize clinical development of tDCS

Liberação de S100B in vitro modulada por adrenalina

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Efeitos do resveratrol sobre as células estreladas hepáticas

As células estreladas hepáticas (HSC) são pericitos específicos do fígado, são células armazenadoras de gordura e produzem componentes de matriz extracelular. As HSCs ao serem ativadas, proliferam, perdem as gotas lipídicas e aumentam a secreção de matriz extracelular. O controle da modulação fenotípica e da proliferação das HSCs é de suma importância para entendermos a fibrose hepática. Esta pesquisa foi realizada com a linhagem celular GRX (representativa das HSCs murinas) obtida a partir de reações fibrogranulomatosas inflamatórias. Estudos anteriores, em nosso laboratório, pesquisaram a ação de diferentes drogas sobre a modulação destas células, tais como: retinol, pentoxifilina, indometacina e insulina. Tem sido relatado que o resveratrol (3,4,5 trihidroxiestilbeno) (RSV) tem ação antioxidante, antiinflamatória, antiproliferativa bem como tem capacidade de ativar ou inibir a transcrição de enzimas envolvidas na regulação de vários eventos celulares, por exemplo metabolismo de lipídeos. Por isso, procuramos utilizar o RSV, um polifenol natural presente na casca das uvas e conseqüentemente em grande quantidade de vinhos tintos, neste modelo celular. As células GRX foram cultivadas (12, 24 e 120 h) em meio DMEM com 5% SFB acrescido ou não de RSV (100 nM, 1µM ou 100 µM) e retinol (RHO) (5µM). Nossos estudos demonstraram que tratamento por 120 h com RSV (100nM e 1µM) inibiu a proliferação das células GRX diminuindo em 35% o número de células. Analisando o efeito de 1µM de RSV sobre o ciclo celular e a apoptose, verificamos que após 120 h de tratamento houve um aumento das células na fase S e Sub-G1. Constatou-se condensação e fragmentação nuclear, sugerindo um possível efeito pró-apoptótico do RSV sobre a célula GRX. Observou-se que o tratamento com RSV (100 nM) por 5 dias não induziu a formação de gotas lipídicas nas células GRX. Porém ao acrescentar RSV+RHO, constatou-se que o RSV não interferiu na síntese e acúmulo de lipídios, provocado pelo RHO (5µM). Propondo que a lipogênese neste modelo de tratamento possa estar associada com a ação da sirtuina (deacetilase NAD-dependente) e do PPARy (receptores ativados por proliferadores de peroxissomos), determinou-se a expressão do mRNA destas duas proteínas. Observou-se que o RSV (100 nM) aumenta a expressão do mRNA da sirtuina 1 (SIRT1) e diminui a expressão de PPARy. Porém, o tratamento com RSV+RHO provocou uma redução na expressão da SIRT1, alterando a relação PPARy/SIRT1, promovendo a síntese de lipídios. Nossos dados mostraram que após 24h de tratamento, o RSV não alterou a incorporação de acetato [C14] em triacilglicerídios (TG), enquanto que, o RHO ou RSV+RHO aumentaram a incorporação do marcador nestes lipídios. O depósito de TG permaneceu constante, porém a síntese diminuiu com o tempo de tratamento. Acredita-se que estes compostos atuam por mecanismos moleculares diferentes modulando o metabolismo de lipídios. Sugerimos, de acordo dados da literatura, que o RHO atua via receptor nuclear LXR formando um heterodímero com PPARy, favorecendo a lipogênese. Por outro lado, o RSV ativa a SIRT1, que reprime o PGC1α (coativador do PPARy). Logo, a inibição do PPARy pelo RSV inibe consequentemente a lipogênese. Concluímos que o resveratrol apresenta um efeito anti-proliferativo, pró-apoptótico sem induzir o fenótipo lipocítico nas células GRX. Desta forma, se mantém em equilíbrio, no espaço de Disse, as células mesenquimais quiescentes e ativadas, contribuindo para restabelecer a homeostase hepática.The hepatic stellate cells (HSC) are liver-specific pericytes, as well as fat-storing cells and they are also responsible for the extracellular matrix components production. When activated, HSCs lose lipid droplets and increase extracellular matrix secretion. The phenotypical modulation and the HSCs proliferation control have paramount importance to understand the hepatic fibrosis. This research has been carried out with the GRX cell line (HSCs murine representative) which was obtained from inflammatory fibrogranulomatous reactions. Previous studies in our laboratory investigated the action of different drugs on the modulation of these cells, such as: retinol, pentoxifilin, indomethacin and insulin. Resveratrol (RSV) has been referred to as having antioxidant, antiinflammatory and antiproliferative action (3,4,5 trihidroxiestilbeno), as well as the capacity to activate or inhibit the transcription of enzymes involved in the regulation of several cell events, as, for example, lipid metabolism Therefore, we used RSV, which is a natural polyphenol found in the grapes skin and, consequently, in large amounts of red wine, in this cell model. The GRX cells were cultivated (12, 24 and 120 h) in medium DMEM with 5% SFB added RSV or not (100 nM, 1µM or 100 µM) and retinol (RHO) (5µM). Our studies demonstrated that a 120 h treatment with RSV (beginning with 100 nM) inhibited GRX cells proliferation, thus decreasing the cell number in 35%. Assessing the effect of 1µM RSV on the cell cycle and the apoptosis, we found that, after this treatment period, there was an increase of cells in phases S and Sub-G1. Nuclear condensation and fragmentation were observed, which suggested a probable pro-apoptotic RSV effect on the GRX cell. The RSV (100 nM) 120 h treatment did not induce lipid droplets formation in the GRX cells. However, RSV did not interfere in the synthesis or accumulation of lipids caused by RHO (5µM), when RSV+RHO were added. Considering that the lipogenesis in this treatment model might be associated with sirtuin action (deacetilase NAD-dependent) and PPARy (receptors activated by peroxisome proliferators), the mRNA expression of these two proteins was determined. RSV (100 nM) proved to increase sirtuin mRNA expression 1 (SIRT1) and decrease PPARy.expression. However, the treatment with the RSV+RHO caused a reduction in the SIRT1 expression thus alterating the relation PPARy/SIRT1, which promoted the lypid synthesis. Our data showed that after the 24-hour treatment RSV did not change acetate incorporation [C14] in triacylglicerides (TG), whilst RHO or RSV+RHO increased the marker incorporation in these lipids. The TG deposit remained constant, but the synthesis diminished during the treatment period. It appears that these compounds act through different molecular mechanisms when modulating lipids metabolism. According to literature data, we suggest that RHO acts via LXR nuclear receptor, thus forming an heterodímer with PPARy, which favors lypogenesis. On the other hand, RSV activates SIRT1, which inhibits PGC1α (PPARy coactivator). Therefore, the PPARy inhibition by RSV consequently inhibits lypogenesis. We concluded that RSV presents pro-apoptotic, anti-proliferative effect, without inducing lypocytic phenotype in the GRX cells. By this means the mesenquimal activated quiescent cells keep their balance at the Disse space, thus contributing with the hepatic homeostasis restoration

Efeitos do resveratrol sobre as células estreladas hepáticas

As células estreladas hepáticas (HSC) são pericitos específicos do fígado, são células armazenadoras de gordura e produzem componentes de matriz extracelular. As HSCs ao serem ativadas, proliferam, perdem as gotas lipídicas e aumentam a secreção de matriz extracelular. O controle da modulação fenotípica e da proliferação das HSCs é de suma importância para entendermos a fibrose hepática. Esta pesquisa foi realizada com a linhagem celular GRX (representativa das HSCs murinas) obtida a partir de reações fibrogranulomatosas inflamatórias. Estudos anteriores, em nosso laboratório, pesquisaram a ação de diferentes drogas sobre a modulação destas células, tais como: retinol, pentoxifilina, indometacina e insulina. Tem sido relatado que o resveratrol (3,4,5 trihidroxiestilbeno) (RSV) tem ação antioxidante, antiinflamatória, antiproliferativa bem como tem capacidade de ativar ou inibir a transcrição de enzimas envolvidas na regulação de vários eventos celulares, por exemplo metabolismo de lipídeos. Por isso, procuramos utilizar o RSV, um polifenol natural presente na casca das uvas e conseqüentemente em grande quantidade de vinhos tintos, neste modelo celular. As células GRX foram cultivadas (12, 24 e 120 h) em meio DMEM com 5% SFB acrescido ou não de RSV (100 nM, 1µM ou 100 µM) e retinol (RHO) (5µM). Nossos estudos demonstraram que tratamento por 120 h com RSV (100nM e 1µM) inibiu a proliferação das células GRX diminuindo em 35% o número de células. Analisando o efeito de 1µM de RSV sobre o ciclo celular e a apoptose, verificamos que após 120 h de tratamento houve um aumento das células na fase S e Sub-G1. Constatou-se condensação e fragmentação nuclear, sugerindo um possível efeito pró-apoptótico do RSV sobre a célula GRX. Observou-se que o tratamento com RSV (100 nM) por 5 dias não induziu a formação de gotas lipídicas nas células GRX. Porém ao acrescentar RSV+RHO, constatou-se que o RSV não interferiu na síntese e acúmulo de lipídios, provocado pelo RHO (5µM). Propondo que a lipogênese neste modelo de tratamento possa estar associada com a ação da sirtuina (deacetilase NAD-dependente) e do PPARy (receptores ativados por proliferadores de peroxissomos), determinou-se a expressão do mRNA destas duas proteínas. Observou-se que o RSV (100 nM) aumenta a expressão do mRNA da sirtuina 1 (SIRT1) e diminui a expressão de PPARy. Porém, o tratamento com RSV+RHO provocou uma redução na expressão da SIRT1, alterando a relação PPARy/SIRT1, promovendo a síntese de lipídios. Nossos dados mostraram que após 24h de tratamento, o RSV não alterou a incorporação de acetato [C14] em triacilglicerídios (TG), enquanto que, o RHO ou RSV+RHO aumentaram a incorporação do marcador nestes lipídios. O depósito de TG permaneceu constante, porém a síntese diminuiu com o tempo de tratamento. Acredita-se que estes compostos atuam por mecanismos moleculares diferentes modulando o metabolismo de lipídios. Sugerimos, de acordo dados da literatura, que o RHO atua via receptor nuclear LXR formando um heterodímero com PPARy, favorecendo a lipogênese. Por outro lado, o RSV ativa a SIRT1, que reprime o PGC1α (coativador do PPARy). Logo, a inibição do PPARy pelo RSV inibe consequentemente a lipogênese. Concluímos que o resveratrol apresenta um efeito anti-proliferativo, pró-apoptótico sem induzir o fenótipo lipocítico nas células GRX. Desta forma, se mantém em equilíbrio, no espaço de Disse, as células mesenquimais quiescentes e ativadas, contribuindo para restabelecer a homeostase hepática.The hepatic stellate cells (HSC) are liver-specific pericytes, as well as fat-storing cells and they are also responsible for the extracellular matrix components production. When activated, HSCs lose lipid droplets and increase extracellular matrix secretion. The phenotypical modulation and the HSCs proliferation control have paramount importance to understand the hepatic fibrosis. This research has been carried out with the GRX cell line (HSCs murine representative) which was obtained from inflammatory fibrogranulomatous reactions. Previous studies in our laboratory investigated the action of different drugs on the modulation of these cells, such as: retinol, pentoxifilin, indomethacin and insulin. Resveratrol (RSV) has been referred to as having antioxidant, antiinflammatory and antiproliferative action (3,4,5 trihidroxiestilbeno), as well as the capacity to activate or inhibit the transcription of enzymes involved in the regulation of several cell events, as, for example, lipid metabolism Therefore, we used RSV, which is a natural polyphenol found in the grapes skin and, consequently, in large amounts of red wine, in this cell model. The GRX cells were cultivated (12, 24 and 120 h) in medium DMEM with 5% SFB added RSV or not (100 nM, 1µM or 100 µM) and retinol (RHO) (5µM). Our studies demonstrated that a 120 h treatment with RSV (beginning with 100 nM) inhibited GRX cells proliferation, thus decreasing the cell number in 35%. Assessing the effect of 1µM RSV on the cell cycle and the apoptosis, we found that, after this treatment period, there was an increase of cells in phases S and Sub-G1. Nuclear condensation and fragmentation were observed, which suggested a probable pro-apoptotic RSV effect on the GRX cell. The RSV (100 nM) 120 h treatment did not induce lipid droplets formation in the GRX cells. However, RSV did not interfere in the synthesis or accumulation of lipids caused by RHO (5µM), when RSV+RHO were added. Considering that the lipogenesis in this treatment model might be associated with sirtuin action (deacetilase NAD-dependent) and PPARy (receptors activated by peroxisome proliferators), the mRNA expression of these two proteins was determined. RSV (100 nM) proved to increase sirtuin mRNA expression 1 (SIRT1) and decrease PPARy.expression. However, the treatment with the RSV+RHO caused a reduction in the SIRT1 expression thus alterating the relation PPARy/SIRT1, which promoted the lypid synthesis. Our data showed that after the 24-hour treatment RSV did not change acetate incorporation [C14] in triacylglicerides (TG), whilst RHO or RSV+RHO increased the marker incorporation in these lipids. The TG deposit remained constant, but the synthesis diminished during the treatment period. It appears that these compounds act through different molecular mechanisms when modulating lipids metabolism. According to literature data, we suggest that RHO acts via LXR nuclear receptor, thus forming an heterodímer with PPARy, which favors lypogenesis. On the other hand, RSV activates SIRT1, which inhibits PGC1α (PPARy coactivator). Therefore, the PPARy inhibition by RSV consequently inhibits lypogenesis. We concluded that RSV presents pro-apoptotic, anti-proliferative effect, without inducing lypocytic phenotype in the GRX cells. By this means the mesenquimal activated quiescent cells keep their balance at the Disse space, thus contributing with the hepatic homeostasis restoration

Determinação da atividade de glicogênio fosforilase em culturas de células de Sertoli de ratos de diferentes idades

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