Síntese enzímica de mono e dinucleosídeos polifosfatados : Acção catalítica da sintétase de Acil-Coenzima A de Pseudomonas fragi e da Luciférase de Photinus pyralis

Dissertação de Doutoramento em Medicina apresentada à Faculdade de Medicina da Universidade do Porto1 RESUMO E CONCLUSÕES A crescente convicção de que os mono e os dinucleosídeos polifosfatados são modu-ladores intra e extracelulares de processos biológicos justifica o nosso interesse pela sua síntese.Tendo sido formulada a hipótese de que a síntese dos dinucleosídeos polifosfatados poderia ser catalisada por enzimas capazes de formar acil-adenilatos com libertação concomitante de pirofosfato, estudámos esta possibilidade no caso concreto da sintétase de acil-CoA de Pseudomonas fragi (EC 6.2.1.3). Demonstrámos que esta enzima catalisa a síntese de adenosina-5 -tetrafosfato (p4A) e adenosina-5 -pentafosfato (p5A) a partir de ATP e tripolifosfato (P3) ou tetrapolifosfato (P4), respectivamente. O dATP, a adenosina-5 -O-[g-tiotrifosfato] (ATPgS), a adenosina(5 )tetrafosfo(5 )adenosina (Ap4A) e a adeno-sina(5 )pentafosfo(5 )adenosina (Ap5A) também eram substratos da reacção, gerando, na presença de P3, p4dA ou p4A. O UTP, o CTP ou o AMP não eram dadores de nucleotídeo. Os valores de Km para o ATP e o P3 eram, nas condições de ensaio utilizadas, 0,015 e 1,3 mM, respectivamente. A actividade catalítica dependia da presença de catiões bivalentes e um máximo de velocidade foi obtida na presença de MgCl2 ou CoCl2 equimolecular com o somatório de ATP e P3. As velocidades relativas de síntese de p4A com distintos catiões bivalentes foram: Mg=Co>Mn=Zn>>Ca. Um máximo e um mínimo de actividade foram medidos nos valores de pH de 5,5 e 8,2, respectivamente; o oposto foi observado no caso da actividade de síntese de palmitil-CoA, com um máximo a pH 8,2. A razão entre as actividades de síntese de palmitil-CoA e de p4A era cerca de 10 (a pH 5,5) e cerca de 200 (a pH 8,2). A coenzima A inibia a síntese de p4A e o seu efeito inibitório era antagonizado por ácidos gordos.Com uma actividade muito mais baixa, a sintétase de acil-CoA de Pseudomonas fragi também catalisava a síntese de Ap4A (a partir de ATP), Ap5A (a partir de p4A) e adenosina(5 )tetrafosfo(5 )nucleosídeos (Ap4N) a parti ..

Obesidad y alteraciones metabólicas: Factores genéticos y ambientales en población mediterránea española.

RESUMEN INTRODUCCIÓN: La obesidad es una enfermedad metabólica crónica que se define como un exceso de grasa corporal, que suele ir acompañado de un peso superior al considerado como normal para una persona con la misma talla, edad y sexo. La etiología de este síndrome es heterogénea, multifactorial y compleja, caracterizada por el aumento de tejido adiposo, influida por factores metabólicos, fisiológicos, genéticos, celulares, moleculares, culturales y sociales. HIPÓTESIS Y OBJETIVOS: La obesidad es una enfermedad multifactorial, resultado de la interacción entre la susceptibilidad genética y de factores ambientales, entre los cuales la dieta, el ejercicio físico, el estrés, los acontecimientos vitales, así como el consumo de tabaco, de alcohol y de otras drogas, desempeñan un papel fundamental. Además, el exceso de peso actúa como un importante factor etiológico de dislipemias, hipertensión, hiperuricemia y diabetes, fenotipos que confieren un mayor riesgo en las enfermedades cardiovasculares. Conocer la prevalencia de obesidad y sobrepeso en la población general de la Comunidad Valenciana, y analizar las variables del estilo de vida asociadas a la misma. Estimar la contribución genética y ambiental al índice de masa corporal y a las alteraciones del metabolismo lipídico en la población general y en una muestra de obesos de origen hospitalario de la Comunidad Valenciana. MATERIAL Y MÉTODOS: Estudio transversal en una muestra aleatoria de pacientes que acuden al Centro de Salud de Paiporta y al Hospital General de Valencia, en aquellos que de forma voluntaria aceptaron participar en éste. Se les realizaron análisis bioquímicos, genéticos, toma de medidas antropométricas, de tensión arterial y finalmente se les administró un cuestionario sobre datos sociodemográficos, hábitos dietéticos, encuesta alimentaria, antecedentes personales y familiares, ejercicio físico, y otras variables del estilo de vida. Posteriormente se creó una base de datos con el paquete estadístico SPSS, donde se recogieron todas las variables incluidas en el cuestionario, así como las variables analíticas obtenidas, para su análisis estadístico. RESULTADOS: Existe una alta prevalencia, mayor en mujeres, de sobrepeso y obesidad en la población de Atención Primaria de la Comunidad Valenciana. Este exceso de peso corporal se asocia con otras variables del metabolismo lipídico e hidrocarbonado, tensión arterial y otros factores de riesgo cardiovascular. Al estudiar la relación entre los polimorfismos genéticos en los genes candidatos seleccionados, se han obtenido varias asociaciones estadísticamente significativas con las distintas variables antropométricas, con el metabolismo lipídico, con la ingestión de alimentos y hábitos dietéticos, así como con enfermedades relacionadas con la obesidad. Se hallaron interacciones gen-gen entre los polimorfismos analizados entre los genes de la APOE y CETP, leptina y receptor de la leptina, y lipoproteinlipasa y receptor beta 3 adrenérgico. CONCLUSIONES: Existe una gran complejidad de las múltiples contribuciones genéticas y ambientales en la etiología de la obesidad y parámetros relacionados, que es necesario seguir estudiando y analizando desde la integración genómica y ambiental para obtener un mejor conocimiento que posibilite una mayor individualización en la prevención y tratamiento. __________________________________________________________________________________________________INTRODUCTION: Obesity is a chronic metabolic disease with a weight excess. This syndrome is due to some heterogeneous, multifactorial and complex causes. It is characterized by an increased fat tissue and it is influenced by metabolics, physiologicals, genetics, cellular, molecular, cultural and socials factors. HYPOTHESIS AND OBJECTIVES: Obesity is a multifactorial disorder which is the result of the interaction between genetics and environmental factors like diet, physical activity, stress, or smoke, alcohol and drugs consumption. Weight gain is related to lipid disorders, hypertension, diabetes and an increased cardiovascular risk. The aim of this study is to investigate the obesity and overweight prevalence in the general population from the Comunidad Valenciana analizing the associated lifestyle factors, and to estimate the genetic and environmental contribution to the body mass index and to the lipid metabolism in this general population and in an obese group of a hospital population from the Comunidad Valenciana. MATERIAL AND METHODS: A cross-sectional study has been carried out in patients who were consecutively referred to the Primary Care Center of Paiporta and the General Hospital of Valencia. Anthropometrical parameters were measured. Demographic, lifestyle, anthropometric, biochemical and clinical variables were obtained. DNA was extracted and some polymorphisms were determined. Statistical analyses including logistic regression and means comparison were carried out by means of SPSS statistical program. Multivariate regression models with interaction terms were applied to test gene-gene interactions. RESULTS: There is a high prevalence of overweight and obesity in the Primary Care population from Comunidad Valenciana. Excess weight was associated with increased lipid and glucose concentrations, hypertension and others cardiovascular risk factors. Statistically significant associations were found between some polymorphisms with anthropometrics measures, lipid concentrations, food habits and diseases related to obesity. We observed gene-gene interactions between APOE and CETP, leptin and leptin receptor, lipoproteinlipase and beta 3 adrenergic receptor. CONCLUSION: Obesity is produced by the action of complex environmental and genetic factors. It is necessary to study and to analyse this disease from an integration model of the genomic and environmental factors to obtain a better knowledge which can be tailored to an individual prevention and treatment